硫黃菌多糖的提取與紅外譜測定畢業(yè)論文

1、<p><b>　　目錄</b></p><p><b>　　摘要:4</b></p><p>　　1.真菌多糖的研究5</p><p>　　1.1 真菌多糖研究概況5</p><p>　　1.2 真菌多糖的生物活性6</p><p>　　1.2.1多糖的免

2、疫調(diào)節(jié)作用6</p><p>　　1.2.2 抗氧化作用6</p><p>　　1.2.3 抗?jié)冏饔?</p><p>　　2.實驗操作與方法6</p><p>　　2.1 硫黃菌粗多糖的提取6</p><p>　　2.1.1實驗藥品與儀器6</p><p>　　2.1.2 儀器的

3、使用7</p><p>　　2.1.2.1 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的使用7</p><p>　　2.1.2.1.1 工作原理7</p><p>　　2.1.2.1.2 操作方法7</p><p>　　2.1.2.2循環(huán)水真空泵的使用7</p><p>　　2.1.2.2.1水循環(huán)式真空泵工作原理7</p>

4、<p>　　2.1.2.2.2循環(huán)水真空泵的使用方法7</p><p>　　2.1.3 實驗操作7</p><p>　　2.1.3.1 硫黃菌多糖的粗提取7</p><p>　　2.1.3.2 濾液濃縮7</p><p>　　2.1.3.3 粗多糖的制備8</p><p><b>　　2

5、.2除蛋白質(zhì)8</b></p><p>　　2.2.1 材料、藥品與儀器8</p><p>　　2.2.1.1 實驗材料8</p><p>　　2.2.1.2 藥品與儀器8</p><p>　　2.2.2 實驗操作8</p><p>　　2.3 硫黃菌多糖的純化8</p><

6、p>　　2.3.1 藥品與儀器8</p><p>　　2.3.1.1 藥品8</p><p>　　2.3.1.2 儀器8</p><p>　　2.3.2 藥品的配制4</p><p>　　2.3.2.1 NaCl溶液的配制8</p><p>　　2.3.2.2 苯酚溶液的配制8</p>

7、<p>　　2.3.2.3 0.5mol∕L NaOH溶液的配制9</p><p>　　2.3.2.4 HCl溶液的配制9</p><p>　　2.3.3 離子交換柱的分離原理9</p><p>　　2.3.4 分離柱的活化9</p><p>　　2.3.5 裝柱9</p><p>　　2.3.6

8、 多糖的純化9</p><p>　　2.3.7 多糖的檢測10</p><p>　　2.3.7.1 檢測的原理10</p><p>　　2.3.7.2 實驗操作10</p><p>　　2.3.8再濃縮10</p><p>　　2.3.9透析10</p><p>　　3.結(jié)果與討論

9、10</p><p>　　3.1硫黃菌粗多糖的制備10</p><p>　　3.2 硫酸-苯酚法檢測硫黃菌多糖10</p><p>　　3.3 采用DEAE纖維素交換柱純化硫黃菌多糖。10</p><p>　　3.4硫黃菌多糖的紅外譜測定11</p><p><b>　　4 .結(jié)論12</b&

10、gt;</p><p><b>　　5.參考文獻12</b></p><p><b>　　致謝13</b></p><p>　　硫黃菌多糖的提取與紅外譜測定</p><p>　　生命科學(xué)學(xué)院生物技術(shù)專業(yè)2013級 指導(dǎo)教師： </p><p>　　摘 要:食藥用真菌多糖

11、在國際上被稱為“ 生物反應(yīng)調(diào)節(jié)劑”, 簡稱 BRM, 作為一種生物非特異性免疫促進劑,具有抗腫瘤、抗病毒、降血脂、促進核酸和蛋白質(zhì)生物合成等多種生物功效。硫黃菌是一種常見的食用和藥用價值都很高的真菌；隨著藥用真菌多糖研究的不斷深入和發(fā)展,發(fā)現(xiàn)硫磺菌多糖具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)等多種生物活性，是一種純天然無毒副作用的成分。但關(guān)于硫黃菌多糖的提取和成分的檢測卻很少，本實驗以硫黃菌為原料,系統(tǒng)地研究了硫黃菌多糖的分離純化技術(shù),對純化后所得

12、的多糖的理化性質(zhì)和單糖組成進行了初步探討。以硫黃菌子實體為材料，采用水浸提多糖，醇沉浸提濃縮液，乙醇除蛋白，DEAE-52離子交換純化多糖，再濃縮、透析的方法，獲得了硫黃菌多糖，并經(jīng)硫酸-苯酚法檢測，且與對照組比較，呈較明顯的多糖陽性顯色反應(yīng)，其顏色的變化與含量呈正相關(guān)。硫黃菌多糖在掃描電鏡下顯示為針狀結(jié)晶，晶體規(guī)整，透明度高。紅外譜顯示其在3416.00 cm-1、2928.00 cm-1等處有明顯多糖特征峰出現(xiàn)，且成分單一，無其他結(jié)

13、構(gòu)特征峰，表明該多糖為一種純品多糖，該研究結(jié)果為其結(jié)構(gòu)的進一步確定和活性的研究奠定了基礎(chǔ)。</p><p>　　關(guān)鍵詞：硫黃菌；多糖；提取紅外譜</p><p>　　The extraction of Polysaccharide from sulfur and infrared spectroscopy</p><p>　　College of Life Scie

14、nce Grade 2013 Instructor: </p><p>　　Abstract: The polysaccharides from edible and medicinal fungi in the world known as the "biological response modifiers", referred to as BRM, as a kind of biolog

15、ical nonspecific immune enhancer, anti-tumor, antiviral, hypolipidemic, promote the biosynthesis of nucleic acid and protein and other biological effects. Sulfur fungi is a kind of common edible and medicinal value is ve

16、ry high fungi; with the deepening of the study of medicinal fungi polysaccharides and development, found that sulfur fun</p><p>　　Key words: Sulfur fungus; polysaccharide;extraction;infrared spectrum</p&g

17、t;<p><b>　　前言</b></p><p>　　迄今為止，人類對核酸和蛋白質(zhì)的研究取得了重大進展，推動了生命科學(xué)及相關(guān)科學(xué)領(lǐng)域發(fā)展，多糖將成為最后一類有待攻破的生物活性大分子。多糖的來源大致分為植物來源多糖、動物來源多糖和微生物來源多糖，真菌多糖即真菌產(chǎn)生的多糖。</p><p>　　多糖是由單糖組成的天然高分子化合物，廣泛存在于植物、動物和微

18、生物組織中。真菌多糖是從真菌子實體、菌絲體、發(fā)酵液中分離出的,可以控制細胞分裂分化，調(diào)節(jié)細胞生長衰老的一類活性多糖。經(jīng)研究表明，多糖具有生物反應(yīng)調(diào)節(jié)物的特征，可作為免疫增強劑和免疫激活劑; 此外，它還具有抗細菌、抗病毒和抗凝聚的作用，提高肝功能和解毒力，提高動物耐缺氧能力和氧的利用率，降低血液的粘稠度，增加心肌收縮力，改善心律，降血糖、鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、平喘、止咳、化痰的功效。因此，對真菌多糖的成分進行進一步研究和測定具有重要的意義。<

19、/p><p><b>　　1 真菌多糖的研究</b></p><p>　　1.1 真菌多糖研究概況</p><p>　　糖類的生命科學(xué)幾乎與蛋白質(zhì)的生命科學(xué)同時誕生；但是糖類研究遠遠落后于蛋白質(zhì)和核酸的研究。多糖廣泛存在于動物細胞膜，植物和微生物細胞壁中,是一類天然高分子化合物。它是由醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接在一起的多聚物，是構(gòu)成生命的四大基本物質(zhì)

20、之一。真菌多糖的科學(xué)研究始于20世紀(jì)50年代末對真菌多糖抗癌效果的發(fā)現(xiàn)；隨著對多糖結(jié)構(gòu)的逐步深入了解，多糖化合物的生物活性研究得以迅速發(fā)展；研究對象包括真菌類、地衣類和植物花粉研究，范圍涉及多糖的分離純化、結(jié)構(gòu)分析、理化性質(zhì)以及臨床應(yīng)用等[1]。尤其對多糖免疫增強作用機制的研究已深入到分子和受體水平。</p><p>　　真菌多糖是從真菌子實體、菌絲體、發(fā)酵液中分離出的可以控制細胞分裂分化和調(diào)節(jié)細胞生長衰老的一類

21、活性多糖。真菌多糖具有很強烈的抗腫瘤活性，對癌細胞有很強的抑制力。當(dāng)前，對真菌多糖的研究主要包括兩方面；一是真菌多糖的提取純化及結(jié)構(gòu)分析；二是利用一些免疫指標(biāo)分析其生物活性及免疫機理。</p><p>　　1.2 真菌多糖的生物活性</p><p>　　近年來在多糖化合物的研究中發(fā)現(xiàn)來自真菌的多糖化合物具有很強的生物活性；如具有調(diào)節(jié)免疫功能及抗腫瘤作用。近50年來已有大量關(guān)于真菌多糖生物活

22、性的研究報道，主要集中在免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗?jié)兊确矫妗?lt;/p><p>　　1.2.1 多糖的免疫調(diào)節(jié)作用</p><p>　　多糖不僅能激活巨噬細胞、淋巴細胞、自然殺傷細胞和殺傷細胞等免疫細胞。還能促進細胞因子生成活化補體，從而在抗腫瘤、抗病毒、抗感染以及抗衰老等的防治上具有獨特的功效。龔曉健等研究了人工蟲草胞內(nèi)與胞外多糖對非特異性免役功能的影響，結(jié)果表明人工蟲草胞內(nèi)與胞外多糖能顯著地

23、增加細胞的吞噬指數(shù)并增強單核巨噬細胞的吞噬功能；此外，胞內(nèi)多糖能顯著地增加小鼠耳朵的腫脹度并且提高提高溶血水平。</p><p>　　1.2.2 抗氧化作用</p><p>　　已發(fā)現(xiàn)許多真菌多糖具有清除自由基，提高抗氧化酶活性和抑制脂質(zhì)過氧化的活性，起到保護生物膜和延緩衰老的作用[2]。實驗證明,從長白山野生云芝中提取的彩云多糖給受射線全身照射的小鼠能使多種臟器和細胞內(nèi)SOD活力升高，并

24、使脂質(zhì)過氧化物水平下降。</p><p>　　1.2.3 抗?jié)冏饔?lt;/p><p>　　通過實驗證明:人參果膠、糊精等都有利于不同程度的降低胃酸和抑制胃蛋白酶活性的作用。從制備鹿茸精廢渣里獲得的多糖中發(fā)現(xiàn)其有降低胃酸，抑制胃蛋白酶活性和升高胃液PGE2水平的作用。</p><p><b>　　2 實驗操作與方法</b></p>

25、<p>　　2.1 硫黃菌粗多糖的提取</p><p>　　2.1.1 實驗藥品與儀器</p><p>　　超凈水、無水乙醇、漏斗、玻璃棒、燒杯、紗布、中興牌FZ102粉碎機、上海亞榮RE6000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、亞榮SHZ-Ⅲ循環(huán)水真空泵、JA1003電子天平、YaRong RE-86水浴鍋、透析袋，恒溫烘箱、酶標(biāo)儀。</p><p>　　2.1.2 儀器的使

26、用</p><p>　　2.1.2.1 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器的使用</p><p>　　2.1.2.1.1 工作原理</p><p>　　在真空條件下，恒溫加熱，使旋轉(zhuǎn)瓶恒速旋轉(zhuǎn)，樣品在瓶壁形成大面積薄膜，高效蒸發(fā)。蒸氣經(jīng)高效玻璃冷凝器冷卻，回收于收集瓶中，大大提高蒸發(fā)效率。特別適用于對高溫容易分解變性的生物制品的濃縮提純。</p><p>　　2.1

27、.2.1.2操作方法</p><p>　　將上好樣的玻璃球與儀器連接好，向不銹鋼鍋里加入適量的水，調(diào)節(jié)升降按鈕將不銹鋼鍋調(diào)到合適高度；打開旋轉(zhuǎn)按鈕，檢查儀器是否連接完好，將鍋升打開電源開關(guān)，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)數(shù)為40rpm,溫度設(shè)置為90℃。使用完畢，先將轉(zhuǎn)數(shù)調(diào)節(jié)到“0”，再關(guān)閉電源。</p><p>　　2.1.2.2 循環(huán)水真空泵的使用</p><p>　　2.1.2.2.

28、1 水循環(huán)式真空泵工作原理</p><p>　　在泵體中裝有適量的水作為工作液。當(dāng)葉輪順時針方向旋轉(zhuǎn)時，水被葉輪拋向四周，由于離心力的作用，水形成了一個決定于泵腔形狀的近似于等厚度的封閉圓環(huán)。水環(huán)的下部分內(nèi)表面恰好與葉輪輪轂相切，水環(huán)的上部內(nèi)表面剛好與葉片頂端接觸。此時葉輪輪轂與水環(huán)之間形成一個月牙形空間，而這一空間又被葉輪分成和葉片數(shù)目相等的若干個小腔。如果以葉輪的下部0°為起點，那么葉輪在旋轉(zhuǎn)前18

29、0°時小腔的容積由小變大，且與端面上的吸氣口相通，此時氣體被吸入，當(dāng)吸氣終了時小腔則與吸氣口隔絕；當(dāng)葉輪繼續(xù)旋轉(zhuǎn)時，小腔由大變小，使氣體被壓縮；當(dāng)小腔與排氣口相通時，氣體便被排出泵外。</p><p>　　2.1.2.2.2 循環(huán)水真空泵的使用方法</p><p>　　使用之前應(yīng)先檢查電壓正常、不超過額定電壓（380V）±5%、電氣開關(guān)和設(shè)備接地線正常、泵各部件連結(jié)是否

30、可靠、各部位潤滑油是否足夠、真空度調(diào)節(jié)閥應(yīng)調(diào)整至合適的開度。使用時，先打開冷凝水，關(guān)閉旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器排氣閥，打開真空泵開關(guān)，打開旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器電源，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)數(shù)。關(guān)閉時，先打開排氣閥，直至氣壓回歸為零，再關(guān)閉真空泵電源開關(guān)。</p><p>　　2.1.3 實驗操作</p><p>　　2.1.3.1 硫黃菌多糖的粗提取</p><p>　　將經(jīng)過粉碎的硫黃菌粉料投入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器

31、的浸提器中，加20倍量的超凈水，攪拌，混合均勻，將儀器溫度設(shè)置為90℃，蒸煮6h。蒸煮完畢，將料液離心，以4000r／min離心5min，收集殘渣另行綜合利用，按上述操作循環(huán)兩次，將三次蒸煮離心后的上清液合并收集；待用。</p><p>　　2.1.3.2 濾液濃縮</p><p>　　第一次蒸煮的上清液大概有3000ml,為了節(jié)約試劑的用量，我們需將上清液進行濃縮，將上清液添加到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)

32、器的圓瓶內(nèi)，將上清液進行濃縮。溫度不超過60℃，轉(zhuǎn)數(shù)40rpm左右，濃縮直至黏稠的程度即可，靜置過夜；待用。</p><p>　　2.1.3.3 粗多糖的制備</p><p>　　采用醇沉法，用無水乙醇沉淀，主要成分是蛋白質(zhì)和多糖。以4:1的比例加入無水乙醇和濃縮液，用玻璃棒輕輕攪拌，直至料液中乙醇濃度達到70%～80%（V/V）位置，靜置；讓醇沉完全。將料液分裝后放入離心機，以10000

33、r／min離心5min?；厥找掖迹玫降拇汲廖餅榱螯S菌多糖，待用。</p><p>　　將上清液和醇沉物分別收集好，以備后續(xù)工作使用。雖然大多數(shù)多糖都以糖蛋白的形式存在于沉淀物中，但還有少量的糖游離存在于乙醇中。將乙醇液體進行濃縮可以得到比較純的硫黃菌多糖。將濃縮后的粗多糖液靜置過夜。</p><p><b>　　2.2 除蛋白質(zhì)</b></p><

34、;p>　　2.2.1 材料、藥品與儀器</p><p>　　2.2.1.1 實驗材料</p><p><b>　　沉淀的水溶物</b></p><p>　　2.2.1.2 藥品與儀器</p><p>　　乙醇、正丁醇、鐵架臺、萃取瓶、玻璃棒、燒杯等。</p><p>　　2.2.2 實驗操作

35、</p><p>　　經(jīng)典的除蛋白質(zhì)的方法是用乙醇處理，按三分之一體積加入乙醇，混合振蕩均勻，同時用玻璃棒攪拌，在攪拌的過程中會有絮狀沉淀析出，把這些絮狀沉淀收集，置于烘箱中烘干。乙醇液冷凍處理，把烘干的樣品溶解于蒸餾水，離心后棄沉淀，將剩余的上清液濃縮，得到粗多糖。</p><p>　　2.3 硫黃菌多糖的純化</p><p>　　2.3.1 藥品與儀器</

36、p><p>　　2.3.1.1 藥品</p><p>　　需配制濃度為0.1-0.5mol/L梯度濃度的NaCl溶液、苯酚、DEAE纖維素、濃硫酸、NaOH顆粒、HCl溶液。</p><p>　　2.3.1.2 儀器</p><p>　　鐵架臺、10ml量程的移液槍、柱子、玻璃棒、漏斗、紗布、試管、燒杯、稱量紙、勺子、三角瓶、PH試紙、滴管。&l

37、t;/p><p>　　2.3.2 藥品的配制</p><p>　　2.3.2.1 NaCl溶液的配制</p><p>　　0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L、0.5mol/LNaCl溶液的配制:分別準(zhǔn)確稱取5.85g、11.7g、17.55g、23.4g、29.25g的NaCl固體，加1000ml的超凈水溶解即可。</p>

38、<p>　　2.3.2.2 苯酚溶液的配制</p><p>　　我們所用的苯酚濃度為1.0mol/L的濃度，準(zhǔn)確稱取苯酚固體9.4g,加100ml的超凈水溶解。注意：一般苯酚我們是現(xiàn)配現(xiàn)用，因為苯酚極易被氧化。</p><p>　　2.3.2.3 0.5mol∕L NaOH溶液的配制</p><p>　　準(zhǔn)確稱量NaOH固體20g，用1000ml的超凈

39、水溶解NaOH溶液，很容易與空氣中的CO2反應(yīng)，所用也是現(xiàn)配現(xiàn)用。</p><p>　　2.3.2.4 HCl溶液的配制</p><p>　　所用母液為濃HCl溶液，需將其稀釋為濃度為0.5mol/L的HCl溶液，具體操作如下：配制1L的HCl溶液所需濃HCl的體積為41.5ml，然后加純凈水稀釋就得到1L的0.5mol/L的HCl溶液。</p><p>　　2.3

40、.3 離子交換柱的分離原理</p><p>　　離子交換層析根據(jù)分子量的不同、電荷的性質(zhì)及電荷量的不同；常用的交換劑有DEAE-纖維素、 DEAE-葡聚糖和 DEAE-瓊脂糖等，此法適合于分離各種酸性多糖、中性多糖和黏多糖。</p><p>　　本次試驗采用DEAE纖維素交換劑，其分離原理是：多糖在一般情況下帶負(fù)電，DEAE纖維素所裝的柱子是屬于陰離子交換柱，在使用交換柱的時候應(yīng)先將其活化

41、，使柱子結(jié)合上氫氧根離子，在上樣后，多糖離子會將氫氧根離子置換下來，這樣多糖就被吸附上去，然后我們用不同濃度梯度的NaCl溶液將其洗脫下來，即得到我們想要的多糖，而蛋白質(zhì)及其他的成分不能出柱。</p><p>　　2.3.4 分離柱的活化</p><p>　　先用所配制的NaOH(0.5mol/L)溶液浸泡纖維素，大約三小時；然后再用配HCl(0.5mol/L)溶液浸泡，時間一樣；最后再用

42、NaOH(0.5mol/L)溶液浸泡三時。活化后，我們應(yīng)將纖維素調(diào)至中性，即用超凈水浸泡，用PH試紙檢測PH，反復(fù)如此直至PH試紙顯示成中性即可。</p><p><b>　　2.3.5 裝柱</b></p><p>　　用鐵架臺將柱子固定好，保持豎直，不能傾斜。將活化好的柱填料，輕輕地倒入柱內(nèi)。柱子不宜過高，一般5cm即能滿足實驗要求。如果柱子太高，會造成擴散誤差，

43、使分離效果不好。裝好柱子后，加滿超凈水，壓柱。用玻璃棒將纖維素攪拌均勻，力度不能過大，直至柱內(nèi)無氣泡，而且柱面要平。如果柱內(nèi)有氣泡，會直接影響分離。</p><p>　　2.3.6 多糖的純化</p><p>　　在加樣之前，準(zhǔn)備好數(shù)個干凈的三角瓶。用移液槍準(zhǔn)確吸取醇沉濃縮后粗多糖溶液5ml，然后沿著管壁輕輕地旋轉(zhuǎn)加入，速度不能太快，否則會使柱平面產(chǎn)生凹陷，影響分離效果[3]。加樣完畢之后

44、，由于糖的黏度太大，走柱子走的很慢，可以加純凈水，使之產(chǎn)生壓力，使柱子走的更快些。當(dāng)加的超凈水走完之后，用不同的濃度梯度的NaCl溶液洗脫，每次都加一柱子的量。在柱子下面用三角瓶接，每50ml換一次三角瓶。</p><p>　　2.3.7 多糖的檢測</p><p>　　2.3.7.1 檢測的原理</p><p>　　常用的多糖的檢測方法有：硫酸苯酚法、硫酸蒽酮法、

45、碘量法、高效液相色譜法[4]。</p><p>　　本次實驗采用的是硫酸苯酚法，其原理是：多糖在強酸條件下水解為單糖分子， 再在沸水浴中脫水生成羥甲基糖醛，然后與苯酚縮合成磚紅色化合物，在一定范圍內(nèi)顏色深淺與糖含量成正比[5]。</p><p>　　2.3.7.2 實驗操作</p><p>　　設(shè)一個對照，對照組用超凈水代替多糖溶液。</p><

46、p>　　用移液槍取多糖溶液2ml于試管中，向試管內(nèi)輕輕地加大概一滴管的濃硫酸，最后加數(shù)滴配好的苯酚溶液，輕輕振蕩。將過柱的液體每管取200uL加入到酶標(biāo)儀的上樣板中，調(diào)節(jié)紫外光的波長，將其設(shè)置為490nm。測定其中多糖的含量。 </p><p><b>　　2.3.8 再濃縮</b></p><p>　　將分離后檢測有多糖的同一濃度梯度洗脫液洗脫出多糖的錐形瓶收

47、集在一起進行濃縮，以備后用。</p><p><b>　　2.3.9 透析</b></p><p>　　為除低聚糖、氨基酸等小分子物質(zhì)，把硫黃菌粗多糖濃縮液裝入透析設(shè)備的透析袋中，用去離子水透析兩天，用半透膜逆向流水透析可除去低聚糖、單糖、氨基酸、鹽類離子等小分子雜質(zhì)。透析處理完畢后，取出透析內(nèi)液，待用。</p><p>　　2.3.10 紅外

48、光譜測定</p><p>　　取硫黃菌多糖樣品2mg左右，KBr壓片，紅外分光光度計調(diào)至4000cm-1-400cm-1來對其進行測定。</p><p><b>　　3 結(jié)果與討論</b></p><p>　　3.1 硫黃菌粗多糖的制備</p><p>　　采用醇沉法，用無水乙醇沉淀蛋白質(zhì)和多糖，乙醇溶液中仍有少量游離多

49、糖，將乙醇液體進行濃縮可以得到比較純的硫黃菌多糖，將濃縮后的粗多糖液靜置過夜，出現(xiàn)塊狀晶體。</p><p>　　3.2 硫酸-苯酚法檢測硫黃菌多糖</p><p>　　用硫酸-苯酚法檢測硫黃菌多糖，并與對照組比較，呈較明顯的陽性顯色反應(yīng)，證明確實為多糖成分。其顏色的變化與含量呈正相關(guān)，一般顏色越深表明其濃度越大。 </p><p>　　3.3 采用DEAE纖維素交

50、換柱純化硫黃菌多糖</p><p>　　將過柱的液體每管取200uL加入到酶標(biāo)儀的上樣板中，調(diào)節(jié)紫外光的波長，將其設(shè)置為490nm；測定其中多糖的含量。結(jié)果如圖1所示，在多糖的柱層析純化過程中，可以清楚地看到：不同濃度梯度的NaCl溶液洗脫后的溶液顏色對比相當(dāng)強，由此可以看出不同濃度洗脫后的硫黃菌多糖濃度不同。同時；圖4亦顯示硫黃菌多糖的含量主要集中在前9管中，后面幾乎沒有多糖洗脫下來，說明多糖采用低離子濃度的洗

51、脫劑時即可分離洗脫下來，不宜采用高離子濃度的洗脫劑，需控制洗脫劑的離子濃度，以免離子濃度太大，達不到分離的目的。</p><p>　　圖1 多糖的含量變化曲線</p><p>　　3.4硫黃菌多糖的紅外譜測定</p><p>　　稱取5mg硫黃菌多糖后，研磨成粉末，在與先前準(zhǔn)備好的KBr粉末充分研磨混合，得到KBr的薄板。在傅里葉交換紅外色譜儀中4000cm-1至4

52、00cm-1的范圍內(nèi)掃描測定。如圖2所示，硫黃菌多糖在紅外譜中顯示3440.44cm-1和3213.30cm-1的寬吸收峰指定為O-H、N-H伸縮振動峰；3213.30cm-1的吸收峰為不飽和的C-H的伸縮振動區(qū)；1724.23 cm-1，1635.37 cm-1處的吸收峰為C=O的伸縮振動峰；1401.14 cm-1的吸收峰為C-H的彎曲振動峰；1310.84 cm-1,1189.84 cm-1,1109.81 cm-1的三處吸收峰表

53、明為吡喃糖環(huán)；這一系列的吸收峰都為多糖的特征吸收峰。</p><p>　　圖2.硫黃菌多糖的紅外譜測定</p><p><b>　　4 結(jié)論</b></p><p>　　本研究以硫黃菌子實體為材料，采用水浸提多糖，醇沉浸提濃縮液，乙醇除蛋白，DEAE-52離子交換純化多糖，再濃縮、透析的方法，獲得了硫黃菌多糖，并經(jīng)硫酸-苯酚法檢測，且與對照組比

54、較，呈較明顯的多糖陽性顯色反應(yīng)，其顏色的變化與含量呈正相關(guān)。硫黃菌多糖在掃描電鏡下顯示為針狀結(jié)晶，晶體規(guī)整，透明度高。紅外譜顯示其在3416.00 cm-1、2928.00 cm-1等處有明顯多糖特征峰出現(xiàn)，且成分單一，無其他結(jié)構(gòu)特征峰，表明該多糖為一種純品多糖，該研究結(jié)果為其結(jié)構(gòu)的進一步確定和活性的研究奠定了基礎(chǔ)。</p><p><b>　　參考文獻：</b></p>&l

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64、與實施到論文的撰寫和修改，都凝聚著導(dǎo)師的心血。從他身上我學(xué)到了很多做人做事的道理，他淵博的知識、嚴(yán)謹(jǐn)?shù)闹螌W(xué)態(tài)度。敏銳的科學(xué)洞察力、踏實的工作作風(fēng)，以及大膽的創(chuàng)新精神都是我需要學(xué)習(xí)的地方。在此，謹(jǐn)向恩師表示我崇高的敬意和最真摯的感謝！</p><p>　　回顧大學(xué)時光，我過的很充實。在這里，還要感謝我的班主任以及各科任課老師，感謝你們對我的幫助，更感謝你們對我的諄諄教誨；你們不只是讓我學(xué)到了知識，更學(xué)會做人的道理。