春劍花梗離體培養(yǎng)褐化防止技術(shù)及機(jī)理研究.pdf

1、本研究以春劍‘翠仙’花梗為外植體，采用不同的處理，在不同的時(shí)間段內(nèi)測(cè)定PPO活性、POD活性以及總酚含量的變化，研究它們?cè)诮M培過程中與褐化的關(guān)系，初步探索褐化機(jī)理，為控制春劍花梗離體培養(yǎng)褐化問題奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　　 1)春劍花梗離體培養(yǎng)的最佳取材時(shí)機(jī)為2月份，褐化率最低為20％;外植體的PPO活性在接種后第7天達(dá)到第一個(gè)峰值，之后活性下降，在接種后第21天時(shí)達(dá)到第二個(gè)峰值，兩峰值間相差3個(gè)酶活力單位。
　　

2、 2)經(jīng)過暗培養(yǎng)的外植體褐化率最低，比對(duì)照低15個(gè)百分點(diǎn)，二者間差異達(dá)到極顯著水平。
　　 3)用3g/L的抗壞血酸或檸檬酸溶液浸泡外植體后，褐化率均為20％,與最高褐化率相差50個(gè)百分點(diǎn)。其中，抗壞血酸的防褐效果最好，二者在褐化率最低處理中同期比較相差5個(gè)百分點(diǎn)。
　　 4)在培養(yǎng)基中添加抗氧化劑或吸附劑時(shí)，外植體的PPO活性、POD活性變化趨勢(shì)不一致；酶活性并未隨著時(shí)間延長(zhǎng)而持續(xù)增加或者減少?？寡趸瘎┨砑臃矫?，檸檬酸

3、濃度和抗壞血酸濃度均為2g/L時(shí)，其褐化率最低，分別為35％和30％;PPO活性也最低，在活性分別達(dá)到第一個(gè)峰值時(shí)不同濃度處理同期比較，檸檬酸和抗壞血酸分別相差0.2和0.5個(gè)酶活性單位；同時(shí)，POD活性也是最低值，在第一個(gè)峰值處不同處理同期比較，分別相差15和12個(gè)酶活性單位。
　　 5)切口封閉溫度不同，外植體的褐化率、酶活性差異較大，隨著切口封閉溫度升高(45℃，65℃，85℃)，褐化率、酶活性逐漸降低。當(dāng)切口溫度為45℃

4、，外植體褐化率最低，到接種第28天時(shí)褐化率為零；此時(shí)PPO活性、POD活性最高，與褐化率最高處理相比，PPO活性相差近2個(gè)酶活力單位，POD相差近15個(gè)酶活力單位。而總酚含量并未隨著溫度的升高而出現(xiàn)明顯的差異。
　　 6)當(dāng)基本培養(yǎng)基為1/4MS時(shí)，外植體的褐化率最低，為15％;當(dāng)基本培養(yǎng)基為MS時(shí)，外植體的褐化率最高，為35％。說明含有低無機(jī)鹽和低氨態(tài)氮的培養(yǎng)基可以減輕外植體的褐化。此外，培養(yǎng)基中較高的細(xì)胞分裂素與生長(zhǎng)素的比例