納米氧化銅的穩(wěn)定性及對(duì)肝細(xì)胞生長(zhǎng)代謝的影響.pdf

1、試驗(yàn)一模擬胃液對(duì)納米氧化銅和微米氧化銅穩(wěn)定性的影響
　　 本試驗(yàn)以銅離子選擇電極法檢測(cè)不同時(shí)間不同pH條件下樣品溶液中銅離子的濃度，探索人工胃液對(duì)納米氧化銅和微米氧化銅穩(wěn)定性的影響，確定納米氧化銅在不同pH條件下的存在狀態(tài)，推論納米氧化銅在消化道內(nèi)吸收的機(jī)制。結(jié)果顯示，40min時(shí)各試驗(yàn)組Cu2+濃度達(dá)到較穩(wěn)定的狀態(tài)，以后變化均不顯著（P＞0.05）;pH2-4時(shí)各試驗(yàn)組Cu2+濃度均顯著（P＜0.05）高于pH5-7時(shí)，納米氧

2、化銅組顯著高于氧化銅組（P＜0.05）;人工胃液中納米氧化銅組Cu2+濃度顯著高于非胃液組（P＜0.05），且在pH2-4時(shí)最為明顯，人工胃液對(duì)微米氧化銅影響不顯著(P＞0.05)?？梢?，隨著pH值的降低各試驗(yàn)組Cu2+濃度均升高，納米氧化銅組更為明顯且始終高于微米氧化銅組，表明H+可以誘導(dǎo)納米氧化銅溶解產(chǎn)生Cu2+，胃蛋白酶會(huì)抑制H+對(duì)納米氧化銅的溶解作用，而對(duì)微米氧化銅影響不大，這可能與納米氧化銅表面超強(qiáng)的化學(xué)活性有關(guān)。
　　

3、 試驗(yàn)二雞原代肝細(xì)胞培養(yǎng)方法的建立
　　 為獲得數(shù)量大及活力好的成年雞肝細(xì)胞，本文分別采用改良原位二步灌流法分離肉雞的肝細(xì)胞，并對(duì)分離的細(xì)胞活性及細(xì)胞形態(tài)進(jìn)行分析。每隔24h換液一次，并用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)并收集上清，檢測(cè)肝細(xì)胞上清液中LDH活力，以鑒定原代肝細(xì)胞活力。結(jié)果顯示，采用改良的原位二步灌流法可以獲得大量的活力高的肝細(xì)胞，且在改良的含血清培養(yǎng)基中可持續(xù)培養(yǎng)6d，為下一步試驗(yàn)打下良好的基礎(chǔ)。
　　 試驗(yàn)三納

4、米氧化銅對(duì)雞原代肝細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)中肝酶活性的影響
　　 采用原位兩步灌流法獲得雞原代肝細(xì)胞稀釋成1×106個(gè)/mL，接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，每瓶5mL，培養(yǎng)48h后隨機(jī)分為13組，每組3個(gè)重復(fù)。第1組為對(duì)照組，第2-5、6-9和10-13組分別以硫酸銅、氧化銅和納米氧化銅的形式添加銅2、4、8和16mg/L，繼續(xù)培養(yǎng)24h后檢測(cè)上清中AKP、AST、ALT、γ-GT和LDH活性。結(jié)果顯示，以硫酸銅形式添加銅2-16mg/L、以氧化銅形

5、式添加銅8-16mg/L和以納米氧化銅形式添加銅16mg/L，培養(yǎng)基質(zhì)中γ-GT活性均顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）;添加銅2mg/L時(shí)，硫酸銅組γ-GT活性顯著高于納米氧化銅組（P＜0.05），添加銅8mg/L時(shí)，氧化銅組γ-GT活性顯著高于納米氧化銅組（P＜0.05）。添加銅2mg/L時(shí)，硫酸銅和氧化銅組AST和LDH活性顯著高于對(duì)照組和納米氧化銅組（P＜0.05）。添加銅2mg/L時(shí)，氧化銅組ALT活性顯著高于納米氧化銅組（P＜0

6、.05）。添加銅8mg/L時(shí)，硫酸銅和氧化銅組AKP活性顯著高于對(duì)照組和納米氧化銅組（P＜0.05）。表明基質(zhì)中銅達(dá)到2mg/L時(shí)，納米氧化銅比硫酸銅、氧化銅更有利于肝細(xì)胞生長(zhǎng)，納米氧化銅對(duì)體外培養(yǎng)肝細(xì)胞的損害作用低于硫酸銅和氧化銅。
　　 試驗(yàn)四納米氧化銅對(duì)雞原代肝細(xì)胞銅藍(lán)蛋白mRNA表達(dá)的影響
　　 采用原位兩步灌流法獲得雞原代肝細(xì)胞稀釋成1×106個(gè)/mL，接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，每瓶5mL，培養(yǎng)48h后隨機(jī)分為13組

7、，每組3個(gè)重復(fù)。第1組為對(duì)照組，第2-5、6-9和10-13組分別以硫酸銅、氧化銅和納米氧化銅的形式添加銅2、4、8和16mg/L，繼續(xù)培養(yǎng)24h后，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)肝細(xì)胞CPmRNA表達(dá)量。結(jié)果顯示，添加銅2-8mg/L時(shí)，肝細(xì)胞CPmRNA表達(dá)量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）;添加銅2mg/L時(shí)，納米氧化銅組肝細(xì)胞CPmRNA表達(dá)量顯著高于氧化銅組（P＜0.05），氧化銅組顯著高于硫酸銅組（P＜0.05）;肝細(xì)胞CPmRN