黑龍江省野生黑木耳菌種的ISSR指紋分析及SCAR標(biāo)記.pdf

1、黑龍江省野生木耳菌種資源豐富，所以如何客觀評(píng)價(jià)黑龍江地區(qū)黑木耳野生菌株種質(zhì)資源的遺傳多樣性，通過掌握不同的野生菌株的鑒別方法，這用于充分保護(hù)和利用野生黑木耳種質(zhì)資源，對(duì)開展黑木耳的良種選育，保護(hù)黑木耳品種知識(shí)產(chǎn)權(quán)，加強(qiáng)黑木耳菌種質(zhì)量管理的基礎(chǔ)十分重要。本研究利用從黑龍江省各地收集的24個(gè)野生黑木耳菌株及一個(gè)栽培菌種，應(yīng)用DNA標(biāo)記技術(shù)（ISSR，SCAR）對(duì)此進(jìn)行了野生黑木耳菌種的分子指紋分析。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.24

2、個(gè)供試野生黑木耳菌種來源均來自野外采集，本實(shí)驗(yàn)采用菌種分離的方法，將生長于木段上的野生黑木耳，經(jīng)多步分離和培養(yǎng)，以及出耳實(shí)驗(yàn)等方法，證明分離得到的菌株是純的野生黑木耳菌株。
　　 2.在對(duì)擴(kuò)增體系進(jìn)行正交優(yōu)化的基礎(chǔ)上，應(yīng)用篩選出能擴(kuò)增出穩(wěn)定性和可重復(fù)性高，而且多態(tài)性豐富的帶型的10個(gè)多態(tài)性引物對(duì)24個(gè)野生木耳菌株以及一個(gè)對(duì)照栽培黑木耳菌株黑29，進(jìn)行基因組PCR擴(kuò)增，總共產(chǎn)生88條DNA帶，其中多態(tài)性條帶為83條，呈現(xiàn)94.3％

3、的多態(tài)性，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出8.8條帶。從88條DNA帶中選擇32個(gè)最佳的ISSR標(biāo)記譜帶，構(gòu)建了25個(gè)供試菌株的ISSR指紋圖譜模式圖，并將其計(jì)算機(jī)化。試驗(yàn)表明ISSR標(biāo)-記技術(shù)可以快速、靈敏、準(zhǔn)確地應(yīng)用于黑木耳栽培菌株的鑒別。
　　 3.對(duì)于ISSR擴(kuò)增結(jié)果進(jìn)行分析后獲得了4個(gè)菌株的5條特異性條帶，將其中分別來自的供試大興安嶺翠峰菌株（引物P12）和方正菌種（引物P24）的2條特異性條帶，通過回收克隆并測(cè)序，應(yīng)用軟件Prim

4、erPremier5.0設(shè)計(jì)SCAR標(biāo)記引物對(duì)，成功地將它們轉(zhuǎn)化為SCAR標(biāo)記，用于對(duì)菌株大興安嶺翠峰和方正進(jìn)行特異性鑒定。這些SCAR標(biāo)記的建立，為黑木耳野生菌株的鑒定提供了準(zhǔn)確可靠和迅捷方便的新途徑。
　　 4.經(jīng)ISSR的DNA指紋分析結(jié)果表明，在一定相似水平上，25個(gè)菌株可聚為四大類：第一大類野生菌株主要來自伊春地區(qū)以及加格達(dá)奇地區(qū)采集的木耳野生菌種；第二大類的菌種主要是來自大興安嶺，加格達(dá)奇，亞布力牡丹江等地區(qū)等周邊地

5、區(qū)的采集的野生木耳菌種；第三大類則是木耳對(duì)比的栽培菌種黑木耳29號(hào)。第四類為單一的來自大興安嶺翠峰采集的野生木耳菌種。該結(jié)果一方面表明我國野生黑木耳菌種在同一地區(qū)內(nèi)的親緣相似度較高，如伊春南岔與伊春嘉蔭，加格達(dá)奇二號(hào)與加格達(dá)奇三號(hào)，另一方面可能因?yàn)閰^(qū)域面積太大而采集的地點(diǎn)不同，有的采集自同一片區(qū)域的野生菌種的親緣關(guān)系相差較遠(yuǎn)如加格達(dá)奇三號(hào)與加格達(dá)奇一號(hào)之間親緣關(guān)系就相差較遠(yuǎn)。再次栽培菌種可能是因?yàn)轳Z化和栽培的關(guān)系與采集的野生菌種的親緣相