藥用旱生植物刺山柑懸浮培養(yǎng)體系建立及抗逆性初步研究.pdf

1、刺山柑在生態(tài)和經(jīng)濟(jì)方面都具有較大的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。目前，由于自然分布少，資源量日漸下降等因素制約，影響了其在生產(chǎn)中的應(yīng)用。植物細(xì)胞培養(yǎng)被認(rèn)為是解決此資源危機(jī)的理想途徑。本文圍繞刺山柑愈傷組織聚集體理化性質(zhì)、懸浮培養(yǎng)過(guò)程中的生長(zhǎng)及代謝特征、刺山柑適應(yīng)逆境環(huán)境的初步機(jī)制和刺山柑植株揮發(fā)油成分及含量測(cè)定等基礎(chǔ)領(lǐng)域，開(kāi)展了較為全面的研究。主要研究結(jié)果如下：
　　 (1)根據(jù)細(xì)胞直徑的不同，分揀出3種不同大小的刺山柑細(xì)胞聚集體，對(duì)它們進(jìn)行了

2、黃酮含量、相關(guān)酶活性及再培養(yǎng)曲線(xiàn)的測(cè)定。結(jié)果表明顆粒最小的細(xì)胞聚集體黃酮含量約為顆粒較大的細(xì)胞聚集體的2倍，并且其丙二醛含量、苯丙氨酸解氨酶及過(guò)氧化物酶的活性及再培養(yǎng)曲線(xiàn)均具有相同的變化趨勢(shì)。個(gè)體較小的與氧氣、培養(yǎng)基養(yǎng)分接觸充分，利于細(xì)胞生長(zhǎng)與次生代謝物的積累。
　　 (2)對(duì)刺山柑細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的生長(zhǎng)過(guò)程和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消耗進(jìn)行動(dòng)態(tài)研究。結(jié)果表明：培養(yǎng)液的pH值在4.2-5.8之間變化，呈現(xiàn)先降后升的趨勢(shì)；培養(yǎng)基中的磷酸鹽、硝酸鹽基本

3、滿(mǎn)足刺山柑細(xì)胞的生長(zhǎng)，大量元素的消耗速率為PO43->NH4+>NO3-在大量元素中無(wú)機(jī)磷消耗最快。細(xì)胞的生長(zhǎng)與氮、磷元素的消耗以及細(xì)胞內(nèi)外蛋白含量變化相吻合。刺山柑細(xì)胞可溶性蛋白呈現(xiàn)單峰型，先升后降變化，與胞外可溶性蛋白有良好的線(xiàn)性關(guān)系。
　　 (3)研究了干旱脅迫對(duì)旱生植物刺山柑相關(guān)生理指標(biāo)的影響，以考察其耐旱特征及抗旱機(jī)制。結(jié)果表明：4％-10％的濃度范圍內(nèi)，隨著PEG-8000脅迫濃度的增加和脅迫時(shí)間的延長(zhǎng)，刺山柑愈傷組

4、織中丙二醛含量升高，可溶性蛋白含量先上升后降低，脯氨酸含量上升，過(guò)氧化物酶活性上升，質(zhì)膜過(guò)氧化作用加強(qiáng)，脂肪酸不飽和度增大。表明細(xì)胞膜系統(tǒng)和保護(hù)酶系統(tǒng)遭到破壞并表現(xiàn)出初步抗旱機(jī)制。PEG濃度大于10％時(shí)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生不可逆轉(zhuǎn)的傷害。
　　 (4)探討了溫度脅迫對(duì)刺山柑愈傷組織生理生化的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，在低溫脅迫下，刺山柑細(xì)胞發(fā)生了質(zhì)膜過(guò)氧化作用，導(dǎo)致產(chǎn)物丙二醛含量升高，過(guò)氧化物酶活性上升；滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)可溶性糖、可溶性蛋白以及游離