山羊基因組文庫構(gòu)建.pdf

1、　　山羊是建立乳腺生物反應(yīng)器的良好材料。近年來在轉(zhuǎn)基因山羊研究方面取得了一定的進展。西農(nóng)薩能奶山羊是在原種瑞士薩能奶山羊的基礎(chǔ)上，經(jīng)過五十多年精心選育而形成的我國優(yōu)良奶山羊品種，具有個體大，產(chǎn)奶量高，適應(yīng)性廣，抗病性強的優(yōu)良性狀。構(gòu)建其基因組文庫，克隆及應(yīng)用其優(yōu)良基因?qū)茖W(xué)研究和生產(chǎn)都具有極大的價值。本實驗應(yīng)用lambda噬菌體構(gòu)建了西農(nóng)薩能奶山羊基因組文庫為篩選山羊乳蛋白全基因，構(gòu)建山羊乳蛋白基因定點整合的轉(zhuǎn)基因敲入載體奠定基礎(chǔ)。其結(jié)

2、果如下：1、采用Sucrose抽提緩沖液裂解血細胞，蛋白酶K消化，酚氯仿抽提的方法提取山羊全血DNA，得到了高純度的DNA。經(jīng)測定，OD260/OD280=1.81。瓊脂糖凝膠電泳顯示大部分DNA片段大于100kb。經(jīng)Sau3AI部分酶切后，分級分離回收15-23kb外源DNA片段。2、將外源DNA片段插入LambdaBlueSTARBamHIArms。在連接反應(yīng)中，載體與插入片段分子比例為1：3時，得到較好的連接效果。3、重組DNA分

3、子經(jīng)Lambda噬菌體包裝蛋白混合物體外包裝為Lambda噬菌體顆粒，Lambda噬菌體顆粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌ER1647，鋪于加有X-gal的LB平板上。計算文庫滴度。包裝效率達到3.4×106pfu/μgDNA。4、將噬菌體顆粒轉(zhuǎn)染大腸桿菌BM25.8，通過菌株表達的Cre重組酶的自剪切作用獲得連有基因組插入片段的pBlueSTAR-1質(zhì)粒。質(zhì)粒經(jīng)NotⅠ酶切鑒定插入片段大小。5、本實驗共獲得1.7×106個有效克隆，插入片斷長度在15-