人基質(zhì)金屬蛋白酶-2mmp-2酶聯(lián)免疫分析

1、<p>　　人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）酶聯(lián)免疫分析</p><p><b>　　試劑盒使用說明書</b></p><p>　　本試劑盒僅供研究使用。</p><p><b>　　檢測范圍：</b></p><p><b>　　96T</b></p>

2、<p>　　20μg/L -480μg/L</p><p><b>　　使用目的：</b></p><p>　　本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）含量。</p><p><b>　　實(shí)驗(yàn)原理</b></p><p>　　本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法

3、測定標(biāo)本中人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）水平。用純化的</p><p>　　人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次</p><p>　　加入 MMP-2，再與 HRP標(biāo)記的 MMP-2抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過</p><p>　　徹底洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在 HRP酶的催化下

4、轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化</p><p>　　成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在</p><p>　　450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（MMP-2）</p><p><b>　　濃度。</b></p><p><

5、;b>　　試劑盒組成</b></p><p><b>　　1</b></p><p><b>　　2</b></p><p><b>　　3</b></p><p><b>　　4</b></p><p><

6、b>　　5</b></p><p><b>　　6</b></p><p><b>　　30倍濃縮洗滌液</b></p><p><b>　　酶標(biāo)試劑</b></p><p><b>　　20ml×1瓶</b></p>

7、;<p><b>　　6ml×1瓶</b></p><p><b>　　12孔×8條</b></p><p><b>　　6ml×1瓶</b></p><p><b>　　6ml×1瓶</b></p><p

8、><b>　　6ml×1/瓶</b></p><p><b>　　7</b></p><p><b>　　8</b></p><p><b>　　終止液</b></p><p><b>　　6ml×1瓶</b>

9、;</p><p><b>　　0.5ml×1瓶</b></p><p><b>　　1.5ml×1瓶</b></p><p><b>　　1份</b></p><p>　　標(biāo)準(zhǔn)品（960μg/L）</p><p><b>

10、　　標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液</b></p><p><b>　　說明書</b></p><p><b>　　酶標(biāo)包被板</b></p><p><b>　　樣品稀釋液</b></p><p><b>　　顯色劑 A液</b></p><

11、;p><b>　　顯色劑 B液</b></p><p><b>　　9</b></p><p><b>　　10</b></p><p><b>　　11</b></p><p><b>　　12</b></p>

12、<p><b>　　封板膜</b></p><p><b>　　2張</b></p><p><b>　　密封袋</b></p><p><b>　　1個(gè)</b></p><p><b>　　標(biāo)本要求</b></p&g

13、t;<p>　　1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能</p><p>　　馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融</p><p>　　2．不能檢測含NaN3的樣品，因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。</p><p><b>　　操作步驟</b></p

14、><p><b>　　1.</b></p><p>　　標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀</p><p><b>　　釋。</b></p><p><b>　　480μg/L</b></p><p><b&g

15、t;　　240μg/L</b></p><p><b>　　120μg/L</b></p><p><b>　　60μg/L</b></p><p><b>　　5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品</b></p><p><b>　　4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品</b></p&g

16、t;<p><b>　　3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品</b></p><p><b>　　2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品</b></p><p><b>　　1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品</b></p><p>　　150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液</p><p>　　150μl的 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入

17、 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液</p><p>　　150μl的 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液</p><p>　　150μl的 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液</p><p>　　150μl的 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入 150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液</p><p><b>　　30μg/L</b></p

18、><p><b>　　2.</b></p><p>　　加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、</p><p>　　待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，</p><p>　　然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5倍）。加樣

19、將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡</p><p>　　量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。</p><p><b>　　3.</b></p><p><b>　　4.</b></p><p><b>　　5.</b></p><p>　　溫育：用封板膜封板后置 37℃

20、溫育30分鐘。</p><p>　　配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用</p><p>　　洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30秒后棄去，如此</p><p><b>　　重復(fù) 5次，拍干。</b></p><p><b>　　6.</b></p

21、><p><b>　　7.</b></p><p><b>　　8.</b></p><p><b>　　9.</b></p><p>　　加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。</p><p><b>　　溫育：操作同 3。</b&

22、gt;</p><p><b>　　洗滌：操作同 5。</b></p><p>　　顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色</p><p><b>　　15分鐘.</b></p><p>　　10.終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)

23、藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。</p><p>　　11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止</p><p>　　液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。</p><p><b>　　操作程序總結(jié)：</b></p><p><b>　　計(jì)算</b></p><p

24、>　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)， OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的</p><p>　　OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD值計(jì)算出標(biāo)</p><p>　　準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，</p><p>　　即為樣品的實(shí)際濃度。</p>&

25、lt;p><b>　　注意事項(xiàng)</b></p><p>　　1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未</p><p>　　用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。</p><p>　　2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。</p><p>　　

26、3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好</p><p>　　控制在 5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。</p><p>　　4．請(qǐng)每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD值</p><p>　　大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計(jì)<

27、/p><p>　　算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。</p><p>　　5．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。</p><p>　　6．底物請(qǐng)避光保存。</p><p>　　7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).</p><p>　　8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都

28、應(yīng)按傳染物處理。</p><p>　　9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。</p><p>　　10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。</p><p><b>　　保存條件及有效期</b></p><p>　　1．試劑盒保存：；2-8℃。</p><p><b>　　2．有效期：6個(gè)月