虎杖懸浮培養(yǎng)體系的建立及次生代謝調(diào)控的初步研究.pdf

1、本論文建立了中藥虎杖(PolygonumcuspidatumSieb.etZ)的懸浮培養(yǎng)體系，通過(guò)考察重要理化因子及常用的誘導(dǎo)子對(duì)體系生長(zhǎng)及代謝的影響，確定了基本培養(yǎng)條件及生產(chǎn)條件；此外還考察了各種理化因子對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)及次生代謝能力的影響。 首先，以源于虎杖莖外植體的愈傷組織建立可繼代培養(yǎng)的懸浮培養(yǎng)體系，確定繼代培養(yǎng)所需的基本條件為：培養(yǎng)基MS+0.5mg/L2,4-D+0.8mg/L6-BA+30g/L蔗糖；搖床培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速1

2、00rpm；接種密度100g/L；溫度25±2℃；光照14h/day，300μEm-1S-1。在為期20天的連續(xù)培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞最大生長(zhǎng)量在第7天獲得，胞內(nèi)總酚和總黃酮的合成是生長(zhǎng)非偶聯(lián)型的。 其次，通過(guò)考察包括激素、基礎(chǔ)培養(yǎng)基、接種密度、蔗糖濃度和光照周期等在內(nèi)的重要理化因子對(duì)懸浮培養(yǎng)體系生長(zhǎng)及代謝的影響，確定了適宜的生產(chǎn)培養(yǎng)條件為1/2MS+0.25mg/LNAA+0.5mg/LKT+30g/L蔗糖；通過(guò)誘導(dǎo)子篩選確定考察范

3、圍內(nèi)的最優(yōu)誘導(dǎo)條件為20μmol/L的茉莉酸(JA)。在繼代培養(yǎng)條件的基礎(chǔ)上，應(yīng)用生產(chǎn)培養(yǎng)基及20μmol/LJA誘導(dǎo)子，可使虎杖懸浮培養(yǎng)體系的總酚和總黃酮產(chǎn)量分別提高11和21倍。 論文最后從外植體、培養(yǎng)基及光照等方面系統(tǒng)地考察了影響虎杖愈傷組織誘導(dǎo)及次生代謝能力的因素。所考察的三種外植體中，葉外植的愈傷組織誘導(dǎo)率最高而源于根外植體的愈傷組織具有最好的次生代謝能力。所考察的6種培養(yǎng)基中，MS+0.5mg/L2,4-D+1.0m