湖南馬尾松種子園遺傳多樣性研究.pdf

1、本文以湖南城步馬尾松種子園(親本)和桂陽種子園(子代)為研究對象,利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)馬尾松種子園親子代的遺傳多樣性和遺傳結(jié)構(gòu)。主要研究方法和結(jié)果如下:
　　 1、采用改良的CTAB法提取了馬尾松基因組總DNA,所提取的DNA含量較高,經(jīng)檢測其濃度適合ISSR-PCR擴增反應(yīng)。
　　 2、建立了適于馬尾松ISSR-PCR擴增的最佳反應(yīng)體系:總體積是20μL。包括1.5μL的2.5 mmol/L dNTPs,1.5μL

2、的2 mmol/L MgCl2,2.0μL的10×PCR buffer,0.6μL的引物primer,0.2μL的5 U/μL Taq DNAploymerase,2μl的15 ng/μL的DNA template。PCR最優(yōu)擴增程序是:94℃預(yù)變性5 min后,PCR擴增35個循環(huán),每個循環(huán)94℃變性30 s,56℃變性45 s,72℃延伸2 min,最后一個循環(huán)結(jié)束,然后在72℃延伸7 min,最后4℃保存。
　　 3、利用

3、ISSR分子標(biāo)記技術(shù)對湖南城步馬尾松種子園的4個種源區(qū)的117個無性系的馬尾松遺傳多樣性進行了研究。采用了10個ISSR引物擴增共獲得了218個標(biāo)記位點,其中有210個為多態(tài)位點,多態(tài)位點比率為96.33％。不同種源區(qū)多態(tài)位點百分率在88.99％～90.37％之間。其中兩廣種源區(qū)的多態(tài)位點百分率最高,達90.37％,說明其種源內(nèi)遺傳變異水平在4個種源區(qū)中是最高的?？偟腟hannon多樣性指數(shù)為0.5030,Nei’s遺傳多樣性指數(shù)為0.

4、3347。各個種源區(qū)的遺傳一致度的變化范圍在0.9689～0.9812之間,各群體間的基因分化系數(shù)為0.0393,基因流為12.2219。四個種源區(qū)間Nei’s遺傳距離UPGMA聚類分析結(jié)果表明,遺傳距離(0.0190)最小的為雪峰山地種源區(qū)與貴州種源區(qū)首先聚類,雪峰山地種源區(qū)、貴州種源區(qū)與南嶺山脈種源區(qū)依次聚類,遺傳距離最大(0.0316)的是兩廣種源區(qū)與貴州種源區(qū),兩廣種源區(qū)在遺傳距離上與其他3個種源區(qū)的聚類相距較遠(yuǎn),這與其地理分布

5、格局大致吻合。
　　 4、從100條ISSR引物中篩選出11條多態(tài)性引物,對湖南桂陽馬尾松第二代種子園共87份樣品進行遺傳多樣性分析,共擴增得到246個多態(tài)位點。采用PAUP4.0軟件分析,獲得兩個主要群體(廣西群體和城步群體),在城步群體內(nèi),湖南和貴州兩省的家系被分開。再對兩個主要群體采用POPGEN32軟件分析,結(jié)果表明:在桂陽第二代種子園內(nèi)總的多態(tài)位點百分率達98.80％,總的Shannon信息指數(shù)為0.5837,Nei’

6、s基因多樣性指數(shù)為0.4003,兩個群體的多態(tài)位點百分率分別為93.57％、98.80％,各群體間的基因分化系數(shù)為0.0363,基因流為13.2586。這表明桂陽第二代馬尾松種子園的遺傳多樣性水平高,個體間的基因多樣性變異大,保持較寬的遺傳基礎(chǔ),該種子園所采用的建園方式是可取的。
　　 5、對親、子代種子園群體的遺傳距離聚類分析表明,遺傳距離與地理分布具有一定的相關(guān)性。親子代種子園的遺傳多樣性都比較豐富,而且子代種子園并沒有因為