降低成人原代肝細胞免疫原性及其對細胞穩(wěn)定性的影響.pdf

1、目的：研究紫外線照射對成人原代肝細胞活率及膜電位的影響，通過混合淋巴細胞-肝細胞培養(yǎng)，探討紫外線照射降低成人原代肝細胞的免疫原性的可行性及穩(wěn)定性。
　　方法：收集我院肝膽外科切除肝組織手術(shù)標本，診斷為肝臟良性病變（肝血管瘤、肝內(nèi)膽管結(jié)石等），采用灌注法獲得肝細胞;將實驗肝細胞分為5個組，1個對照組(0 J/m2)及4個不同照射強度組（分別為200、350、550和750J/m2）。紫外燈功率固定，照射強度由照射時間調(diào)控，5組照射強

2、度所對應(yīng)的照射時間分別為0、2、4、6和8分鐘。各組分別于處理后培養(yǎng)的第1、3、5天進行相關(guān)檢測:臺盼藍拒染法和CCK-8法檢測細胞活率;熒光顯微鏡和多功能酶標儀檢測細胞膜電位變化;通過混合淋巴細胞-肝細胞培養(yǎng)（MLHC）檢測受體T細胞增值情況;收集實驗組和處理組的培養(yǎng)上清液，離心后全自動生化分析儀檢測白蛋白、LDH的分泌量。
　　結(jié)果：⑴改良的兩步膠原酶灌注獲得的肝細胞透亮，呈圓形或球形，胞質(zhì)均勻，肝細胞總數(shù)可達109個以上，活

3、率大于90％。⑵UVB照射新鮮分離的肝細胞，在照射強度相同的條件下，隨著照射后培養(yǎng)時間的延長，成人原代肝細胞活率呈現(xiàn)下降趨勢。照射后第1天活率最好，隨著培養(yǎng)時間的延長，活率下降，到第五天，活率下降1/2;在照射后培養(yǎng)時間相同的情況下，隨著照射強度的增加，肝細胞活率呈先上升后降低。照射2min后的肝細胞活率最高，較未照射組高，但差異不明顯，活率明顯高于4min、6min組，是照射8min組的2倍。⑶不同的UVB照射強度和UVB照射后不同培

4、養(yǎng)時間之間，成人原代肝細胞的膜電位均有明顯差異。UVB照射2min組的膜電位在照射后的各個時間點均比UVB照射肝細胞0min、4min、6min、8min組的膜電位高。⑷肝細胞在接受不同強度紫外線照射后，與淋巴細胞混合培養(yǎng)，照射后的肝細胞免疫原性下降，表現(xiàn)為共培養(yǎng)的淋巴細胞增值能力下降。2min組與對照組無明顯區(qū)別，但明顯低于4min、6min、8min組。⑸檢測不同照射強度、培養(yǎng)時間的白蛋白、LDH分泌量，接受2min紫外線照射的肝細