柑橘多倍體愈傷組織長期繼代保存過程中遺傳變異的研究.pdf

1、柑橘愈傷組織繼代保存過程中，染色體數(shù)目的變異十分普遍，而染色體缺失和增加或多倍化是最常見的情況。一般染色體數(shù)目變異會(huì)隨培養(yǎng)時(shí)間延長而累積，然而長期的繼代培養(yǎng)過程中，多倍體愈傷倍性組成相對(duì)保持穩(wěn)定。長期繼代培養(yǎng)的不同多倍體愈傷發(fā)現(xiàn)其體細(xì)胞胚胎發(fā)生能力有所不同，高倍性的愈傷喪失胚性，多倍化可能與體胚發(fā)生有一定關(guān)系。本研究旨在探尋柑橘多倍體愈傷組織中遺傳變異的機(jī)制，一方面對(duì)體細(xì)胞無性系變異加以控制，為解決柑橘種質(zhì)資源離體保存培養(yǎng)過程中的遺傳不

2、穩(wěn)定現(xiàn)象提供重要參考:另一方面對(duì)多倍體愈傷的遺傳變異和分化再生能力進(jìn)行綜合鑒定評(píng)估，為柑橘多倍體育種研究奠定基礎(chǔ)。
　　本研究以繼代保存多年的伏令夏橙二倍體和多倍體愈傷及新誘導(dǎo)的愈傷為主要材料，分別從生長分化能力、遺傳穩(wěn)定性和倍性變異等方面進(jìn)行研究，探究柑橘多倍體愈傷組織離體保存中遺傳變異，主要研究結(jié)果如下:
　　1.新誘導(dǎo)了伏令夏橙愈傷組織系，為研究長期繼代保存的伏令夏橙多倍體愈傷組織的遺傳變異研究提供對(duì)照材料。利用2-8

3、周的幼嫩胚珠和未受精胚珠進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)柑橘幼嫩胚珠更有利于誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷，生長素IAA和BA的共同使用對(duì)誘導(dǎo)愈傷產(chǎn)生更有利。
　　2.流式細(xì)胞術(shù)(FCM)對(duì)各種柑橘愈傷組織的倍性測(cè)定發(fā)現(xiàn)，同樣為繼代保存多年的柑橘愈傷組織，二倍體愈傷組織倍性保持相對(duì)穩(wěn)定;多倍體愈傷組織倍性相對(duì)不穩(wěn)定，倍性越高越不穩(wěn)定。
　　3.柑橘愈傷組織的染色體觀察發(fā)現(xiàn)，染色體數(shù)目的變異普遍，存在多倍化、整倍體和非整倍體的變異。隨繼代時(shí)間延長，變異增

4、加。
　　4.SSR分子標(biāo)記對(duì)柑橘愈傷組織分子多態(tài)性和變異位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)新誘導(dǎo)的愈傷組織和繼代保存25年的二倍體愈傷組織遺傳背景一致;121對(duì)引物檢測(cè)多倍體與二倍體愈傷，多態(tài)性引物有4對(duì)，約占3.3％，其中M1-16和M9-1可以區(qū)分多倍體和二倍體。
　　5.檢測(cè)了長期繼代伏令夏橙愈傷不同倍性間生長速率和干物質(zhì)比重。結(jié)果表明，長期繼代的多倍體愈傷組織累積的變異對(duì)生長速率沒有明顯影響。
　　6.本研究發(fā)現(xiàn)，長期繼代保

5、存的柑橘多倍體愈傷體胚發(fā)生能力不同，有些柑橘愈傷組織經(jīng)繼代培養(yǎng)多年還具有體胚發(fā)生能力，更高倍性卻沒有。
　　綜上所述，本研究從生長分化、分子水平、細(xì)胞水平對(duì)長期繼代保存25年的伏令夏橙多倍體愈傷組織進(jìn)行研究。在生長分化方面，倍性與生長速率沒有明顯關(guān)系。
　　在分子水平，多倍體愈傷與二倍體愈傷差異不明顯。在細(xì)胞水平，多倍體愈傷組織倍性較二倍體更不穩(wěn)定，且染色體數(shù)目變異普遍，存在整倍體和非整倍體變異。在分化能力方面，高倍性多倍體