草魚(yú)中國(guó)土著群體與歐美日移居群體遺傳差異的分析.pdf

1、本文主要從以下兩部分展開(kāi): 一、草魚(yú)中國(guó)土著群體與歐美日移居群體遺傳差異的線粒體序列分析 草魚(yú)是中國(guó)的土著魚(yú)類，自上世紀(jì)60年代以來(lái)已被移居到100多個(gè)國(guó)家和地區(qū)，主要用來(lái)控制水草或水產(chǎn)養(yǎng)殖。本研究通過(guò)線粒體D-Loop區(qū)（764bp）和COII+tRNA基因（719bp）序列分析，了解草魚(yú)的中國(guó)土著群體（長(zhǎng)江、珠江、黑龍江）和國(guó)外移居群體（匈牙利多瑙河、美國(guó)密西西比河、日本利根川河）之間、以及各地方群體問(wèn)的遺傳差異。結(jié)

2、果表明，中國(guó)土著草魚(yú)群體的遺傳變異高于國(guó)外移居群體；分子方差分析（AMOVA）表明，不同草魚(yú)群體的遺傳變異主要來(lái)自群體內(nèi)，而不同地域間的差異極少；群體兩兩間Fst值比較表明，大多數(shù)群體之間遺傳差異極顯著；由TCS構(gòu)建的單倍型網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)圖顯示，長(zhǎng)江草魚(yú)群體是最原始的群體，其它水系草魚(yú)均由長(zhǎng)江群體演化而來(lái)；通過(guò)基因流分析發(fā)現(xiàn)，匈牙利多瑙河群體和日本利根川河群體來(lái)自長(zhǎng)江和黑龍江群體，美國(guó)密西西比河群體除引自長(zhǎng)江、黑龍江水系外，還有部分引自于珠江

3、水系。 二、草魚(yú)微衛(wèi)星序列的制備與篩選 采用ISSR法、小片段克隆法、磁珠富集法開(kāi)發(fā)草魚(yú)微衛(wèi)星，比較三種方法的優(yōu)劣，再擇優(yōu)選用。ISSR法首先利用含有SSR序列的錨定引物擴(kuò)增出含有微衛(wèi)星序列的DNA片段，然后將微衛(wèi)星序列克隆到大腸桿菌中，挑菌檢測(cè)，測(cè)序。由于微衛(wèi)星片段全部在序列的兩端，還要根據(jù)所得的序列，設(shè)計(jì)引物，進(jìn)行二次擴(kuò)增，二次克隆、測(cè)序，才可以得到微衛(wèi)星兩端的序列。小片段克隆法和磁珠富集法前半部分相同，即都要進(jìn)行酶

4、切，割膠回收250-1000bp大小的片段。后面兩者不同，小片段克隆法先建立草魚(yú)小片段基因組文庫(kù)，然后通過(guò)探針雜交從文庫(kù)中挑選微衛(wèi)星序列，磁珠富集法先將微衛(wèi)星序列從草魚(yú)全基因組中富集出來(lái)，然后建立草魚(yú)微衛(wèi)星片段文庫(kù)，最后測(cè)序。比較三種方法，磁珠富集法具有方法簡(jiǎn)潔，費(fèi)用適中，所得微衛(wèi)星序列量多等優(yōu)點(diǎn)，最后選用磁珠富集法開(kāi)發(fā)草魚(yú)微衛(wèi)星。本研究共測(cè)序陽(yáng)性克隆128個(gè)，得到含有微衛(wèi)星序列的克隆為86個(gè)，富集效率為67．19％，其中共得到微衛(wèi)星序