畢業(yè)論文紫穗槐amorfrutin的提取與分析

1、<p>　　紫穗槐Amorfrutin的提取與分析</p><p>　　摘要：Amorfrutin是一種具有抗癌活性的苯基類化合物，且具有一定的抗糖尿病效應(yīng)。這種天然活性物質(zhì)不僅具有降血糖、抗炎癥的功效，還具有很好的耐受性。 Amorfrutin及其類似物還可以預(yù)防脂肪肝-一種因過量高脂營養(yǎng)引起的常見病，而且可被用作功能性的營養(yǎng)補劑或作為為患者量身定制的溫和性治療藥物成分。Amorfrutin最早發(fā)現(xiàn)于

2、原產(chǎn)于北美的甘草及紫穗槐果實里，而對于國內(nèi)紫穗槐是否也含有這種天然產(chǎn)物，則需要進一步研究。本實驗對國內(nèi)引進栽培的紫穗槐的果實里是否含有Amorfrutin這種物質(zhì)進行了探究。根據(jù)文獻調(diào)研，采取溶劑萃取法，用無水乙醇對紫穗槐果實中的化學(xué)物質(zhì)進行提取后，通過液相質(zhì)譜聯(lián)用法對萃取液成分進行分析鑒定，得到提取物的質(zhì)譜圖，證實了提取物中確實含有Amorfrutin。然后改變實驗條件及提取工藝，先將紫穗槐果實用5%的鹽酸和氯仿進行萃取，再經(jīng)石油醚和

3、甲醇萃取，經(jīng)液相質(zhì)譜聯(lián)用分析，在甲醇相中得到了Amorfrutin的譜圖。最后再將兩次不同結(jié)果圖譜的質(zhì)荷比和相對豐度進行對比，證實對比實驗中經(jīng)萃取處理后的紫穗槐果實中提取到更多的Amorfrutin，初步找到提取紫穗槐果實里A</p><p>　　關(guān)鍵詞：天然產(chǎn)物；紫穗槐；萃取；Amorfrutin；糖尿病</p><p>　　The extraction and analyses of

4、Amofrutin from Amorpha fruticosa</p><p>　　Abstract: Amorfrutin as an anti-cancer activity of phenyl compound, has a certain anti-diabetic effects. According the world latest discovery, this natural active su

5、bstance with hypoglycemic, anti-inflammatory effect, also has good resistance effect at the same time. Amorfrutin and its analogues can also prevent fatty liver, a common disease caused by the excessive of fat nutrition.

6、 And it can also be used as functional nutritional supplements or a mild treatment to the patients. The natural sub</p><p>　　Key words: natural products, Amopha fruticosa, extraction, Amorfrutin，diabetes mel

7、litus </p><p><b>　　目 錄</b></p><p>　　第1章 緒 論1</p><p>　　1.1 研究背景2</p><p>　　1.1.1 紫穗槐果實中化學(xué)成分的研究3</p><p>　　1.1.2 天然活性物質(zhì)提取方法3</p>

8、<p>　　1.2 物質(zhì)鑒定及分析方法5</p><p>　　1.2.1 液質(zhì)聯(lián)用法5</p><p>　　1.2.2 硅膠層析法6</p><p>　　1.2.3 液相色譜法7</p><p>　　1.3 紫穗槐果實的化學(xué)成分和Amofrutin的研究現(xiàn)狀9</p><p>　　1.4

9、 實驗?zāi)康暮鸵饬x10</p><p>　　第2章 紫穗槐果實里Amorfrutin的提取11</p><p>　　2.1 實驗儀器裝置和試劑11</p><p>　　2.1.1 實驗儀器11</p><p>　　2.1.2 實驗裝置11</p><p>　　2.2 實驗試劑錯誤!未定義書簽。<

10、;/p><p>　　2.3 實驗原理12</p><p>　　第3章 結(jié)果與討論1</p><p>　　3.1 方案一結(jié)果2</p><p>　　3.2 方案二結(jié)果3</p><p>　　3.3 方案三結(jié)果3</p><p><b>　　3.4 討論5</b&g

11、t;</p><p>　　第4章 結(jié)論12</p><p><b>　　致謝25</b></p><p><b>　　參考文獻26</b></p><p><b>　　第1章 緒 論</b></p><p>　　1.1 研究背景 </

12、p><p>　　紫穗槐為豆科紫穗槐屬多年生落葉灌木。在世界范圍內(nèi)具有廣泛的分布。紫穗槐屬植物全世界約25種，原產(chǎn)北美，我國引入栽培的只有紫穗槐一種，南北均有栽植?，紫穗槐在我國又稱綿槐、油條、椒條、穗花槐、紫翠槐、苕條。臨床上單方應(yīng)用，“治燒燙傷，癰瘡，濕疹”。 多年生豆科落葉小喬木, 原產(chǎn)北美洲， 多作為水土保持樹種, 其枝條可用于編織，葉子可作綠肥，其根、莖、葉可作藥用。其揮發(fā)油是一種理想的天然香料，具有止癢驅(qū)蚊

13、的功能，紫槐的這些重要用途，已經(jīng)引起人們的廣泛關(guān)注，近幾年來國內(nèi)已經(jīng)開始有紫穗槐種子為原料的產(chǎn)品生產(chǎn) 。 </p><p>　　之前國內(nèi)外的科學(xué)家對紫穗槐果實里的化學(xué)成分進行研究，發(fā)現(xiàn)紫穗槐果實里含有豐富的有機化合物，主要為黃酮類化合物以及一些揮發(fā)油的成分。有醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，紫穗槐果實里的黃酮類化合物具有一定的抗癌活性。</p><p>　　天然產(chǎn)物活性成分(功能因子)具有特定的功效[15]

14、。通過體內(nèi)外試驗和臨床驗證證明了它們具有抗氧化、抗衰老、抗菌消炎、抗癌、提高免疫力、降血脂、降血壓、降血糖等功效。目前，國內(nèi)外對天然產(chǎn)物活性物質(zhì)進行了全方位和多領(lǐng)域的研究，研究其原料及原料的栽培和培養(yǎng)技術(shù)，以期獲得高含量活性成分的原料，研究天然產(chǎn)物的提取分離制備技術(shù)、活性物質(zhì)的構(gòu)成與結(jié)構(gòu)、功效和機理等，方興未艾。研究的主要目的和實際的應(yīng)用在于開發(fā)生產(chǎn)功能保健食品、添加劑或藥品。天然產(chǎn)物的提取分離制備技術(shù)，傳統(tǒng)方法主要是溶劑萃取，如熱水浸

15、提、堿液提取和醇類提取等。其它溶劑的考察主要集中在如丙酮、乙酸乙酯、乙醚、苯 氯仿、正丁醇等有機溶劑對活性物質(zhì)的提取上。近年來，人們在傳統(tǒng)方法的基礎(chǔ)上采用了微波、超聲波物理助提技術(shù)和酶分解等生物技術(shù)來提高提取率。</p><p>　　大多數(shù)活性物質(zhì)的粗提物中活性物質(zhì)含量偏低，為了得到高含量和高純度的產(chǎn)品必須進行精制，根據(jù)天然產(chǎn)物的性質(zhì)常用精制方法有：沉淀劑法、層析技術(shù)、超臨界C02萃取技術(shù)、膜分離技術(shù)。層析技術(shù)，

16、包括吸附層析法、柱層析法、薄層層析法(TLC)、紙層析法、氣一液層析法、升華法和高效液相層析法(HPLC)等。工業(yè)化生產(chǎn)中常用的是柱層析，常見的吸附劑有：硅膠、硅藻主、氧化鎂、氧化鋁、纖維素、聚酰胺、分子篩和離子交換樹脂等，應(yīng)用廣泛的主要為聚酰胺，大孔樹脂等吸附劑。超臨界C02萃取技術(shù)，超臨界流體C02是萃取小分子、低極性、親脂性物質(zhì)的理想溶劑。超臨界流體萃取技術(shù)與傳統(tǒng)提取方法相比具有萃取時間短、效率高、高選擇性提取、工藝流程簡化、低溫

17、操作、適于對熱敏性物質(zhì)提取、無溶劑殘留、安全無毒、可實現(xiàn)有效成分的快速、準確分析等優(yōu)點。膜分離技術(shù)，用天然或人工合成的高分子膜，以外加壓力或化學(xué)位差為推動力，對雙組分或多組分的溶液進行分離、分級、提純和富集的方法。對于提取的活性物質(zhì)，尤其是未知結(jié)構(gòu)的物質(zhì)要進行鑒定，主要方法有：紙色一紫外及可見光譜分析；高效液相色譜(HPLC)一質(zhì)譜分析(MS)；核磁共振波譜法(NMR)；X一</p><p>　　1.1.1 紫穗

18、槐果實里化學(xué)成分的研究</p><p>　　Amorfrutin先后被發(fā)現(xiàn)于甘草及紫穗槐的果實的提取物中，其具有很好的抗炎效果，并在后期的實驗中在小鼠身上進行了實驗驗證[9]。科學(xué)家們對甘草的研究提取也驗證了其具有抗糖尿病效應(yīng)，不僅可以降低血糖，還能抗炎，且耐受性極好。此外，Amorfrutin及其類似物還可以預(yù)防脂肪肝－一種因過量高脂營養(yǎng)引起的常見病。紫穗槐果實中的Amorfrutin提取物有如此重要的功效，對

19、其研究勢在必行，而可能在提取方法等方面的技術(shù)不成熟，可能引起提取的化合物不純或者提取量不多，這個時候，如果能在實驗室人工合成Amorfrutin，通過不斷實驗來驗證能否得到較高產(chǎn)率的物質(zhì)，則可選取相應(yīng)的方法來進行大規(guī)模的投入生產(chǎn)。</p><p>　　Amorfrutin可被用作功能性的營養(yǎng)補劑或作為為患者量身定制的溫和性治療[8]。鑒于糖尿病等代謝性疾病的迅速蔓延，我們的目的是進一步開發(fā)這些物質(zhì)以在未來用于人體

20、。為了這一目標，研究人員必須在對糖尿病患者的臨床研究中檢測這些物質(zhì)和植物Amorfrutin提取物的效應(yīng)。</p><p>　　目前國內(nèi)外實驗室對紫穗槐果實里的化學(xué)成分進行多種研究。有研究用活性跟蹤法從紫穗槐葉中分離出有效混合物,經(jīng)薄層制備,分離出4種化合物純品。經(jīng)鑒定分別為-脫氫-灰葉酚；脫氫-魚藤素-灰葉素；脫氫-灰葉酚。對大皺鰓金龜甲的試驗表明,這些化合物中的任何一種,單獨給藥時,均不具有明顯的殺蟲效果,但

21、以一定的比例混合后用藥, 則表現(xiàn)出理想的殺蟲效果，可能是協(xié)同作用的結(jié)果[15]。</p><p>　　采用GC—MS對紫穗槐果實中揮發(fā)油成分進行分析的方法：用揮發(fā)油提取器對紫穗槐果實中的揮發(fā)油進行了提取和測定。采用30m X0.25lnln彈性石英毛細管柱，ND檢測器，結(jié)合GC-MS，對揮發(fā)油進行了分析。得到結(jié)論是：紫穗槐果實揮發(fā)油含量是2．1％，從中分離出30個化合物，鑒定了其中的26個成分，并測定了相對含量，

22、其主要成分為大牦牛兒烯(11.40％)、13一蒎烯(5.85％)、蒈烯一3(3．02％)、古巴烯(5.84％)、石竹烯(8.40％)、奧(4.49％)、D一偽一旺雪松烯(4.53％)、l，3，3一三甲基一[2,2,1.02,6]三環(huán)已烷(13.63％)[26]。</p><p>　　1.1.2 天然產(chǎn)物提取工藝與方法</p><p>　　近年來，隨著人們對天然產(chǎn)物的藥用和營養(yǎng)價值認識的逐步

23、深入，世界范圍內(nèi)掀起了天然產(chǎn)物中活性成分研究的熱潮，國家自然科學(xué)基金資助項目中就有多項是關(guān)于此課題的研究，然而天然產(chǎn)物的成分十分復(fù)雜且有些物質(zhì)含量甚微， 提取時又要求活性成分不能被破壞，溶劑萃取等傳統(tǒng)提取方法已遠遠不能滿足對天然產(chǎn)物進行深入研究的需要。如何快速，有效地將活性成分提取出來以及對提取物的進一步分離純化已成為天然產(chǎn)物研究的瓶頸,特別是近年來人們環(huán)保意識的迅速提高和國家可持續(xù)發(fā)展戰(zhàn)略的施行，更使得開發(fā)新的天然產(chǎn)物提取技術(shù)成為大勢

24、所趨。目前，科學(xué)工作者在對傳統(tǒng)方法進一步改善的同時，又發(fā)展出了多種新的提取技術(shù)[7]。</p><p>　　對天然產(chǎn)物中活性成分進行提取，最常用的是溶劑萃取法，所用溶劑包括水和有機溶劑，水能夠溶出的成分較多，導(dǎo)致后處理困難，有機溶劑分親水性和親脂性兩種，選擇性好，但揮發(fā)性大且一般有毒，提取方法主要有浸漬、滲漉、煎煮、回流和連續(xù)提取，浸漬和滲漉簡單易行。一般在常溫或溫?zé)釛l件下操作適于熱不穩(wěn)定成分的提取但溶劑消耗量大

25、、費時長、提取效果差。水煎煮法是我國最早使用的傳統(tǒng)方法，大部分成分可被不同程度的煎出但具有揮發(fā)性以及遇熱易破壞的成分不宜用此法。用易揮發(fā)的有機溶劑加熱提取則需采用回流法。為了彌補回流提取中溶劑消耗量大，操作麻煩的不足，可采用連續(xù)提取，又稱索氏提取法。這是溶劑萃取中最常使用的方法，提取效率較高但提取液受熱時間長，熱不穩(wěn)定成分易分解[42]。</p><p>　　近來發(fā)展的自動索氏提取將高溫滲漉與常規(guī)索氏提取相結(jié)合。

26、溶劑用量比常規(guī)索氏提取少一半，且所需時間大幅度縮短。</p><p>　　水蒸氣蒸餾也是一種常用的提取方法。被提取的成分應(yīng)具備以下條件，具有揮發(fā)性、沸騰期間與水長時間共存而不發(fā)生化學(xué)變化、難溶或不溶于水。顯而易見上述傳統(tǒng)方法具有許多缺點:</p><p>　　1.大量使用有機溶劑產(chǎn)生的廢液廢渣嚴重污染環(huán)境且不可避免的溶劑殘留會影響產(chǎn)物的質(zhì)量和穩(wěn)定性。</p><p>

27、;　　2.提取效率低，步驟多，選擇性差，較難實現(xiàn)自動化或聯(lián)用提取。</p><p>　　3.溫度高，時間長,。使得能耗大且易造成熱敏性成分分解和揮發(fā)性成分損失。因此，發(fā)展快速、高效、盡量不用或少用有害試劑、將環(huán)境污染減到最低限度的綠色樣品處理技術(shù)已成為該領(lǐng)域科學(xué)工作者追求的目標。</p><p>　　超臨界流體萃取法是近二、三十年來迅速發(fā)展起來的一項新技術(shù)[42]。目前，在我國主要用于天然

28、產(chǎn)物中有效成分的提取。超臨界流體是指處于臨界溫度和臨界壓力以上的既非氣態(tài)又非液態(tài)的物質(zhì)，它兼有液體和氣體的優(yōu)點。其密度與液體接近，而密度與溶解能力基本成正比，所以它和液體一樣，很容易溶解其它物質(zhì)。同時，它的粘度和表面張力很小，只是略高于氣體。這使得溶質(zhì)在其中的擴散系數(shù)要比在液體中大得多，在臨界點附近超臨界流體的溫度和壓力發(fā)生微小變化即可導(dǎo)致溶質(zhì)的溶解度發(fā)生幾個數(shù)量級的變化。根據(jù)這一特性9可通過控制體系的溫度和壓力，使各種待萃取組分按它們

29、在超臨界流體中的溶解度大小先后提取出來。并得到初步分離最常用的超臨界流體。它的化學(xué)性質(zhì)不活潑、無毒無味、價格適中且具有較低的臨界溫度和臨界壓力，是萃取小分子、低極性、親脂性物質(zhì)的理想溶劑。但對于糖苷，多萜等極性或大分子化合物則顯得無能為力。加入極性改性劑可使CO2的溶解性和選擇性得以改善。但如何將超臨界流體萃取的應(yīng)用范圍擴大到極性甚至離子型物質(zhì)仍是該技術(shù)今后發(fā)展的重要方向之一[42]。</p><p>　　在對紫

30、穗槐果實里化學(xué)成分進行提取和分離時，一般采用硅膠柱層析，高速逆流色譜法等方法對紫穗槐種子的乙酸乙酯提取物進行分離，并對提取化合物進行殺菌活性測定。有研究結(jié)果是從紫穗槐種子的乙酸乙酯提取物中分離得到7個化合物．分別為5-羥基-7,4-二甲氧基異黃酮、2-羥基-4，4-二甲氧基查耳酮、4一二甲氧基異黃酮、魚藤酮、2一羥基灰葉素、異灰毛豆酚、異灰葉素。其中魚藤酮、11一羥基灰葉素、異灰毛豆酚、異灰葉素對黃瓜霜霉活性較好。 發(fā)現(xiàn)紫穗槐內(nèi)大多數(shù)黃

31、酮類化合物為抗菌性化合物。</p><p>　　超聲波輔助乙醇溶液浸提法和索氏提取法提取新疆地方植物藥材紫穗槐中黃酮化合物并進行含量測定。以蘆丁為對照品，NaNO2-Al(NO3)3-Na0H體系為顯色劑，利用分光光度法在510nm處測定提取物中的總黃酮的含量。校準曲線為A=11．825C-0.0139。r=0.9992。超聲提取法所得總黃酮的含量以蘆丁計算為2．3562％，索氏提取法所得總黃酮的含量以蘆丁計算為

32、2．6375％．平均回收率分別為102．16％和96．53％。索氏提取法的提取優(yōu)于超聲波輔助乙醇浸提法，該法簡單、準確，可用于新疆紫穗槐果實總黃酮的測定。</p><p>　　在研究紫羅蘭花辯類黃酮化合物的最佳提取工藝時。有方法是采用顏色反應(yīng)法和紫外一可見光譜法分析紫羅蘭白色品種“艾達”(Aida)、紅色品種“弗朗西絲克”(Francesco)的花瓣色素，并采用單因素試驗和正交試驗確定2種顏色紫羅蘭花瓣類黃酮化合

33、物的最佳提取工藝。 在對紫穗槐進行提取工藝的優(yōu)化時，就和紫羅蘭花瓣的提取有不同之處。先硅膠層析，在通過高速逆流色譜法對層析后的粗組分進行色譜法分離。 </p><p>　　1.2 天然活性產(chǎn)物的分析方法</p><p>　　目前國際過內(nèi)對于從植物等中提取分離的天然活性產(chǎn)物分析方法主要有液質(zhì)聯(lián)用法、硅膠層析法、和液相色譜法等，其中液相色譜法又包括固液吸附色譜法、液液分配色譜法、離子交換色譜

34、法、凝膠滲透色譜法、離子色譜法等。</p><p>　　1.2.1 液質(zhì)聯(lián)用法</p><p>　　液質(zhì)聯(lián)用（HPLC-MS）又叫液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，它以液相色譜作為分離系統(tǒng)，質(zhì)譜為檢測系統(tǒng)。樣品在質(zhì)譜部分和流動相分離，被離子化后，經(jīng)質(zhì)譜的質(zhì)量分析器將離子碎片按質(zhì)量數(shù)分開，經(jīng)檢測器得到質(zhì)譜圖。液質(zhì)聯(lián)用體現(xiàn)了色譜和質(zhì)譜優(yōu)勢的互補，將色譜對復(fù)雜樣品的高分離能力，與MS具有高選擇性、高靈敏度

35、及能夠提供相對分子質(zhì)量與結(jié)構(gòu)信息的優(yōu)點結(jié)合起來，在藥物分析、食品分析和環(huán)境分析等許多領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。</p><p>　　液相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀是以液相色譜為進樣分離系統(tǒng)并通過一定的接口與質(zhì)譜儀耦合到儀器的分析儀器。樣品經(jīng)過色譜分離后經(jīng)離子源離子化產(chǎn)生帶有一定電荷、質(zhì)量數(shù)的離子，采用不同的質(zhì)量分析器把電離子按質(zhì)荷比（m/z）分開,得到依質(zhì)量順序排列的質(zhì)譜圖。通過對質(zhì)譜圖的分析處理，進行定性、定量分析。液相色譜

36、－質(zhì)譜聯(lián)用儀主要由液相色譜、離子源、質(zhì)量分析器、檢測器、真空系統(tǒng)和計算機等幾部分組成。</p><p>　　色譜的優(yōu)勢在于分離，為混合物的分離提供了最有效的選擇，但其難以得到物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，主要依靠與標準物對比來判斷未知物，對無紫外吸收化合物的檢測還要通過其它途徑進行分析。質(zhì)譜能夠提供物質(zhì)的結(jié)構(gòu)信息，用樣量也非常少，但其分析的樣品需要進行純化，具有一定的純度之后才可以直接進行分析。因此，人們期望將色譜與質(zhì)譜聯(lián)接起

37、來使用以彌補這兩種儀器各自的缺點。 </p><p>　　據(jù)統(tǒng)計，已知化合物中約80%的化合物是親水性強、揮發(fā)性低的有機物，熱不穩(wěn)定化合物及生物大分子，這些化合物的分析不適宜用氣相色譜分析，只能依靠液相色譜。如果能成功地將液相與質(zhì)譜聯(lián)接使用，這一技術(shù)將在生物、醫(yī)藥、化工和環(huán)境等領(lǐng)域大有應(yīng)用前景。為達到這一目的需要一個起“接口”作用的裝置將液相與質(zhì)譜聯(lián)接起來。</p><p>　　這個接口要

38、解決三個主要的問題：</p><p>　?。?）液相色譜中使用的流速較大，而質(zhì)譜需要一個高真空環(huán)境工作；</p><p>　?。?）要從流動相中提供足夠的離子供質(zhì)譜分析；</p><p>　　（3）去除流動相中雜質(zhì)對質(zhì)譜可能造成的污染。</p><p>　　近年來，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用在技術(shù)及應(yīng)用方面取得了很大進展，在環(huán)境、醫(yī)藥研究的各領(lǐng)域應(yīng)用

39、越來越廣泛，且隨著現(xiàn)代化高新技術(shù)的不斷發(fā)展及液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)自身的優(yōu)點，液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)必將在未來幾年不斷發(fā)展且發(fā)揮越來越重要的作用。</p><p>　　HPLC-MS除了可以分析氣相色譜-質(zhì)譜（GC-MS）所不能分析的強極性、難揮發(fā)、熱不穩(wěn)定性的化合物之外，還具有以下幾個方面的優(yōu)點： </p><p>　?、俜治龇秶鷱V，MS幾乎可以檢測所有的化合物，比較容易地解決了分析熱不穩(wěn)定

40、化合物的難題；</p><p>　?、诜蛛x能力強，即使被分析混合物在色譜上沒有完全分離開，但通過MS的特征離子質(zhì)量色譜圖也能分別給出它們各自的色譜圖來進行定性定量；</p><p>　　③定性分析結(jié)果可靠，可以同時給出每一個組分的分子量和豐富的結(jié)構(gòu)信息；</p><p>　　④檢測限低，MS具備高靈敏度，通過選擇離子檢測（SIM）方式，其檢測能力還可以提高一個數(shù)量級

41、以上；</p><p>　?、莘治鰰r間快，HPLC-MS使用的液相色譜柱為窄徑柱，縮短了分析時間，提高了分離效果；</p><p>　?、拮詣踊潭雀?，HPLC-MS具有高度的自動化。</p><p>　　1.2.2 硅膠層析法</p><p>　　硅膠層析是根據(jù)物質(zhì)在硅膠上的吸附力不同而使物質(zhì)分離， 一般情況下極性較大的物質(zhì)易被硅膠吸附，極

42、性較弱的物質(zhì)不易被硅膠吸附，整個層析過程即是吸附、解吸、再吸附、再解吸過程。硅膠層析主要用于石油產(chǎn)品的精制，脫除芳烴物質(zhì)或用于中草藥有效成分的分離提純， 硅膠柱層析慣用方法為：</p><p>　?。?）稱量。200-300目硅膠，稱30-70倍于上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的硅膠H。干硅膠的視密度在0.4左右，所以要稱40g硅膠，用燒杯量100ml也可以。</p><p>　　

43、（2）攪成勻漿。加入干硅膠體積一倍的溶劑用玻璃棒充分攪拌。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。如果不能攪成勻漿，說明溶劑中含水量太大，尤其是乙酸乙酯/丙酮，如果不與水配伍走分配色譜的話，必須預(yù)先用無水硫酸鈉久置干燥。氯仿用無水氯化鈣干燥，以除去1%的醇。如果樣品對酸敏感，不能用氯仿體系過柱。</p><p>　?。?）裝柱。將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入

44、約1/3體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi)。隨著沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi)，用石油醚（氯仿）將其沖入柱中。</p><p>　?。?）壓實。沉降完成后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直至流速恒定。柱床約被壓縮至9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應(yīng)進行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時由于柱床萎縮產(chǎn)生開裂。</p><p>　?。?

45、）上樣。干法濕法都可以。海沙是沒必要的。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面。</p><p>　?。?）過柱和收集。柱層析實際上是在擴散和分離之間的權(quán)衡，太低的洗脫強度并不好，推薦用梯度洗脫。例如：10mg試樣量，1g硅膠H，0.5ml餾分；1~2g試樣量，50g硅膠（200-300），20-50ml餾分。</p><p&

46、gt;　　(7）檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產(chǎn)品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑底1-2個數(shù)量級。</p><p>　　（8）送譜。收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結(jié)晶。如果樣品太少或為液體，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最后純化手段?？沙渥V1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。</p><p>　　1.2.3 液相色譜法</p><p>　

47、　液相色譜不能由色譜圖直接給出未知物的定性結(jié)果，而必須由已知標準作對照定性。 </p><p>　　當(dāng)無純物質(zhì)對照時，定性鑒定就很困難，這時需借助質(zhì)譜、紅外和化學(xué)法等配合。另外大多數(shù)金屬鹽類和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)還不能分析，此缺點可高效液相色譜法來克服。</p><p>　　液相色譜法的分離機理是基于混合物中各組分對兩相親和力的差別。根據(jù)固定相的不同，液相色譜分為液固色譜、液液色譜和鍵合相色譜

48、。應(yīng)用最廣的是以硅膠為填料的液固色譜和以微硅膠為基質(zhì)的鍵合相色譜。根據(jù)固定相的形式，液相色譜法可以分為柱色譜法、紙色譜法及薄層色譜法。按吸附力可分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜和凝膠滲透色譜。近年來，在液相柱色譜系統(tǒng)中加上高壓液流系統(tǒng)，使流動相在高壓下快速流動，以提高分離效果，因此出現(xiàn)了高效（又稱高壓）液相色譜法：</p><p><b>　　液固吸附色譜</b></p>

49、<p>　　(1)高效液相色譜中的一種，是基于物質(zhì)吸附作用的不同而實現(xiàn)分離。其固定相是一些具有吸附活性的物質(zhì)如硅膠、氧化鋁、分子篩、聚酰胺等。</p><p>　　(2）液液分配色譜法</p><p>　　基于被測物質(zhì)在固定相和流動相之間的相對溶解度的差異，通過溶質(zhì)在兩相之間進行分配以實現(xiàn)分離。根據(jù)固定相與流動相的極性不同，分為正相色譜和反相色譜。前者是用硅膠或極性鍵合相為固定相

50、，非極性溶劑為流動相；后者是硅膠為基質(zhì)的烷基鍵合相為固定相，極性溶劑為流動相，適用于非極性化合物的分離。</p><p>　?。?）離子交換色譜法</p><p>　　基于離子交換樹脂上可電離的離子與流動相中具有相同電荷的溶質(zhì)離子進行可逆交換，依據(jù)這些離子對離子交換基具有不同的親和力而實現(xiàn)分離。薄殼型離子交換樹脂柱效高，主要用來分離簡單的混合物；多孔性樹脂進樣容量大，主要用來分離復(fù)雜混合物

51、。</p><p>　?。?）凝膠滲透色譜法</p><p>　　又稱為尺寸排阻色譜法 。1959年首先用于生物化學(xué)領(lǐng)域。以溶劑為流動相，多孔填料（如多孔硅膠、多孔玻璃）或多孔交聯(lián)高分子凝膠為分離介質(zhì)的液相色譜法。當(dāng)混合物溶液入凝膠色譜柱后，流經(jīng)多孔凝膠時，體積比多孔凝膠孔隙大的分子不能滲透到凝膠孔隙里去而從凝膠顆粒間隙中流過，較早地被沖洗出柱外，而小分子可滲透到凝膠孔隙里面去，較晚地被沖

52、洗出來，混合物經(jīng)過凝膠色譜柱后就按其分子大小順序先后由柱中流出達到分離的目的。用凝膠滲透色譜的優(yōu)點是：分離不需要梯度沖洗裝置 ；同樣大小的柱能接受比通常液相色譜大得多的試樣量；試樣在柱中稀釋少，因而容易檢測；組分的保留時間可提供分子尺寸信息；色譜柱壽命長。它的缺點是：不能分離分子尺寸相同的混合物，色譜柱的分離度低；峰容量??；可能有其他保留機理起作用時引起干擾。凝膠滲透色譜法為測定高聚物分子量和分子量分布提供了一個有效的方法，此外還可用來

53、分離齊聚物、單體和聚合物添加劑等。</p><p><b>　?。?）離子色譜法</b></p><p>　　采用柱色譜技術(shù)的一種高效液相色譜法，樣品展開方式采用洗脫法。根據(jù)不同的分離方式，離子色譜可以分為高效離子色譜 、離子排斥色譜和流動相離子色譜3類。高效離子色譜法使用低容量的離子交換樹脂，分離機理主要是離子交換。離子排斥色譜法用高容量的樹脂，分離機理主要是利用離

54、子排斥原理。流動相離子色譜用不含離子交換基團的多孔樹脂，分離機理主要是基于吸附和離子對的形成。 </p><p>　　離子色譜儀由淋洗液貯存器 、泵 、進樣閥 、分離柱 、抑制柱、電導(dǎo)檢導(dǎo)器和數(shù)據(jù)處理單元等組成。離子色譜儀最重要的部件是分離柱，裝有離子交換樹脂。抑制柱是抑制型離子色譜儀的關(guān)鍵部件，其作用是將淋洗液轉(zhuǎn)變成低電導(dǎo)部分，以降低來自淋洗液的背景電導(dǎo)，同時將樣品離子轉(zhuǎn)變成其相應(yīng)的酸或堿，以增加其電導(dǎo)。分離陰

55、離子，抑制柱填充強酸性陽離子交換樹脂；分離陽離子，抑制柱填充強堿性陰離子交換樹脂。檢測器分通用型檢測器與專用型檢測器。前者如電導(dǎo)檢測器，對檢測池中所有離子都有響應(yīng)；后者如紫外-可見分光光度計，對離子具有選擇性響應(yīng)。</p><p>　　1.3 紫穗槐果實化學(xué)成分和Amorfrutin的研究現(xiàn)狀</p><p>　　紫穗槐原產(chǎn)于美國、加拿大和墨西哥。這種新的抗糖尿病物質(zhì)因此被命名為Amorf

56、rutin。研究人員利用糖尿病小鼠證實Amorfrutin不僅具有降低血糖的特性，還具有抗炎效應(yīng)。此外，它們還可以預(yù)防脂肪肝-一種因過量高脂營養(yǎng)引起的常見病[40]?？茖W(xué)家們發(fā)現(xiàn)紫穗槐果實等物質(zhì)里所含有的天然活性物質(zhì)具有簡單的化學(xué)結(jié)構(gòu)。</p><p>　　研究證實，經(jīng)過硅膠柱層析、薄層制備色譜、高效制備色譜等分離手段，從紫穗槐果實的石油醚和醋酸乙酯提取物中分離得到15個單體化合物。利用理化性質(zhì)和波譜學(xué)方法，鑒定

57、了其中的12個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，包括1個芪類化合物，9個黃酮類化合物，1個三萜類化合物和1個高級脂肪醇。分別為3,5-二羥基-4-牻牛兒基聯(lián)芐(1)、5,7-二羥基-8-牻牛兒基雙氫黃酮(2)、6a,12a-去氫魚藤素(3)、6a,12a-去氫-α-毒灰葉酚(4)、灰葉素(5)、去氫色蒙酮(6)、7,4-二甲氧基異黃酮(7)、5-羥基-7,4-二甲氧基異黃酮(8)、7，2，4，5-四甲氧基異黃酮(9)、2-羥基-4，4-二甲氧基查耳酮(

58、10)、β-谷甾醇(11)、正三十碳醇(12)。其中化合物6為一個新的天然產(chǎn)物，化合物1為首次從豆科植物中分離得到的已知化合物，化合物8、10、11、12為首次從紫穗槐屬中分離得到的已知化合物，化合物2、3、4、5、7、9為首次從中國產(chǎn)的紫穗槐果實中分離得到的已知化合物。研究人員利用糖尿病小鼠證實Amorfrutins不僅具有降低血糖的特性，還具有抗炎效應(yīng)。此外，它們還可以預(yù)防脂肪肝-一種因過量高脂</p><p&g

59、t;　　沈陽化工研究院焦嬌等研究員從植物形態(tài)、果實性狀、顯微特征、化學(xué)成分等方面對紫穗槐果實進行了生藥學(xué)研究。通過硅膠柱層析、薄層制備色譜、高效制備色譜等分離手段，從紫穗槐果實的石油醚和醋酸乙酯提取物中分離得到15個單體化合物。利用理化性質(zhì)和波譜學(xué)方法，鑒定了其中的12個化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)，包括1個芪類化合物，9個黃酮類化合物，1個三萜類化合物和1個高級脂肪醇。分別為3,5-二羥基-4-牻牛兒基聯(lián)芐(1)、5,7-二羥基-8-牻牛兒基雙氫

60、黃酮(2)、6a;12a-去氫魚藤素(3)、6a,12a-去氫-α-毒灰葉酚(4)、灰葉素(5)、去氫色蒙酮(6)、7,4-二甲氧基異黃酮(7)、5-羥基-7,4-二甲氧基異黃酮(8)，2,4,5-四甲氧基異黃酮(9)、2-羥基-4，4-二甲氧基查耳酮(10)、β-谷甾醇(11)、正三十碳醇(12)。其中化合物6為一個新的天然產(chǎn)物，化合物1為首次從豆科植物中分離得到的已知化合物，化合物8、10、11、12為首次從紫穗槐屬中分離得到的已知

61、化合物，化合物2、3、4、5、7、9為首次從中國產(chǎn)的紫穗槐果實中分離得到的已知化合物[10]。</p><p>　　1.4 實驗?zāi)康暮鸵饬x</p><p>　　對于原產(chǎn)于美國的甘草和紫穗槐果實中含有的Amorfrutin的抗性研究對醫(yī)學(xué)有巨大的意義，如果證實了紫穗槐的果實中確實含有Amorfrutin且能通過實驗找到最優(yōu)的提取分離方法，那將具有不可估量的價值。</p>&l

62、t;p>　　本實驗主要目的就是分離鑒定紫穗槐果實里是否含有Amorfrutin，然后優(yōu)化鑒定和提取工藝。由于Amorfrutin有著抗癌、抗菌等藥物活性，所以對Amorfrutin的提取對研研究發(fā)明新的藥物便有了實際的意義。因此，就需要我們通過實驗找到可行的提取方法，完善提取工藝，以便從國內(nèi)栽培的紫穗槐果實里得到更多更純的Amorfrutin，繼而得到高產(chǎn)率的Amorfrutin，最終希望能將研究結(jié)果投入生產(chǎn)，獲得大量高效的Amo

63、rfrutin抗性藥物， </p><p>　　第2章 紫穗槐果實里Amorfrutin的提取 </p><p>　　2.1 實驗儀器裝置和試劑</p><p>　　2.1.1 實驗儀器</p><p>　　實驗所用儀器見表2-1，</p><p>　　表2-1主要儀器一覽表</p><p>　

64、　2.1.2 實驗裝置</p><p>　　圖2-1 提取紫穗槐果實里的Amorfrutin裝置圖</p><p><b>　　2.2 實驗試劑</b></p><p>　　表2-2 主要試劑一覽表</p><p><b>　　2.3 實驗原理</b></p><p>　　本

65、實驗采用溶劑萃取法對紫穗槐果實里的Amorfrutin進行提取。采取的溶劑是無水乙醇，由于乙醇的揮發(fā)性比較大，因此采用水浴加熱回流。根據(jù)溶劑的互不相溶的性質(zhì)，對分層后的含Amorfrutin的組分進行后處理，用液相質(zhì)譜聯(lián)用法對提取液里的成分進行鑒定。</p><p>　　為優(yōu)化提取工藝，此實驗分為三個方案進行對比實驗。分別為用沒有粉碎過的紫穗槐種子，和粉碎過的紫穗槐種子來進行提取實驗。以及采用不同的萃取溶劑，分別

66、對其提取后的產(chǎn)物的大致的量的比較，以得出紫穗槐果實里Amorfrutin提取的最佳工藝。 </p><p><b>　　2.4 實驗步驟</b></p><p>　　方案一：稱取500g紫穗槐種子（種子為顆粒未經(jīng)粉碎），與1000ml乙醇混合于三口燒瓶里，按如圖2-1的裝置圖，在攪拌的條件下水浴83攝氏度加熱并攪拌48小時（過程中需定時的向水浴鍋中填充水，防止水浴

67、鍋因干涸而影響提取溫度）。</p><p>　　冷卻到室溫后，用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行抽濾，得到乙醇提取物。然后真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到深紅色粘稠液體（在旋蒸的過程中要注意防止爆沸，加入的提取液不能超過圓底燒瓶的一半），靜置與燒瓶中，用封口膠封好以防止溶液揮發(fā)。并將乙醇回收利用。對得到的深紅色粘稠液體再進行液相——質(zhì)譜連用分析，觀察進樣前和進樣后的質(zhì)荷比和相對豐度的變化，并做好記錄以備分析。流程圖如圖2-3：</

68、p><p>　　圖2-3 方案一流程圖</p><p>　　方案二：取2000g紫穗槐種子，粉碎后烘干。稱取500g紫穗槐種子粉末（其余留下備用），與1000ml乙醇混合于三口燒瓶里，按圖2-1的裝置進行水浴83攝氏度加熱，攪拌48小時。</p><p>　　冷卻到室溫后，用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進行抽濾，得到乙醇提取物。然后真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，得到深紅色粘稠液體（在旋蒸的過程中

69、要注意防止爆沸，加入的提取液不能超過圓底燒瓶的一半），靜置與燒瓶中，用封口膠封好以防止溶液揮發(fā)。并將乙醇回收利用。對得到的深紅色粘稠液體再進行液相——質(zhì)譜連用分析，觀察進樣前和進樣后的質(zhì)荷比和相對豐度的變化，并做好記錄以備分析。如流程圖2-4：</p><p>　　圖2-4 方案二流程圖</p><p>　　方案三：稱取粉碎過的500g紫穗槐種子粉末，與1000 ml乙醇混合于三口燒瓶里，

70、按圖2-1的裝置圖，水浴83攝氏度加熱，反應(yīng)48小時（此方案未進行攪拌）。</p><p>　　冷卻到室溫，抽濾，得到乙醇提取物，然后真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，后得到深紅色粘稠液體（在旋蒸的過程中要注意防止爆沸，加入的提取液不能超過圓底燒瓶的一半），并將乙醇回收利用。</p><p>　　將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后的粘稠液體濃縮后分配于5%的鹽酸（HCL）和氯仿（CHCl3 ）溶液，分液漏斗萃取出氯仿層，經(jīng)無水

71、硫酸鈉(Na2SO4)干燥，抽濾，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸出一定量的氯仿，回收利用（氯仿為毒性有機物在萃取以及旋蒸的過程中要注意自我保護不要大量吸入），得到暗色具有生物活性的油狀液體。將此油狀液體分配于90%的甲醇和石油醚的混合溶液中。用封口膠封好以防止溶液揮發(fā)。對得到甲醇相進行液相——質(zhì)譜連用分析，觀察進樣前和進樣后的質(zhì)荷比和相對豐度的變化，并做好記錄以備分析。流程圖如圖2-5。</p><p>　　圖2-5 方案三流程

72、圖</p><p>　　液相質(zhì)譜聯(lián)用儀測定過程：</p><p>　?。?）開空氣泵、液相色譜和質(zhì)譜儀電源開關(guān)，開PC、機后使其聯(lián)機成功，之后打開真空泵閥門。</p><p>　?。?）真空度達到2╳10-5 Pa后，通過調(diào)諧系統(tǒng)檢查質(zhì)譜運行情況。</p><p>　　(3)定液相色譜和質(zhì)譜參數(shù): 選擇合適的色譜柱、流動相，設(shè)置梯度程序及柱

73、溫。選擇離子源模式，設(shè)置質(zhì)譜參數(shù)。數(shù)據(jù)采集的范圍及條件設(shè)置。</p><p>　　(4)按設(shè)定的色譜條件運行一遍空程序以檢查基線和本底，若發(fā)現(xiàn)柱子不干凈則應(yīng)沖洗柱子和質(zhì)譜儀，直至基線平穩(wěn)無峰為止。</p><p>　　(5)PC機上運行設(shè)置好的程序。待工作站顯示儀器狀態(tài)為“Ready”時，設(shè)置樣品信息，進樣。按“Start”鍵，PC機自動采集數(shù)據(jù)。</p><p>

74、　　(6)運行好樣品后，沖洗色譜柱，流動相中如含有揮發(fā)性緩沖鹽，用5甲醇沖洗排出流路中可能有的緩沖液。</p><p>　　(7)放真空，再關(guān)液相色譜、質(zhì)譜和PC機電源。</p><p>　　(8)調(diào)出譜圖，根據(jù)定性及定量分析的需要，分別打開離子色譜圖和質(zhì)譜圖，進行分析。</p><p><b>　　第3章 結(jié)果與討論</b></p>

75、;<p>　　對紫穗槐果實中化合物提取的研究，方案一為直接將購進的紫穗槐果實加乙醇溶劑進行萃?。环桨付槲锢韺φ諏嶒?，將紫穗槐果實經(jīng)粉碎處理后做相同的乙醇萃取處理；方案三再改變萃取條件，對粉碎處理的紫穗槐果實用5%的鹽酸和氯仿萃取，再用甲醇萃取處理，最后對比三種提取方法處理下得到的提取物成分及產(chǎn)量，得到結(jié)論如下：</p><p>　　3.1 為粉碎的紫穗槐果實的乙醇萃取結(jié)果</p>&

76、lt;p>　　方案一得到如圖3-1、3-2的液相質(zhì)譜圖：</p><p>　　圖3-1未粉碎紫穗槐果實提取物的乙醇溶液液相譜圖（48h）</p><p>　　圖3-2未粉碎紫穗槐提取物的乙醇溶液質(zhì)譜圖（48h）</p><p>　　圖3-1紫穗槐提取物的乙醇溶液（48h）為以甲醇為流動相，ESI源的液相色譜圖，由于使用甲醇為流動相，甲醇極性很大，在很短時間內(nèi)把

77、紫穗槐提取物的乙醇溶液中大部分的有機成分都洗脫出來，由此可得一個總量的大峰，第一幅圖為洗脫出的總的成分的量為紅色曲線；第二幅圖為在相同的時間進度下，Amorfrutin的量的曲線圖，通過對比可以看出在總的乙醇所含成的中，Amorfrutin所占的比重可達70~80%。第二幅圖中的相對分子質(zhì)量339為Amorfrutin的碳的同位素的化合物。</p><p>　　從圖3-2紫穗槐提取物的乙醇溶液質(zhì)譜圖（48h）可以

78、看出，由原來未進樣前的質(zhì)荷比(m/z)為：301.0，310.9，313.0，319.7，350.1，369.0，變?yōu)閳D上的309.0，315.1，326.1，339.0，341.1，342.1，在所測樣進入色譜儀中之后，大約半分鐘內(nèi)質(zhì)荷比為質(zhì)荷比(m/z)為339.0以及質(zhì)荷比340的峰逐漸增高，之后的一段時間內(nèi)340的相對豐度與其他峰的比值接近10:1。其中質(zhì)荷比(m/z)為339.0為Amorfrutin裂解掉一個H自由基所得質(zhì)荷

79、比，340為Amorfrutin未裂解的質(zhì)荷比，兩者的相對豐度與其他峰比較相差巨大，有力的證明了在我們本土生長的紫穗槐種子中，含有一定量的Amorfrutin，而具體的 Amorfrutin A、Amorfrutin B的分類則有待進一步實驗的分析。</p><p>　　3.2 粉碎處理的紫穗槐果實的乙醇萃取結(jié)果</p><p>　　方案二得到如圖3-3、3-4的液相質(zhì)譜圖：</p&

80、gt;<p>　　圖3-3粉碎紫穗槐提取物的乙醇溶液液相譜圖(48h)</p><p>　　圖3-4粉碎紫穗槐提取物的乙醇溶液質(zhì)譜圖（48h）</p><p>　　圖3-3紫穗槐提取物的乙醇溶液（48h）為以甲醇為流動相，ESI源的液相色譜圖，由于使用甲醇為流動相，甲醇極性很大，在很短時間內(nèi)把紫穗槐提取物的乙醇溶液中大部分的有機成分都洗脫出來，由此可得一個總量的大峰，第一幅圖

81、為洗脫出的總的成分的量為紅色曲線；在相同反應(yīng)量以及相同反應(yīng)條件的情況下，由圖3-3的液相色譜圖可以看出最高峰值要比未粉碎的種子提取物高10 G Counts，可以說明種子經(jīng)過粉碎之后提取效果明顯好于未粉碎的。</p><p>　　從圖3-4紫穗槐提取物的乙醇溶液質(zhì)譜圖（48h）可以看出，由原來未進樣前的質(zhì)荷比(m/z)為：301.0，313.0，310.9，319.0，324.0，339.0，350.1，369.

82、0（其中339.0為上一個樣中殘留的待測物的峰值）逐漸變?yōu)?39.0、350.1直到最后完全為質(zhì)荷比(m/z)為339.0，340.0的峰，圖2-5可以看出以質(zhì)荷比(m/z)為339.0與其他峰相比相對豐度比值接近10：1，有力的證明了在我們本土生長的紫穗槐種子中，含有一定量的Amorfrutin。</p><p>　　3.3 粉碎處理的紫穗槐果實甲醇萃取結(jié)果</p><p>　　由方案三

83、得到3-5和3-6的質(zhì)譜圖：</p><p>　　方案三得到3-5和3-6兩個質(zhì)譜圖。</p><p>　　圖3-5 粉碎紫穗槐提取物的甲醇溶液液相譜圖(48h)</p><p>　　圖3-6粉碎紫穗槐提取物的甲醇溶液質(zhì)譜圖（48h）</p><p>　　圖3-5粉碎后的紫穗槐種子提取物的甲醇溶液（48h）是以甲醇為流動相，ESI源的液相色譜

84、圖，由于使用甲醇為流動相，甲醇極性很大，在很短時間內(nèi)把紫穗槐提取物的甲溶液中大部分的有機成分都洗脫出來，由此可得一個總量的大峰，第一幅圖為洗脫出的總的成分的量為紅色曲線；第二幅圖為在相同的時間進度下，Amorfrutin的量的曲線圖，通過對比可以看出在總的甲醇中所含成的Amorfrutin所占的比重約60~70%，由此可知在甲醇的萃取液中含有大多數(shù)的Amorfrutin，證明萃取步驟正確活性物質(zhì)在甲醇相。</p><

85、p>　　從圖3-6粉碎后的紫穗槐種子提取物的乙醇溶液質(zhì)譜圖（48h）可以看出，由原來未進樣前的質(zhì)荷比(m/z)：301.0、311.0、313.0、339.0、350.1、369.0（其中339.0為上一個樣中殘留的待測物的峰值）變?yōu)閳D上的324.1、338.2、339.0、340.0、363.1，在所測樣進入色譜儀中之后，大約半分鐘內(nèi)質(zhì)荷比為339.0以及質(zhì)荷比340的峰逐漸增高，之后的一段時間內(nèi)質(zhì)荷比(m/z)為339的相對豐

86、度與其他峰的比值接近20:1。其中339.0為Amorfrutin裂解掉一個H自由基所得質(zhì)荷比，質(zhì)荷比(m/z)為340為Amorfrutin未裂解的質(zhì)荷比，兩者的相對豐度與其他峰比較相差巨大，有力的證明了在萃取后的甲醇溶液中，含有一定量的Amorfrutin，由此證明萃取方法的正確性，而具體的 Amorfrutin A、Amorfrutin B的分類則有待進一步實驗的分析。</p><p>　　而對于甲醇萃取液

87、的進一步處理，在本文中沒有提及。下一階段的具體實驗將對甲醇萃取液進行進一步處理。將甲醇提取液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)蒸出一定量的甲醇，控制剩余溶液的量，以便過硅膠柱。通過過柱分出含有Amorfrutin范圍的幾個點，在進一步過柱洗脫出Amorfrutin，但目前存在一個問題我們沒有Amorfrutin純產(chǎn)品，所以無法對紫穗槐種子中Amorfrutin的含量進行定量分析，過柱分離也存在一定難度（因無法對其極性進行判斷，導(dǎo)致薄層色譜分析無法確定產(chǎn)物），現(xiàn)在

88、一方面尋求得到Amorfrutin純品，另一方面對其洗脫出的各種物質(zhì)進行鑒定，來判斷何種產(chǎn)物為Amorfrutin。</p><p><b>　　3.4 總結(jié)</b></p><p>　　通過以上三步不同條件下的實驗以及實驗結(jié)果分析，可以初步確定紫穗槐種子里含有Amorfrutin并且其含量遠大于前期預(yù)測值。通過第一步和第二步進行比較可以發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過粉碎后的紫穗槐種子提

89、取出來的目標產(chǎn)物要多于未粉碎過的紫穗槐種子。由于粉碎后的紫穗槐種子粉末在燒瓶里顆粒較小，粘性比較大，導(dǎo)致不易攪拌，而且影響到實驗裝置的氣密性，導(dǎo)致乙醇的大量揮發(fā)。為解決此問題，在第三步實驗里面通過采用不攪拌進行對比實驗，提取紫穗槐種子里的Amorfrutin。由圖3-5和圖3-6里面產(chǎn)物的相對豐度可以看出，不攪拌和攪拌的反應(yīng)結(jié)果提取物產(chǎn)量相差不大，且Amorfrutin大多數(shù)存在于甲醇相中，對紫穗槐種子中Amorfrutin的進一步提取

90、提供了有效的數(shù)據(jù)。</p><p><b>　　第4章 實驗結(jié)論</b></p><p>　　本實驗是與Amorfrutin的合成工作同時進行的，而Amorfrutin的提取成功能很大的促進Amorfrutin的合成工作，具有很大的實際意義。而本次實驗只是做了定性的研究，證實了紫穗槐果實中確實含有Amorfrutin，且將紫穗槐果實粉碎處理后得到的產(chǎn)率更高，用5%鹽

91、酸及二氯亞砜和甲醇萃取處理的紫穗槐果實中提取到更多的Amorfrutin，證明經(jīng)粉碎處理，用甲醇萃取的提取方法更為高效可行。但是至此也只做了定性的研究，后期更進一步的實驗則是希望能能對相關(guān)方法及提取產(chǎn)物進行定量分析，從紫穗槐的果實中定量提取大量的Amorfrutin產(chǎn)物且提取工藝方法成熟高效。</p><p><b>　　具體實驗結(jié)論如下：</b></p><p>　

92、?。?）國內(nèi)栽培的紫穗槐果實里也含有活性物質(zhì)Amorfrutin。</p><p>　?。?）提取紫穗槐果實里的Amorfrutin時，把果實粉碎后，效果更好，而且在實驗過程中不必攪拌，更方便實驗操作。</p><p>　?。?）用溶劑萃取法對紫穗槐果實里的Amorfrutin進行提取時可用乙醇做溶劑。經(jīng)鹽酸和氯仿萃取后，再用甲醇和石油醚進行萃取，在甲醇相里可得到所要提取的Amorfrut

93、in。</p><p><b>　　致謝 </b></p><p>　　經(jīng)過三個月的實驗和論文寫作時間，畢業(yè)論文即將告一段落，也意味著四年大學(xué)生活即將結(jié)束。在這里要感謝一直在幫助著我的老師和同學(xué)。這篇論文是在我的導(dǎo)師王超教授的多次指導(dǎo)下完成的。從論文的選題到結(jié)構(gòu)安排，從內(nèi)容到文字潤飾，都凝聚了他大量的心血。 在實驗過程中，每周一次大型的組會，耐心的給我們解決實驗過程中

94、遇到的問題，與我們討論實驗方法，給我提出切實可行的指導(dǎo)性建議，并細心全面地修改了我的論文。王老這種一絲不茍的負責(zé)精神，使我深受感動。 在此，請允許我向尊敬的王超老師表示真摯的謝意！ </p><p>　　在這里要特別感謝幫我校正文字和排版的孔雅俊學(xué)姐，謝謝你在實驗過程中帶給我無限多的幫助。尤其是在寫畢業(yè)論文的時候，因為我的波普分析要從開始學(xué)習(xí)，遇到了很多困難的時候，謝謝你耐心地幫我講解波普書上我不懂的知識。這

95、篇論文能夠按時完成，與您有著重大的關(guān)系。謝謝你為了我可以盡快地完成論文事宜犧牲了自己的寶貴休息時間，熬夜加班的幫著我分析圖譜。</p><p>　　感謝我的伙伴 ，柴曉麗同學(xué)。感謝你反復(fù)的幫我檢查論文格式，幫我排版，是你在我失意時給我鼓勵，在我失落時給我支持，感謝你和我一路走來，我們不僅是實驗的伙伴，也是同學(xué)，朋友。你是最棒的！</p><p>　　最后，再次感謝為我們默默地?zé)o私奉獻自己的

96、各位老師，老師們辛苦了！ </p><p>　　衷心祝愿母校師大的明天更加美好！ </p><p><b>　　參考文獻 </b></p><p>　　[1] A Concise Synthesis of (+)-SCH351448 Soltani, Omid; De Brabander, Jef K.Department</p&g

97、t;<p>　　of Biochemistry, The University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas Dallas，</p><p>　　USA 75390-9038</p><p>　　[2] Total synthesis of amorfrutin A via a palladium-cataly

98、zed migratory prenylation–</p><p>　　aromatization sequence Sylvain Laclef, Katie Anderson, Andrew J. P. White, Anthony </p><p>　　G. M. Barrett Department of Chemistry, Imperial College, London

99、SW7 2AZ,UnitedKingdom</p><p>　　[3] 甘草及其活性成分抗炎與抗炎機制的研究進展 張明發(fā)，沈雅琴 海美優(yōu)制藥有限公司，上海 201422</p><p>　　[4] Highly Efficient, General Procedure for the Preparation of Alkylzinc Reagents from Unactivated Al

100、kyl Bromides and Chlorides Shouquan Huo DSM Pharmaceuticals, Inc., 5900 NW GreenVille BouleVard, GreenVille, North Carolina 27834 shouquan.huo@dsm.com, Received November 12, 2002</p><p>　　[5] Negishi couplin

101、g strategy of a repetitive two-step method for oligoarene synthesis Haruka Shimizu and Kei Manabe* RIKEN, 2-1 Hirosawa, Wako 351-0198, Japan Received 10 May 2006; revised 7 June 2006; accepted 8 June 2006,Available onli

102、ne 27 June 2006</p><p>　　[6] Total synthesis of dehydroaltenusinShinji Kamisuki,a Shunya Takahashi,b,* Yoshiyuki Mizushina,c Shinya Hanashima,b,Kouji Kuramochi,d Susumu Kobayashi,d Kengo Sakaguchi,a,d Tada

103、shi Nakatab</p><p>　　and Fumio Sugawaraa,</p><p>　　[7] 紫穗槐種子殺菌活性成分的提取、分離與鑒定 焦姣，孫慧，蘭杰，沈麗紅，黃成田，王遠，胥維昌，沈陽化工研究院有限公司，沈陽110021</p><p>　　[8] 李儀奎．中藥藥理實驗方法學(xué)．上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1991,5,13．</p>

104、<p>　　[9] 紫穗槐葉殺蟲成分的研究,屈秋耘，白志誠，石得玉，王升瑞，郭中華</p><p>　　( 1.陜西省治沙研究所, 陜西榆林719000)</p><p>　　( 2.延安大學(xué)化學(xué)系, 陜西延安716000)</p><p>　　[10] 紫穗槐果實化學(xué)成分，姜泓，白麗萍，康廷國，曲靜，陳宇（遼寧中醫(yī)學(xué)院，沈陽110032）</p