白蘞三種不同萃取物的抗腫瘤活性研究[畢業(yè)設(shè)計(jì)+開題報(bào)告+文獻(xiàn)綜述]

1、<p>　　本科畢業(yè)設(shè)計(jì)(論文)</p><p><b>　?。ǘ?屆）</b></p><p>　　白蘞三種不同萃取物的抗腫瘤活性研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí) 生物工程 &l

2、t;/p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p>　　摘要: 目的 研究白蘞三種萃取物（白蘞的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇

3、萃取物）的體外抗腫瘤作用，并比較這三種白蘞萃取物之間的抗腫瘤效果。方法 體外培養(yǎng)人宮頸瘤Hela細(xì)胞，將其與各萃取物的不同濃度組共育，設(shè)白蘞三種萃取物的不同濃度組、0劑量藥物為陽性組合、空白對照組，采用四甲基偶氮唑鹽（MTT）比色法，測定白蘞三種萃取物對Hela細(xì)胞的抑制率。結(jié)果 白蘞的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物的半抑制濃度分別為448.17mg·L-1、44.49mg·L-1、235.83mg

4、83;L-1 。結(jié)論 白蘞的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物對體外培養(yǎng)的Hela細(xì)胞都具有一定的抑制作用，其中乙酸乙酯萃取物的抗腫瘤作用最好，正丁醇萃取物次之，石油醚萃取物的抗腫瘤作用最小。</p><p>　　關(guān)鍵詞: 白蘞；抗腫瘤；人宮頸癌細(xì)胞；MTT比色分析法</p><p>　　Study on Antitumor Activity of three extracts of Ampe

5、lopsis japonica(Thunb.)Makino</p><p>　　Abstract: Objective To investigate the anti-tumor activity of the three extracts of Ampelopsis japonica(Thunb.)Makino.and to compare the inhibition effect of three ext

6、racts. Methods Cervix cancer Hela cells were cultured in vitro and then different concentration of three extracts of Ampelopsis japonica(Thunb.)Makino were added to Hela cells. Using different concentration of the thre

7、e extracts ,control group of masculine , control blank group. The cytotoxic effects of the three extracts of Amp</p><p>　　Keywords: Ampelopsis japonica(Thunb.)Makino; anti-tumor activity ; cervix cancer Hela

8、 cells; MTT assay</p><p><b>　　目 錄</b></p><p>　　摘要………………………………………………………………………………………………………Ⅰ </p><p>　　Abstract…………………………………………………………………………………………………Ⅱ</p><p>

9、;　　1 緒論…………………………………………………………………………………………………（1）</p><p>　　1.1 介紹……………………………………………………………………………………………（1）</p><p>　　1.1.1 選題的背景……………………………………………………………………………（1）</p><p>　　1.1.2 選題的意義……………

10、………………………………………………………………（1）</p><p>　　1.2 相關(guān)研究的最新成果及動(dòng)態(tài)…………………………………………………………………（1）</p><p>　　1.2.1 白蘞化學(xué)成分研究進(jìn)展………………………………………………………………（1）</p><p>　　1.2.2 白蘞在藥理方面的作用………………………………………………………

11、………（2）</p><p>　　1.2.3 白蘞在臨床方面的作用………………………………………………………………（3）</p><p>　　2 實(shí)驗(yàn)部分 …………………………………………………………………………………………（4）</p><p>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料………………………………………………………………………………………（4）</p>&

12、lt;p>　　2.1.1 原材料…………………………………………………………………………………（4）</p><p>　　2.1.2 主要試劑和耗材………………………………………………………………………（4）</p><p>　　2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器………………………………………………………………………………（4）</p><p>　　2.2 實(shí)驗(yàn)流程…………

13、……………………………………………………………………………（4）</p><p>　　2.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容………………………………………………………………………………………（6）</p><p>　　2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇………………………………………………………………………………（6）</p><p>　　2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)…………………………………………………………

14、……………………（6）</p><p>　　2.3.3 細(xì)胞凍存………………………………………………………………………………（6） </p><p>　　2.3.4 細(xì)胞毒性檢測………………………………………………………………………… （6）</p><p>　　2.4 分析方法………………………………………………………………………………………（7）</p&

15、gt;<p>　　3 結(jié)果與分析…………………………………………………………………………………………（8）</p><p>　　3.1 白蘞萃取物對Hela細(xì)胞的抑制作用…………………………………………………………（8）</p><p>　　3.1.1 白蘞的石油醚萃取物對Hela細(xì)胞的抑制作用………………………………………（8）</p><p>　

16、　3.1.2 白蘞的乙酸乙酯萃取物對Hela細(xì)胞的抑制作用……………………………………（9）</p><p>　　3.1.3 白蘞的正丁醇萃取物對Hela細(xì)胞的抑制作用…………………………………… （10）</p><p>　　3.2 白蘞的各萃取物對Hela細(xì)胞的抑制作用比較……………………………………………（12）</p><p>　　4 結(jié)論 …………………

17、……………………………………………………………………………（13）</p><p>　　致謝……………………………………………………………………………………………… （14）</p><p>　　參考文獻(xiàn)………………………………………………………………………………………… （15）</p><p><b>　　1 緒論</b></p&g

18、t;<p><b>　　1.1 介紹</b></p><p>　　1.1.1 選題的背景</p><p>　　白蘞又名白根,五爪藤,山地瓜,為蛇葡萄屬植物。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,性微寒,味苦[1]?！吨腥A人民共和國藥典》2005版收載的白蘞為葡萄科白蘞[ Ampelopsis japonica( Thunb. )Makino ]的塊根[2]。<

19、/p><p>　　白蘞原產(chǎn)我國的華北、華東和中南等省區(qū)，喜溫暖濕潤和陽光充足的環(huán)境，也耐蔭，耐貧瘠和干旱，耐寒冷，但怕積水。白蘞塊狀莖具有清熱解毒、消癰散結(jié)、生肌止痛之功效，可用于治療癰腫瘡瘍、瘰疬、燙傷、扭挫傷等;外用也可用于癰、癤、蜂窩組織炎、淋巴結(jié)炎等病癥，常作藥用植物栽培，近年將其作為觀賞花卉引種栽培[3]。</p><p>　　白蘞入藥歷史悠久,早在《名醫(yī)別錄》中已有記載,是歷代醫(yī)家

20、治療疔癰的重要藥物[4-5]。</p><p>　　20世紀(jì)80年代以前，對蛇葡萄屬進(jìn)行深入研究的文獻(xiàn)報(bào)道甚少。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，該屬植物具有多方面顯著的藥理活性，引起了國內(nèi)外學(xué)者的普遍關(guān)注[6]。白蘞（Ampelopsis japonica(Thunb.)Makino）作為葡萄科蛇葡萄屬植物的唯一一個(gè)作為常用藥使用的中草藥，其主要活性為抗菌性,許多新活性如免疫調(diào)節(jié)活性及抑制毛發(fā)生長作用等不斷被發(fā)現(xiàn)。抗腫瘤活性尤

21、其值得關(guān)注。韓國學(xué)者[7]研究證明：白蘞中提取的momordins對AP-1活性及腫瘤細(xì)胞的增生有抑制作用。</p><p>　　1.1.2 選題的意義</p><p>　　目前，從植物中尋求抗腫瘤活性物質(zhì)現(xiàn)已成為抗癌藥物的重要研究內(nèi)容[8]。例如紫杉醇、黃連、升麻等中藥化合物，在臨床上已經(jīng)廣泛被使用。本次實(shí)驗(yàn)研究白蘞的抗腫瘤活性，其相關(guān)方面的研究甚少。近年來，所見的研究大多數(shù)是從氯仿、

22、乙酸乙酯等溶劑中萃取分離白蘞中的化合物，對白蘞的石油醚萃取物、乙酸乙脂萃取物、正丁醇萃取物的抗腫瘤活性研究仍待進(jìn)一步的研究。因此，本次實(shí)驗(yàn)的開展一方面為白蘞各種劑型的開發(fā)提供理論依據(jù)，另一方面，也為進(jìn)一步探索白蘞的藥理活性打下基礎(chǔ)。</p><p>　　1.2 相關(guān)研究的最新成果及動(dòng)態(tài)</p><p>　　1.2.1 白蘞化學(xué)成分研究進(jìn)展</p><p>　　現(xiàn)

23、代研究發(fā)現(xiàn)，白蘞經(jīng)5％乙醇滲漉提取后根據(jù)理化性質(zhì)及光譜分析鑒定其化學(xué)成分為大黃素甲醚、羽扇豆醇、p-谷甾醇、大黃酚、碳十六酸、大黃素、富馬酸、胡蘿卜甙、沒食子酸、衛(wèi)茅醇。大黃素甲醚、大黃酚、大黃素、富馬酸、沒食子酸具有抗菌和抗真菌作用，這與中醫(yī)藥關(guān)于白蘞的臨床應(yīng)用相一致[9]。</p><p>　　為了進(jìn)一步闡明白蘞的化學(xué)成分，為白蘞的深層開發(fā)提供依據(jù)，郝軍等[10]從白蘞的乙酸乙酯萃取液中分離得到了8個(gè)化合物。

24、利用理化常數(shù)和波譜學(xué)方法(1H—NMR、13C-NMR)鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，分別為沒食子酸、原兒茶酸、龍膽酸、白藜蘆醇、大黃素、羽扇豆醇、p一谷甾醇、胡蘿卜甙。</p><p>　　郝軍等[2]又從其氯仿和乙酸乙酯萃取部分中分離得到了五味子苷 、大黃酚 、大黃素甲醚、大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 、poriferast-5-en-3β、 7α-diol、棕櫚酸、齊墩果酸。目前所見的研究大多數(shù)是從氯仿、乙酸乙

25、酯等溶劑中萃取分離白蘞中的化合物。</p><p>　　1.2.2 白蘞在藥理方面的作用</p><p><b>　　(1)抗菌活性</b></p><p>　　抗菌是白蘞的主要活性，目前研究的較多。白蘞含有大黃素甲醚、大黃酚、大黃素、富馬酸、沒食子酸等多種抗細(xì)菌和真菌成分，與其臨床應(yīng)用相一致。白蘞的水浸液對同心性毛癬菌、奧杜盎氏小芽胞癬菌、

26、腹股溝和紅色表皮癬菌等真菌有不同程度的抑制作用。水煎劑用平板稀釋法對金黃色葡萄球菌有抑制作用[11]。</p><p>　　將蛇葡萄根、白蘞等4味中藥的70% 乙醇提取物制成外用蛇葡萄根霜?jiǎng)?，體外抑菌實(shí)驗(yàn)表明，此霜?jiǎng)瘘S色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌有不同程度的抑制作用[10]。口腔微生物通過腐敗消化口腔內(nèi)的滯留物質(zhì)產(chǎn)生揮發(fā)性硫化物及其它異味物質(zhì)導(dǎo)致口臭。朱彩蓮等[11]通過測定揮發(fā)性硫化物，發(fā)現(xiàn)白蘞對臨床

27、采集的牙周病口臭患者唾液細(xì)菌的抑菌率為45%。</p><p><b>　　(2)抗腫瘤</b></p><p>　　白蘞的甲醇提取物及從中提取純化的momordin對激活蛋白（AP-1）活性及腫瘤細(xì)胞的增生有抑制作用。momordin Ⅰ對腫瘤細(xì)胞的抑制活性最強(qiáng)，其IC50 為22.8 mg/ml。白蘞的甲醇提取物和momordin還對人腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒作用，mom

28、ordinI細(xì)胞毒作用最強(qiáng)，IC50 為 7.280~16.05 mg/ml[7、12]。Kim 等[11]研究了MomordinI 對白血病HL-60 細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，其IC50 為19.0 mg/ml，并證明其作用機(jī)制是通過降低Bcl-2:Bax的比例及激活caspase-3，誘導(dǎo)了白血病HL-60 細(xì)胞的凋亡。</p><p>　　許多中藥乙醇提取物均有高度酪氨酸酶抑制作用，能阻截皮膚中黑色素的形成。唐海

29、誼等[11]發(fā)現(xiàn)，白蘞水提物對酪氨酸酶有很強(qiáng)的抑制作用。</p><p><b>　　(3)免疫調(diào)節(jié)活性</b></p><p>　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明[13]，3 種不同劑量的白蘞醇提物（5，10，20 g/kg）對小鼠外周血淋巴細(xì)胞ANAE陽性率、T細(xì)胞增殖能力及巨噬細(xì)胞吞噬功能均有促進(jìn)作用，并隨劑量增加作用增強(qiáng)，量效呈正相關(guān)。作者認(rèn)為，白蘞提取物可增強(qiáng)小鼠T淋巴細(xì)胞和

30、巨噬細(xì)胞的免疫功能，表明白蘞的抗菌作用與其免疫活性有關(guān)，臨床用于抗感染治療可能具有直接抗菌和調(diào)節(jié)集體免疫功能的雙重機(jī)制。</p><p><b>　　(4)興奮作用</b></p><p>　　趙翠蘭[11]觀察了白蘞煎劑對小鼠給藥前后電刺激的痛閾變化，發(fā)現(xiàn)白蘞煎劑對小白鼠有一定的興奮作用，無鎮(zhèn)痛作用。</p><p><b>　　(

31、5)抑制毛發(fā)生長</b></p><p>　　白蘞的水煎劑對小鼠觸須毛囊生長有明顯抑制作用。</p><p>　　1.2.3 白蘞在臨床方面的作用</p><p>　　白蘞屬于清熱解毒藥，苦辛微寒，歸心、胃、肝經(jīng)。苦寒能清熱解毒，味辛能散結(jié)消痛，外用可斂瘡生肌，可用于瘡癰腫毒、燒燙傷。既可內(nèi)服，又可外敷。</p><p>　　白

32、蘞的臨床應(yīng)用有治療癌性發(fā)熱，治療支氣管擴(kuò)張咯血，治療手足皸裂，治療燒傷，治療骨折等。</p><p><b>　　2 實(shí)驗(yàn)部分</b></p><p><b>　　2.1 實(shí)驗(yàn)材料</b></p><p>　　2.1.1 原材料</p><p>　　Hela細(xì)胞（人宮頸癌細(xì)胞）：由華東師范大學(xué)生

33、命醫(yī)學(xué)研究所提供。</p><p>　　白蘞的石油醚萃取物、乙酸乙脂萃取物、正丁醇萃取物：由嘉興學(xué)院朱紅薇老師提供。</p><p>　　2.1.2 主要試劑和耗材</p><p>　　RPMI1640培養(yǎng)基（美國 Hyclone 公司）；RPMI1640雙抗（青霉素、鏈霉素）溶液（Sigma）；DMSO溶液（Sigma）；PBS緩沖溶液(BOSTER)；0.25

34、%胰酶溶液（Hyclone)；新生胎牛血清（四季青）；96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(NEST,PLT-96)</p><p>　　四甲基偶氮唑鹽( MTT , 美國Amresco 公司)母液配置：50mg溶于0.01mol/ L PBS緩沖溶液10ml, 配成5mg/ mL 濃度,過濾除菌, 4℃避光保存?，F(xiàn)配現(xiàn)用。</p><p>　　RPMI1640完全培養(yǎng)基：在50mL離心管中加入10%終體積的

35、滅活新生胎牛血清后，再加入1%終體積的雙抗溶液，最后加入RPMI1640培養(yǎng)基至終體積。</p><p>　　2.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器</p><p>　　表2-1 實(shí)驗(yàn)儀器</p><p><b>　　2.2 實(shí)驗(yàn)流程</b></p><p>　　人宮頸癌Hela細(xì)胞</p><p><

36、b>　　細(xì)胞培養(yǎng)</b></p><p>　　傳代培養(yǎng) 單細(xì)胞懸液</p><p>　　細(xì)胞凍存 傳代培養(yǎng) 細(xì)胞接板</p><p><b>　?。ù?xì)胞貼壁后）</b></p><p>　　細(xì)胞復(fù)蘇 加化合物&

37、lt;/p><p>　?。踊衔?4小時(shí)）</p><p><b>　　加MTT</b></p><p>　　（避光37℃孵育4小時(shí)）</p><p>　?。尤?50DµLDMSO溶解）</p><p>　　置酶標(biāo)儀上于490 nm 波長處測各孔OD值</p><p&

38、gt;　　圖2-1 日常細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞毒性測定實(shí)驗(yàn)流程圖</p><p><b>　　2.3 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容</b></p><p>　　2.3.1 細(xì)胞復(fù)蘇</p><p>　?。?）將細(xì)胞冷凍管迅速由液氮轉(zhuǎn)入到37℃水浴中，在1分鐘內(nèi)使其完全融化，細(xì)胞冷凍管的頂部保持在水面以上以避免任何污染；</p><p>　?。?

39、）當(dāng)細(xì)胞完全解凍后，用含75%乙醇的紗布擦拭冷凍管消毒；</p><p>　?。?）在無菌環(huán)境下取出細(xì)胞，置于已有完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿中，置37℃、5％CO2 培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)，次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況。若細(xì)胞密度較高，及時(shí)傳代；</p><p>　　2.3.2 細(xì)胞培養(yǎng)</p><p>　　將Hela細(xì)胞培養(yǎng)于RPMI1640 完全培養(yǎng)基中, 每2

40、天換液1次, 每3天傳代1次。細(xì)胞置于37 ℃、5％CO2 飽和濕度的培養(yǎng)箱中, 取對數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。</p><p>　　2.3.3 細(xì)胞凍存</p><p>　　（1）于凍存管中加入完全培養(yǎng)液、10%DMSO制成凍存液，置于室溫下待用。</p><p>　?。?）選擇處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用

41、吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。</p><p>　　（3）取與細(xì)胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液，并晃動(dòng)試管，制成細(xì)胞凍存懸液（DMSO最后濃度5%—10%）。凍存液中細(xì)胞的最終密度為5×106/mL～1×107/mL。</p><p>　?。?）做好標(biāo)記，標(biāo)明細(xì)胞名稱，保存時(shí)間，所用培養(yǎng)基等。</p><p

42、>　?。?）冷存管置于4℃10min→－20℃30min→－80℃保存。</p><p>　　2.3.4 細(xì)胞毒性檢測</p><p>　?。?）單層培養(yǎng)細(xì)胞單細(xì)胞懸液的制備</p><p>　　棄去培養(yǎng)細(xì)胞(對數(shù)生長期)中的培養(yǎng)液，加入3～4mL PBS液漂洗，棄去PBS。再加入800~1000µL 37℃胰蛋白酶，倒置顯微鏡下觀察，見細(xì)胞稍變圓

43、時(shí)，加入1~2mLRPMI1640完全培養(yǎng)基停止胰蛋白酶消化細(xì)胞作用。最后用吸管反復(fù)吹打，使其分散為單個(gè)細(xì)胞懸液。</p><p><b>　　細(xì)胞接板及加藥</b></p><p>　　取腫瘤細(xì)胞懸液，用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度至5×104個(gè)/mL,不斷打勻并接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板，每孔加入100µL細(xì)胞懸液，使得每孔細(xì)胞數(shù)為5000個(gè)。

44、小心輕放96孔培養(yǎng)板置培養(yǎng)箱溫育（37℃、5％CO2飽合濕度）。待細(xì)胞貼壁后, 吸凈培養(yǎng)基。每孔加入98µL完全培養(yǎng)基和各稀釋度藥物2µL，使得石油醚萃取物藥物終濃度為1mg/mL、10-1mg/mL、10-4mg/mL，乙酸乙酯萃取物藥物終濃度為10-1mg/mL、10-2mg/mL、10-4mg/mL，正丁醇萃取物藥物終濃度為1mg/mL、10-1mg/mL、10-2mg/mL。再平行設(shè)空白對照組(2µ

45、LDMSO加98µL培養(yǎng)基)。以上各濃度和對照組均重復(fù)至少3個(gè)孔。（見圖2-2）</p><p>　　圖2-2 各藥物細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)設(shè)板情況</p><p><b>　　（3）加MTT測定</b></p><p>　　將MTT粉末在避光下用PBS緩沖溶液配制成5mg/mL的母液，避光保存在-20℃冰箱中待用。</p>&l

46、t;p>　　加藥24h后，小心取出96孔培養(yǎng)板。吸去培養(yǎng)基（盡量吸干凈），在避光條件下每孔加入90μL空白培養(yǎng)基 和10μL5mg/mL MTT溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。小心取出板，吸盡上清液, 每孔加入150μL DMSO，再設(shè)三個(gè)本底對照孔（只加150μLDMSO）。不斷振蕩，充分溶解MTT紫色還原產(chǎn)物。置酶標(biāo)儀上于490 nm 波長處測定各藥物組、空白對照組和本底對照組的光密度( OD ) 。</p><p&

47、gt;<b>　　2.4 分析方法</b></p><p>　　取各藥物組、空白對照組和本底對照組的光密度( OD ) ，按以下公式計(jì)算得到藥物對腫瘤細(xì)胞生長的抑制率( IR, % )，對藥效進(jìn)行初步的評(píng)價(jià)。</p><p>　　IR%= ( 1-（OD加藥組-ODDMSO）/（O D對照組-ODDMSO）)×100%</p><p&g

48、t;　　IC50為半抑制率即B/BO=50%時(shí)所對應(yīng)的濃度，半數(shù)抑制是用來衡量藥物誘導(dǎo)凋亡的能力，即誘導(dǎo)能力越強(qiáng)，該數(shù)值越低。其中，不添加抑制物質(zhì)的對照孔的OD值為BO，添加了抑制物質(zhì)的孔的OD值為B。</p><p>　　作各化合物濃度與抑制率直線回歸，求出各萃取物的半數(shù)抑制濃度( IC50 ) [13-14]，比較白蘞的石油醚萃取物、乙酸乙脂萃取物、正丁醇萃取物的抗腫瘤作用。</p><p

49、><b>　　3 結(jié)果與分析</b></p><p>　　3.1 白蘞萃取物對Hela細(xì)胞的抑制作用</p><p>　　MTT法檢測白蘞各萃取物在不同濃度下對體外培養(yǎng)的Hela細(xì)胞的影響，結(jié)果見表3-1、表3-2、表3-3。</p><p>　　3.1.1 白蘞的石油醚萃取物對Hela細(xì)胞的的抑制作用</p><

50、;p>　　表3-1 白蘞的石油醚萃取物對Hela細(xì)胞抑制作用</p><p>　　當(dāng)白蘞的石油醚萃取物藥物終濃度為1000 mg·L-1、100 mg·L-1、0.1 mg·L-1時(shí)，對Hela細(xì)胞的抑制率分別為0.8383、0.2727、0.2481。設(shè)空白對照組和本底對照組對Hela細(xì)胞的抑制率為0。該白蘞的石油醚萃取物的各濃度組與抑制率關(guān)系見圖3-1。</p>

51、<p>　　圖3-1 白蘞的石油醚萃取物濃度C與抑制率關(guān)系圖</p><p>　　結(jié)果分析：由圖3-1可知，Y=0.0006X+0.2310。當(dāng)Y=0.5時(shí)，得出相應(yīng)的藥物濃度，即白蘞的石油醚萃取物的IC50。IC50=448.17 mg·L-1。高、中、低劑量組白蘞的石油醚萃取物的抑制率呈現(xiàn)出劑量的依賴性。</p><p>　　3.1.2 白蘞的乙酸乙酯萃取物

52、對Hela細(xì)胞的抑制作用</p><p>　　表3-2 白蘞的乙酸乙脂萃取物對Hela細(xì)胞的抑制作用</p><p>　　當(dāng)白蘞的乙酸乙脂萃取物藥物終濃度為100 mg·L-1、10 mg·L-1、0.1 mg·L-1時(shí)，對Hela細(xì)胞的抑制率分別為0.7454、0.3643、0.2824?？瞻讓φ战M和本底對照組對Hela細(xì)胞的抑制率為0。乙酸乙酯萃取物各濃度

53、組與抑制率關(guān)系見圖3-2。</p><p>　　圖3-2 白蘞的乙酸乙脂萃取物濃度C與抑制率關(guān)系圖</p><p>　　結(jié)果分析：由圖3-2可知，Y=0.0045X+0.2998。當(dāng)Y=0.5時(shí)，得出相應(yīng)的藥物濃度，即白蘞的乙酸乙酯萃取物的IC50。IC50=44.49mg·L-1。由圖3-2可看出，不同濃度的白蘞乙酸乙酯萃取物對人宮頸癌Hela細(xì)胞抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性。<

54、;/p><p>　　3.1.3 白蘞的正丁醇萃取物對Hela細(xì)胞的抑制作用</p><p>　　表3-3 白蘞的正丁醇萃取物對Hela細(xì)胞的抑制作用</p><p>　　當(dāng)白蘞的正丁醇萃取物藥物終濃度為1000 mg·L-1、100 mg·L-1、10 mg·L-1時(shí)，對Hela細(xì)胞的抑制率分別為0.9324、0.4385、0.3438。

55、空白對照組和本底對照組對Hela細(xì)胞的抑制率為0。白蘞的正丁醇萃取物各濃度組與抑制率關(guān)系見圖3-3。</p><p>　　圖3-3 白蘞的正丁醇萃取物濃度C與抑制率關(guān)系圖</p><p>　　結(jié)果分析：由圖3-3可知，Y=0.0006X+0.3585。當(dāng)Y=0.5時(shí)，得出相應(yīng)的藥物濃度。即為白蘞的正丁醇萃取物的IC50。IC50=235.83mg·L-1。由圖3-3可看出，不同濃

56、度的正丁醇萃取物對人宮頸癌Hela細(xì)胞抑制作用呈現(xiàn)劑量依賴性。</p><p>　　3.2 白蘞的各萃取物對Hela細(xì)胞的抑制作用比較</p><p>　　白蘞各萃取物不同濃度的抑制率呈量效關(guān)系（見表3-1、表3-2、表3-3）。白蘞萃取物在濃度較低的情況下，對Hela細(xì)胞的增值抑制作用較弱，隨著培養(yǎng)液中藥物濃度的增高，對Hela細(xì)胞的增值抑制率不斷提高。在藥物濃度為1000mg/L、1

57、00mg/L時(shí)，石油醚萃取物對Hela細(xì)胞的抑制率分別為0.8383、0.2727。正丁醇萃取物對Hela細(xì)胞的抑制率分別為0.9324、0.4385，皆低于正丁醇萃取物的抑制率（見表3-4）。當(dāng)藥物濃度分別為100mg/L、10mg/L時(shí)，乙酸乙酯萃取物對Hela細(xì)胞的抑制率分別為0.7454、0.3643。皆高于正丁醇萃取物的抑制率（見表3-4）。當(dāng)藥物濃度為0.1mg/L時(shí)，石油醚萃取物對Hela細(xì)胞的抑制率為0.2481，低于乙

58、酸乙酯萃取物對Hela細(xì)胞的抑制率為0.2824。</p><p>　　表3-4 白蘞三種萃取物對Hela細(xì)胞的抑制效果匯總表</p><p>　　白蘞萃取物其細(xì)胞毒性乙酸乙酯＞正丁醇＞石油醚。其中，乙酸乙酯的IC50為44.49mg·L-1具有較高的細(xì)胞毒性。石油醚和正丁醇的IC50分別為448.17mg·L-1、235.83mg·L-1，具有一定的細(xì)胞毒性

59、。空白對照組和本底對照組對Hela細(xì)胞的抑制率為0。</p><p><b>　　4 結(jié)論</b></p><p>　　腫瘤是嚴(yán)重危害人類健康的一大病因,抗腫瘤的藥物研究一直是一個(gè)活躍的研究領(lǐng)地。隨著近年來對中藥抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)和臨床研究的深入開展，中藥抗腫瘤作用日益被肯定，也越來越受到國際社會(huì)的承認(rèn)[17]。中藥在這里占據(jù)著重要的地位。</p>&l

60、t;p>　　近年來在植物中尋找有效而副作用小的抗腫瘤藥物已成為國內(nèi)外重要的課題，關(guān)于中藥抗腫瘤機(jī)理的研究方興未艾。根據(jù)文獻(xiàn)記載顯示白蘞具有一定的抗腫瘤活性。本研究為探究白蘞的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物對體外培養(yǎng)的人宮頸癌Hela細(xì)胞的抑制作用，并比較白蘞的三種萃取物對人宮頸癌Hela細(xì)胞的抑制作用。</p><p>　　本研究采用MTT法對白蘞的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位進(jìn)行體外抗腫瘤

61、活性篩選研究表明，白蘞萃取物的上述各萃取部位對體外培養(yǎng)的Hela細(xì)胞有不同程度的抑制作用。用不同劑量的白蘞石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物以及正丁醇萃取物作用于Hela細(xì)胞后，Hela細(xì)胞的增值均受到一定程度的抑制，其抑制率隨藥物濃度的升高而呈上升趨勢，白蘞石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物抑制率最高分別可達(dá)83.83%、74.54%、93.24%。而三種萃取物的細(xì)胞毒性乙酸乙酯＞正丁醇＞石油醚。說明三者中乙酸乙酯萃取物的抗腫瘤作用

62、最好，正丁醇萃取物次之，石油醚萃取物的抗腫瘤作用最小。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果為開發(fā)白蘞三種萃取物成為新型抗腫瘤藥物提供了又一理論依據(jù)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]林慧君,陳衛(wèi).白蘞多糖PAJM-Ⅰ的分離純化和結(jié)構(gòu)分析[J].海峽藥學(xué),2008;20(4):102-104.</p><p>　　[2]赫軍,暢曉

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68、1) :1-8.</p><p>　　[13]俞琦,蔡琨,田維毅.白蘞醇提物免疫活性的初步研究.貴陽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,27(2) :20.</p><p>　　[14]趙翠蘭,郭桂森,李開源等.白蘞部分藥理作用實(shí)驗(yàn)研究[J].云南中醫(yī)中藥雜志,1996,17(3) :55-58.</p><p>　　[15]陳艷,林新華等.蒲葵子的體外抗癌活性[J]. 福建醫(yī)

69、科大學(xué)學(xué)報(bào),2008;42(2):93-95.</p><p>　　[16]李倩,唐萌,馬鳴等.不同尺寸三氧化二鐵( Fe2 O3 ) 納米粒子的細(xì)胞毒性及氧化作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2005;15(3):1921-1927.</p><p>　　[17]高超,劉穎,蔡曉敏等.百花蛇舌草對U14宮頸癌抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用癌癥雜志,2007;22(6):557-5

70、60.</p><p><b>　　文獻(xiàn)綜述</b></p><p>　　白蘞三種不同萃取物的抗腫瘤活性研究</p><p>　　摘要：白蘞（Ampelopsis japonica(Thunb)Makin0），葡萄科蛇葡萄屬植物的唯一一個(gè)作為常用藥使用的中草藥，隨著許多方面顯著的藥理活性被發(fā)現(xiàn)，白蘞的抗腫瘤活性逐漸受到關(guān)注。本文概述了白蘞的相關(guān)

71、方面研究以及中藥抗腫瘤藥物的研究進(jìn)展，并闡述了白蘞抗腫瘤活性研究的意義。</p><p>　　關(guān)鍵詞：白蘞；中藥；抗腫瘤；意義</p><p>　　中藥白蘞(AmpelopSis japonica(Thunb)Makin0)為葡萄科蛇葡萄屬植物，又名白根,五爪藤,山地瓜。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,性微寒,味苦[1]。《中華人民共和國藥典》2005版收載的白蘞為葡萄科白蘞[ Ampelopsis

72、 japonics( Thunb. )Makino ]的塊根[2]。</p><p>　　中藥因其毒副作用小, 更易于被患者所接受等特點(diǎn), 在抗腫瘤藥物中占有重要地位, 從中草藥中尋找抗腫瘤藥物或放射增敏和防治放療反應(yīng)藥物,以提高治療效果, 正越來越成為人們注目的焦點(diǎn)[3]。原產(chǎn)我國的華北、華東和中南等省區(qū)的白蘞入藥歷史悠久,早在《名醫(yī)別錄》中已有記載,是歷代醫(yī)家治療疔癰的重要藥物[4-5]。具有清熱解毒、消癰散

73、結(jié)、生肌止痛之功效，可用于治療癰腫瘡瘍、瘰疬、燙傷、扭挫傷等;外用也可用于癰、癤、蜂窩組織炎、淋巴結(jié)炎等病癥?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn), 白蘞具有一定的抗腫瘤作用, 但是, 對它三種萃取物的抗腫瘤活性比較尚未見報(bào)道。</p><p><b>　　1.白蘞的研究進(jìn)展</b></p><p>　　1.1 白蘞的化學(xué)成分研究進(jìn)展</p><p>　　現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)

74、，白蘞經(jīng)5％乙醇滲漉提取后根據(jù)理化性質(zhì)及光譜分析鑒定其化學(xué)成分為大黃素甲醚、羽扇豆醇、p-谷甾醇、大黃酚、碳十六酸、大黃素、富馬酸、胡蘿卜甙、沒食子酸、衛(wèi)茅醇。大黃素甲醚、大黃酚、大黃素、富馬酸、沒食子酸具有抗菌和抗真菌作用，這與中醫(yī)藥關(guān)于白蘞的臨床應(yīng)用相一致[6]。</p><p>　　為了進(jìn)一步闡明白蘞的化學(xué)成分，為白蘞的深層開發(fā)提供依據(jù)，郝軍等[7]從白蘞的乙酸乙酯萃取液中分離得到了8個(gè)化合物。利用理化常數(shù)

75、和波譜學(xué)方法(1H—NMR、13C-NMR)鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，分別為沒食子酸、原兒茶酸、龍膽酸、白藜蘆醇、大黃素、羽扇豆醇、p一谷甾醇、胡蘿卜甙。</p><p>　　郝軍等[2]又從其氯仿和乙酸乙酯萃取部分中分離得到了五味子苷 、大黃酚 、大黃素甲醚、大黃素-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 、poriferast-5-en-3β、7α-diol、棕櫚酸、齊墩果酸。</p><p>　　目前

76、所見的研究大多數(shù)是從氯仿、乙酸乙酯等溶劑中萃取分離白蘞中的化合物。</p><p><b>　　1.2 白蘞的應(yīng)用</b></p><p>　　1.2.1 白蘞的藥理作用</p><p><b>　　(1)抗菌活性</b></p><p>　　抗菌是白蘞的主要活性，目前研究的較多。白蘞含有大黃素甲

77、醚、大黃酚、大黃素、富馬酸、沒食子酸等多種抗細(xì)菌和真菌成分，與其臨床應(yīng)用相一致。白蘞的水浸液對同心性毛癬菌、奧杜盎氏小芽胞癬菌、腹股溝和紅色表皮癬菌等真菌有不同程度的抑制作用。水煎劑用平板稀釋法對金黃色葡萄球菌有抑制作用[8]。</p><p>　　將蛇葡萄根、白蘞等4味中藥的70% 乙醇提取物制成外用蛇葡萄根霜?jiǎng)w外抑菌實(shí)驗(yàn)表明，此霜?jiǎng)瘘S色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單胞菌有不同程度的抑制作用[5]?？谇晃?/p>

78、生物通過腐敗消化口腔內(nèi)的滯留物質(zhì)產(chǎn)生揮發(fā)性硫化物及其它異味物質(zhì)導(dǎo)致口臭。朱彩蓮等[9]通過測定揮發(fā)性硫化物，發(fā)現(xiàn)白蘞對臨床采集的牙周病口臭患者唾液細(xì)菌的抑菌率為45% 。</p><p><b>　　(2)抗腫瘤</b></p><p>　　白蘞的甲醇提取物及從中提取純化的momordin對激活蛋白（AP-1）活性及腫瘤細(xì)胞的增生有抑制作用。momordin Ⅰ對腫瘤

79、細(xì)胞的抑制活性最強(qiáng)，其IC50 為22.8 mg/ml。白蘞的甲醇提取物和momordin還對人腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞毒作用，momordinI細(xì)胞毒作用最強(qiáng)，IC50 為 7.280~16.05 mg/ml[10-11]。Kim 等[11]研究了momordinI 對白血病HL-60 細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，其IC50 為19.0 mg/ml，并證明其作用機(jī)制是通過降低Bcl-2:Bax的比例及激活caspase-3，誘導(dǎo)了白血病HL-60 細(xì)胞的

80、凋亡。</p><p>　　許多中藥乙醇提取物均有高度酪氨酸酶抑制作用，能阻截皮膚中黑色素的形成。唐海誼等[9]發(fā)現(xiàn)，白蘞水提物對酪氨酸酶有很強(qiáng)的抑制作用。</p><p><b>　　(3)免疫調(diào)節(jié)活性</b></p><p>　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明[12]，3 種不同劑量的白蘞醇提物（5，10，20 g/kg）對小鼠外周血淋巴細(xì)胞ANAE陽性率、

81、T細(xì)胞增殖能力及巨噬細(xì)胞吞噬功能均有促進(jìn)作用，并隨劑量增加作用增強(qiáng)，量效呈正相關(guān)。李洪娟等[8]認(rèn)為，白蘞提取物可增強(qiáng)小鼠T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的免疫功能，表明白蘞的抗菌作用與其免疫活性有關(guān)，臨床用于抗感染治療可能具有直接抗菌和調(diào)節(jié)集體免疫功能的雙重機(jī)制。</p><p><b>　　(4)興奮作用</b></p><p>　　趙翠蘭[13]觀察了白蘞煎劑對小鼠給藥前后

82、電刺激的痛閾變化，發(fā)現(xiàn)白蘞煎劑對小白鼠有一定的興奮作用，無鎮(zhèn)痛作用。</p><p><b>　　(5)抑制毛發(fā)生長</b></p><p>　　白蘞的水煎劑對小鼠觸須毛囊生長有明顯抑制作用。</p><p>　　1.2.2 白蘞的臨床作用</p><p>　　白蘞屬于清熱解毒藥，苦辛微寒，歸心、胃、肝經(jīng)?？嗪芮鍩峤?/p>

83、毒，味辛能散結(jié)消痛，外用可斂瘡生肌，可用于瘡癰腫毒、燒燙傷。既可內(nèi)服，又可外敷。</p><p>　　白蘞的臨床應(yīng)用有治療癌性發(fā)熱，治療支氣管擴(kuò)張咯血，治療手足皸裂，治療燒傷，治療骨折等。</p><p>　　2. 中藥抗腫瘤藥物的研究進(jìn)展</p><p>　　2.1 中藥抗腫瘤作用的分子生物學(xué)機(jī)制</p><p>　　2.1.1 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)

84、胞凋亡</p><p>　　機(jī)體正常情況下，細(xì)胞增殖和凋亡達(dá)到一種平衡穩(wěn)態(tài)，一旦細(xì)胞的增殖或凋亡發(fā)生異常，這種平衡穩(wěn)態(tài)失調(diào)可導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖形成腫瘤，而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡可達(dá)到使腫瘤縮小，癌癥消退的目的。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證實(shí)，許多天然藥物可以通過十?dāng)_腫瘤細(xì)胞牛長、代謝、增殖等過程，最終誘導(dǎo)觸發(fā)腫瘤細(xì)胞分化發(fā)生凋亡[14]。</p><p>　　葉新苗等[15]運(yùn)用小鼠H22肝癌實(shí)體瘤模型進(jìn)行了實(shí)

85、驗(yàn)，結(jié)果表明消瘕散(阿魏、炮山甲、西紅花等12味藥物組成)通過增強(qiáng)荷瘤小鼠白細(xì)胞介素2(interleukin-l，IL一2)活性，降低Bcl-2表達(dá)水平，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤能力；消瘕散各劑量組腫瘤組織鏡下病理示腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)核固縮、片狀壞死、出血及周邊炎性細(xì)胞浸潤等，還發(fā)現(xiàn)少許核固縮濃染的凋亡小體。結(jié)果表明，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是消瘕散抑制腫瘤的生長作用機(jī)制之一。</p><p>　　2.1.2 抑制腫瘤細(xì)胞增殖<

86、;/p><p>　　正常人體細(xì)胞分裂的速度是在一定范圍內(nèi)進(jìn)行的，當(dāng)機(jī)體受到外在因素的影響或內(nèi)在環(huán)境的失衡，腫瘤細(xì)胞的分裂周期或細(xì)胞凋亡速度改變，腫瘤細(xì)胞數(shù)量持續(xù)增加，腫塊增大[14]。</p><p>　　馬麗萍等[16]在研究夏枯草對人食管癌Ecal09細(xì)胞促凋亡的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，夏枯草作用于ECal09細(xì)胞48 h后，G0／G1細(xì)胞從86．62％下降到68．25％，S期細(xì)胞從8．41％上升到1

87、4．64％。這表明夏枯草能顯著減少G。/G1期的食管癌ECal09細(xì)胞，從而抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。</p><p>　　2.1.3 細(xì)胞毒性作用</p><p>　　對腫瘤細(xì)胞核酸、蛋白質(zhì)合成和代謝的影響腫瘤細(xì)胞的生長增殖較正常細(xì)胞快，主要表現(xiàn)為DNA、RNA和蛋白質(zhì)等生物大分子的合成代謝水平較正常細(xì)胞高，且合成代謝與分解代謝失衡。因此，許多中藥都是通過對腫瘤細(xì)胞核酸、蛋白質(zhì)合成和代謝的影響

88、而發(fā)揮抗癌或抑癌作用的。紫云英根水提取液能抑制胃癌細(xì)胞生長，并可觀測到AGS細(xì)胞的DNA合成受到抑制[17]。</p><p>　　對腫瘤細(xì)胞周期的影響</p><p>　　正常細(xì)胞分裂周期定向、有序地由一個(gè)時(shí)相向下一個(gè)時(shí)相的過渡是由內(nèi)在和外在途徑同時(shí)調(diào)控的，內(nèi)在調(diào)控途徑主要控制S期、G，期和M期；而外在調(diào)控途徑則是為了應(yīng)對外部條件或細(xì)胞周期所出現(xiàn)的缺陷。其中某一環(huán)節(jié)出現(xiàn)異常變化，都會(huì)改變

89、細(xì)胞的分裂，最終引起細(xì)胞的增殖。 </p><p>　　抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶和端粒酶活性</p><p>　　拓?fù)洚悩?gòu)酶I及Ⅱ在真核細(xì)胞DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、重組，以及在形成正確的染色體結(jié)構(gòu)、分離和濃縮中發(fā)揮重要作用。端粒酶是一種具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性的特殊DNA聚合酶。它的重新激活是癌變細(xì)胞一個(gè)帶有普遍性意義的生物學(xué)標(biāo)志，并被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵步驟。</p><p>　　2.

90、1.4 逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥</p><p>　　腫瘤的多藥耐藥(multidrug resistance，MDR)指腫瘤細(xì)胞對一種抗腫瘤藥物出現(xiàn)耐藥的同時(shí)，對其他結(jié)構(gòu)各異、作用機(jī)制不同的抗腫瘤藥物亦產(chǎn)生交義耐藥現(xiàn)象[18]。據(jù)美國癌癥協(xié)會(huì)估計(jì)，90％以上腫瘤患者死于不同程度的耐藥，因此MDR已成為腫瘤化療成功的重要障礙之一。目前公認(rèn)腫瘤細(xì)胞MDR產(chǎn)生的主要原因是多藥耐藥基因編碼的P-糖蛋白的高度表達(dá)。<

91、/p><p>　　2.1.5 對腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響</p><p>　　基質(zhì)金屬蛋白酶和尿激酶型纖溶酶原激活物是參與降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移最主要的2個(gè)蛋白水解酶。研究報(bào)道：白藜蘆醇能夠抑制基質(zhì)金屬蛋白酶2、基質(zhì)金屬蛋白酶9的活性、mRNA及蛋白表達(dá)水平，上調(diào)基質(zhì)蛋白酶組織抑制劑1、上調(diào)基質(zhì)蛋白酶組織抑制劑2的活性、mRNA及蛋白表達(dá)水平，抑制官頸痛侵襲和轉(zhuǎn)移；腫瘤細(xì)胞的

92、遷移運(yùn)動(dòng)能力不僅是腫瘤細(xì)胞侵入周圍組織，而且是侵入和穿出血管所必需的，是腫瘤浸潤的先決條件以及轉(zhuǎn)移擴(kuò)散的重要環(huán)節(jié)。</p><p>　　腫瘤轉(zhuǎn)移的發(fā)生是受到多種相關(guān)基因調(diào)控，如果這些相關(guān)基因在某些條件下被激活或失活均可以誘發(fā)腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移。</p><p>　　2.1.6 對機(jī)體免疫具有增強(qiáng)作用</p><p>　　機(jī)體的免疫功能狀態(tài)隨著腫瘤的不斷生長而進(jìn)行性的下

93、降，特別是晚期帶瘤患者機(jī)體的各種特異性和非特異性免疫功能均受到顯著抑制。許多中藥能激活和增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)的抗腫瘤機(jī)制。</p><p>　　張劍軍等[19]通過清胰化積方聯(lián)合IL-2對胰腺癌小鼠脾淋巴細(xì)胞功能的影響的研究表明：清胰化積方組、清胰化積方聯(lián)合不同劑量的IL-2組的瘤質(zhì)量均小于對照組，抑瘤率分別為37．</p><p>　　84％、44．14％、38．74％和39．64％；各治療

94、組脾淋巴細(xì)胞增殖活性和轉(zhuǎn)化率均高于對照組，并呈現(xiàn)IL-2的劑量依賴性，說明增強(qiáng)脾淋巴細(xì)胞免疫功能是清胰化積方聯(lián)合IL．2抗小鼠胰腺癌的機(jī)制之一。</p><p>　　2.2 抗腫瘤中藥功效與藥理研究</p><p>　　2.2.1 扶正培本與增強(qiáng)免疫</p><p>　　扶正培本類中藥能提高機(jī)體免疫， 調(diào)節(jié)內(nèi)分泌系統(tǒng)，從而預(yù)防癌癥的發(fā)生和發(fā)展，并促進(jìn)造血，保護(hù)骨髓，

95、減少臟器手術(shù)及放化療等毒副反應(yīng)， 激發(fā)或提高機(jī)體自動(dòng)調(diào)節(jié)、控制能力[20]?，F(xiàn)常用扶正培本的中藥有人參、黃芪、白術(shù)、枸杞等。人參性甘、微苦、微溫，有大補(bǔ)元?dú)?、調(diào)營養(yǎng)衛(wèi)之功效，人參含皂甙和多糖類等多種抗腫瘤成分。</p><p>　　2.2.2 軟堅(jiān)散結(jié)與抑制腫瘤生長</p><p>　　軟堅(jiān)散結(jié)類藥可治療濁痰、瘀血等結(jié)聚而形成的瘢積瘰疬諸證，通過直接抑制腫瘤增生、促進(jìn)細(xì)胞凋亡而起到消散堅(jiān)結(jié)

96、、抗腫瘤的作用。常用中藥有夏枯草、海藻、穿山甲、牡蠣等夏枯草味苦辛，性寒，《本經(jīng)》中提到其具有治療瘰疬、鼠瘺、頭瘡、破癥、散癭結(jié)氣、腳腫濕痹等散結(jié)消腫的功效。</p><p>　　2.2.3 活血化瘀與改善血液流變</p><p>　　現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)癌癥伴有血液粘度升高，尤其是血行播散，而活血化瘀藥有抗凝、抗纖、降低血液粘稠度的作用，對防止或減少癌栓形成具重要意義。常見中藥有莪術(shù)、三七、丹參

97、、當(dāng)歸、赤芍等。莪術(shù)辛苦開泄，能行氣破血活血。</p><p>　　2.2.4 理氣化滯與改善脾胃功能</p><p>　　常見腫瘤放化療癥狀有惡心、嘔吐、胃納減退、上腹脹痛、腹瀉、乏力等，多屬脾胃氣虛。理氣類藥如陳皮、柴胡、青皮、木香等能通過改善脾胃功能而具有抗腫瘤的特殊療效。</p><p>　　2.2.5 清熱解毒與抗炎、抗感染、抗突變</p>

98、<p>　　清熱解毒藥具有抑菌殺菌作用，可對抗多種微生物毒素及其它毒素，抑制炎性滲出或炎性增生，從而控制或消除腫塊及其周圍炎癥和水腫；又能控制或縮小腫瘤，改善臟器腔受壓或梗阻，恢復(fù)全身或局部氣血循環(huán)，從而能緩解癥狀[21]。常見的清熱解毒藥物有半枝蓮、白花蛇舌草、魚腥草等。</p><p><b>　　結(jié)語</b></p><p>　　惡性腫瘤是一類嚴(yán)重威脅

99、人類健康的多發(fā)病、常見病。2002 年惡性腫瘤發(fā)病人數(shù)約220 萬，死亡約160萬，預(yù)計(jì)到2020年，我國癌癥發(fā)病人數(shù)將達(dá)到300萬，死亡220萬；全球新發(fā)病例將達(dá)l 500萬，死亡1000萬，人類面臨著防治惡性腫瘤的新挑戰(zhàn)[22]。現(xiàn)有的治療腫瘤手段包括手術(shù)、化療、放療、生物療法和中醫(yī)中藥等五大臨床治療方法。中醫(yī)藥治療是我國治療惡性腫瘤獨(dú)特的手段之一，優(yōu)勢明顯、療效確切，能增強(qiáng)機(jī)體免疫力，減少放化療的毒副反應(yīng)，加強(qiáng)放化療效果，防止腫瘤

100、治療后復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移，在減輕癌癥患者癥狀和痛苦、提高生存質(zhì)量、延長壽命等方面起著極其重要的意義[23]。同時(shí)其具有不良反應(yīng)低，能提高機(jī)體免疫力，不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)；中藥抗腫瘤活性已得到國際公認(rèn)，為近年來研究的熱點(diǎn)[25]。</p><p>　　20世紀(jì)80年代以前，對蛇葡萄屬進(jìn)行深入研究的文獻(xiàn)報(bào)道甚少。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，該屬植物具有多方面顯著的藥理活性，引起了國內(nèi)外學(xué)者的普遍關(guān)注[24]。白蘞（Ampelopsis

101、 japonica(Thunb)Makin0）作為葡萄科蛇葡萄屬植物的唯一一個(gè)作為常用藥使用的中草藥，對其藥理活性的研究逐漸增多。其抗腫瘤活性尤其值得關(guān)注。韓國學(xué)者[10]研究證明：白蘞中提取的momordins對AP-1活性及腫瘤細(xì)胞的增生有抑制作用。目前，所見的研究大多數(shù)是從氯仿、乙酸乙酯等溶劑中萃取分離白蘞中的化合物，對白蘞的石油醚萃取物、乙酸乙脂萃取物、正丁醇萃取物的抗腫瘤活性研究仍待進(jìn)一步的研究。一方面，為白蘞各種劑型的開發(fā)提

102、供理論依據(jù)。另一方面，也為進(jìn)一步探索白蘞的藥理活性打下基礎(chǔ)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 林慧君,陳衛(wèi).白蘞多糖PAJM-Ⅰ的分離純化和結(jié)構(gòu)分析[J]. 海峽藥學(xué),2008;20(4):102-104.</p><p>　　[2] 赫軍,暢曉兵,楊旭. 白蘞的化學(xué)成分(Ⅱ)[J]. 沈陽藥科大學(xué)學(xué)報(bào)

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