蕓薹屬主要蔬菜遺傳特異性和多樣性的快速鑒定.pdf

1、本研究以32份蕓薹屬蔬菜種質(zhì)為材料，其中包括11份甘藍類蔬菜，11份白菜類蔬菜，10份芥菜類蔬菜，采用三種方法提取蕓薹屬蔬菜種子的DNA，探索出簡單、快速、高效的，并適用于SSR分子標記分析的DNA提取方法；進一步采用31對SSR引物進行蕓薹屬蔬菜種質(zhì)的鑒定與分析，試圖找到蕓薹屬三大類蔬菜種間的特異性片段，并明確蕓薹屬蔬菜種質(zhì)間的親緣關(guān)系；最后克隆和測序蕓薹屬蔬菜種間的特異性片段，并進行序列分析，主要結(jié)果如下：
　　 1.通過比

2、較三種不同的方法（SDS法、CTAB法、NaOH法）提取出的22份蕓薹屬蔬菜種子DNA的質(zhì)量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：SDS法提取出的種子DNA質(zhì)量最好，完整性高，OD260/OD280的平均值為1.873，與CTAB法提取出的葉片DNA(OD260/OD280比值1.802～1.906)效果相當：CTAB法次之，其OD260/OD280平均值為1.600；NaOH法提取出的種子DNA質(zhì)量最差，OD260/OD280值均低于1.3。
　　 2

3、.應(yīng)用SSR標記，對32份蕓薹屬蔬菜中三大類蔬菜(白菜(Brassicarapa)、甘藍(Brassicaoleracea)、芥菜(Brassicajuncea)）種間的特異性、種內(nèi)的多態(tài)性及親緣關(guān)系進行分析。從31對引物中篩選出21對多態(tài)性引物，共擴增出113條清晰、穩(wěn)定的多態(tài)性條帶。引物MF4、SSRRAS46、P004和NA3分別在甘藍類蔬菜、白菜類蔬菜、芥菜類蔬菜中有特異性條帶，通過10份驗證性材料驗證，其結(jié)果完全一致。21對多

4、態(tài)性引物的平均PIC值為0.604，引物B01可分別區(qū)分5個甘藍品種、8個白菜品種，JU5可區(qū)分開5份芥菜品種。系統(tǒng)聚類分析將22份蕓薹屬蔬菜種質(zhì)分為兩大類群：甘藍類蔬菜為一類，白菜類和芥菜類蔬菜為一類，bootstrap值高達100％。在相似系數(shù)0.29處，白菜類蔬菜和芥菜類蔬菜分別聚為兩亞類。主坐標分析與系統(tǒng)聚類分析結(jié)果一致。
　　 3.對蕓薹屬蔬菜種間的特異性片段進行克隆與測序，進一步作序列分析，結(jié)果為，引物MF4在甘藍中