套種圓葉決明和施肥對(duì)茶園土壤固氮微生物群落的影響.pdf

1、在茶園中，由于長期種植茶樹和套種其他植物，形成了獨(dú)特的土壤微生物群落，其中，固氮微生物是十分重要的特殊功能群之一，在氮素循環(huán)中發(fā)揮著不可替代的作用，其多樣性直接影響著氮循環(huán)進(jìn)程及固氮資源的利用。目前，人們對(duì)套種茶園的研究主要集中在節(jié)肢動(dòng)物群落、茶樹生長和茶葉產(chǎn)量品質(zhì)等方面，對(duì)套種茶園土壤固氮微生物多樣性變化的研究還鮮見報(bào)道。本文研究了套種圓葉決明和施用化肥處理對(duì)茶園土壤固氮微生物多樣性的影響，其主要結(jié)果如下：
　　 (1)茶園土

2、壤中的各類微生物數(shù)量在一年中有兩個(gè)高峰期，從2月份開始，各類微生物數(shù)量逐漸上升，在6月份達(dá)到第一個(gè)高峰期，8月份各類微生物數(shù)量有所下降，然后各類微生物數(shù)量又開始上升，在10月份達(dá)到第二個(gè)高峰期，此后各類微生物數(shù)量逐漸下降，在次年2月份出現(xiàn)最低值。從茶園土壤微生物的組成來看，細(xì)菌、真菌、放線菌和固氮菌的組成比列大體一致，數(shù)量上以細(xì)菌為主，放線菌次之，固氮菌居第三，真菌最少，且0～20 cm土層各類微生物數(shù)量均顯著大于20～40 cm土層；

3、與CK相比，套種圓葉決明和施用化肥處理均能顯著提高各土層中的細(xì)菌數(shù)量和微生物總數(shù)；施用化肥處理能夠顯著提高各土層中的真菌數(shù)量同時(shí)能夠顯著降低放線菌數(shù)量和固氮菌數(shù)量；套種圓葉決明能夠顯著降低各土層中的真菌數(shù)量同時(shí)能夠顯著提高放線菌數(shù)量和固氮菌數(shù)量。
　　 (2)獲得高質(zhì)量、大片段、無偏好的土壤微生物總DNA是茶園土壤微生物分子生態(tài)學(xué)研究的基礎(chǔ)。本文比較了5種土壤微生物DNA提取方法：SDS高鹽法、變性劑加SDS高鹽法、脫腐SDS高

4、鹽法、CTAB法和Krsek改進(jìn)法。結(jié)果表明Krsek改進(jìn)法是一種高效、可靠且適合于茶園土壤微生物分子生態(tài)學(xué)研究的DNA提取方法，該方法提取到的DNA片段>23 kb，純度OD260/OD280>1.70、OD260/OD230>1.35，產(chǎn)量>34.50 mg·g-1 dry soil，且不需純化就可以用于后續(xù)的分子生態(tài)學(xué)研究。
　　 (3)各處理在0～20 cm土層nifH基因的OUT種類、H’、D和dMa均大于20～40

5、cm土層；與CK相比，套種圓葉決明能夠提高各土層nifH基因的OUT種類、H’、D和dMa，而施肥處理對(duì)各土層nifH基因的OUT種類、H’、D和dMa影響不大。對(duì)23個(gè)nifH基因克隆進(jìn)行測序，測得的序列與GenBank數(shù)據(jù)庫中已發(fā)表的序列的相似性介于85[％]～98[％]之間，且有91.3[％]的克隆序列與環(huán)境中未培養(yǎng)細(xì)菌的同源性最高，這些序列所代表的固氮微生物在a-、b-、g-變形菌門及藍(lán)細(xì)菌門均有分布，所占比例分別為69.6[％