福建山羊卵巢cDNA文庫構(gòu)建及產(chǎn)羔性狀相關(guān)基因多態(tài)性分析.pdf

1、本試驗(yàn)選用福建閩東山羊、戴云山羊和福清山羊?yàn)樵囼?yàn)樣本，提取福清山羊卵巢組織的總RNA和3種山羊的全血DNA，設(shè)計(jì)了2個(gè)試驗(yàn)：試驗(yàn)一，運(yùn)用SMART技術(shù)與DSN均一化技術(shù)，建立福清山羊卵巢組織的均一化全長cDNA文庫。通過EST測序方法對選定的單克隆進(jìn)行全長測序，對序列進(jìn)行生物信息學(xué)分析，為進(jìn)一步篩選與山羊繁殖力相關(guān)的功能基因提供條件；試驗(yàn)二，運(yùn)用PCR-SSCP、PCR-RFLP分子標(biāo)記技術(shù)，對5個(gè)與繁殖性狀有關(guān)候選基因（BMP15、G

2、DF9、LH-β、GnRHR、BMPR-IB）進(jìn)行SNPs多態(tài)性檢測，運(yùn)用最小二乘方差分析法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)，為5種基因的基因多態(tài)性與產(chǎn)羔性狀的相關(guān)性研究提供理論參考依據(jù)。試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1、建立了福清山羊卵巢組織均一化全長 cDNA文庫。經(jīng)計(jì)算福清山羊卵巢原始文庫滴度為1.0×106pfu/mL，重組率為99%，后經(jīng)菌落PCR驗(yàn)證，克隆片段大小分布在0.5-2kb之間。隨機(jī)挑取200個(gè)陽性克隆進(jìn)行EST測序，利用Phred軟件

3、對200條ESTs去除載體序列、污染和小片段序列，獲得183個(gè)長度大于500bp的有效序列。其中有顯著同源性的序列164條，未知功能序列為19條。用Phrap軟件進(jìn)行序列拼接，得到156條Unigenes，其中跨疊群（contigs）7個(gè)，單條序列（singleton）149條，文庫冗余率為14.8%，對同源序列進(jìn)行Blast2Go功能分類，大致分為3類，包括與細(xì)胞組成相關(guān)序列、與分子功能相關(guān)序列、與生物過程相關(guān)序列。
　　2、用

4、PCR-SSCP以及PCR-RFLP方法對BMP15、GDF9、LH-β、GnRHR、BMPR-IB五種基因進(jìn)行多態(tài)性分析，用最小二乘法分析五個(gè)基因不同基因型與產(chǎn)羔數(shù)之間的關(guān)系，結(jié)果表明：
　　BMP15基因2個(gè)突變位點(diǎn)均對山羊的產(chǎn)羔性能產(chǎn)生影響。其中C6260G突變，突變雜合子CG型個(gè)體普遍具有較高的產(chǎn)羔數(shù)約1.74頭，比CC型多0.3頭差異不顯著（P>0.05），比突變純合子GG型多0.6頭差異顯著（P<0.05）。G6353

5、A突變GG型平均產(chǎn)羔數(shù)1.85頭，比AG型多0.2頭，比AA型多0.5頭且差異顯著（P<0.05）。可初步估計(jì)BMP15基因能夠作為福建本地山羊品種的產(chǎn)羔性狀候選基因。
　　GDF9基因?qū)ι窖蛉后w產(chǎn)羔數(shù)性狀的影響效應(yīng)不顯著，A1673C突變產(chǎn)生的3種基因型頻率雖然有差異但總體分布正常，各基因型個(gè)體間的產(chǎn)羔均值差異不顯著（P>0.05）。
　　LH-β基因外顯子2的C1187T突變，其中 CC型個(gè)體數(shù)量較少。從最小二乘分析結(jié)果

6、上看，該突變對山羊產(chǎn)羔性狀有極顯著的影響效應(yīng)。突變雜合子CT和突變純合子TT個(gè)體產(chǎn)羔數(shù)均高于野生型個(gè)體CC平均產(chǎn)羔數(shù)，且差異極顯著（P<0.01）。初步判斷該基因可作為繁殖力候選基因進(jìn)行下一步研究。
　　GnRHR基因的G757A突變，突變純合子AA產(chǎn)羔數(shù)明顯低于AG和GG型個(gè)體，差異極顯著（P<0.01）?？沙醪脚卸℅757A突變對福建山羊產(chǎn)羔數(shù)有一定的影響。
　　BMPR-IB基因的A1762G突變對山羊產(chǎn)羔數(shù)性狀的影響