牛膝指紋圖譜和牛膝皂苷的提取及其藥理作用的研究.pdf

1、本研究通過光譜學(xué)以及蛋白分析作為指紋圖譜來鑒別懷牛膝、川牛膝的差異：在ABS提取優(yōu)化工藝的基礎(chǔ)上，首先測定了其溶血指數(shù)，然后探討了其對斑馬魚胚胎形態(tài)發(fā)育的影響，以及對淋巴細(xì)胞增殖、腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能及代謝的影響，來探討牛膝皂苷的毒性及藥理作用。最后通過腹腔注射研究了其對球蟲免疫雞免疫功能的影響。 為了分析懷牛膝與川牛膝兩個(gè)不同品種牛膝化學(xué)成分的差異，我們通過紫外，可見光譜法、紅外光譜法、X射線衍射法及蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳

2、法分別建立兩種牛膝的指紋圖譜。結(jié)果顯示：兩種牛膝的紫外光譜、紅外光譜與X射線衍射圖譜存在明顯差異，可有效區(qū)分兩者，而其蛋白質(zhì)指紋圖譜相似，不能有效區(qū)分兩者。 本文采用正交設(shè)計(jì)對懷牛膝總皂苷提取方法進(jìn)行了研究，選擇乙醇濃度、溶劑量、提取時(shí)間以及次數(shù)作為影響ABS醇提取工藝的4個(gè)主要因素。每個(gè)因素3個(gè)水平進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果表明，牛膝皂苷的最佳提取方法為80％乙醇回流2次，每次加醇8倍量，提取時(shí)間為3h。然后以齊墩果酸為對照品，采用香草醛

3、，高氯酸比色法測定牛膝總皂苷的含量為60％。 為了觀察牛膝皂苷的毒性及其藥理作用，我們通過溶血試驗(yàn)測定牛膝皂苷的溶血指數(shù)，觀察牛膝皂苷對斑馬魚胚胎發(fā)育的影響，采用MTT法研究牛膝皂苷對雞體外淋巴細(xì)胞增殖以及對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能及代謝影響等。結(jié)果顯示：牛膝皂苷有一定的溶血作用，溶血指數(shù)為5555，即HD50為180μg/ml；低濃度(1、2 mg/L)牛膝皂苷處理的斑馬魚胚胎，孵化率為100％，高濃度(20mg/ml)時(shí)抑

4、制斑馬魚胚胎的發(fā)育；低濃度(1.56-25μg/ml)牛膝皂苷對淋巴細(xì)胞增殖均無促進(jìn)作用，但在1600μg/ml濃度下對T、B淋巴細(xì)胞的增殖具有抑制作用；低濃度(0.78-25μg/ml)ABS對大鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬功能及代謝無明顯影響，但在50-200μg/ml范圍內(nèi)表現(xiàn)出促進(jìn)作用，500μg/ml濃度時(shí)對巨噬細(xì)胞的代謝有抑制作用。 為了觀察牛膝皂苷對肉雞球蟲免疫的影響，我們于18、25、32、39日齡時(shí)采血分離淋巴細(xì)胞，通

5、過MTT法測定淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化水平，流式細(xì)胞技術(shù)檢測外周血CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的動(dòng)態(tài)變化，并檢測了不同時(shí)期試驗(yàn)雞增重及脾指數(shù)的變化情況。結(jié)果顯示：ABS能夠提高球蟲免疫雞的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化水平，升高CD4+/CD8+比值，各組增重、脾指數(shù)均無顯著差異，這提示注射用牛膝皂苷能夠促進(jìn)球蟲免疫雞的免疫機(jī)能狀態(tài)。 以上結(jié)果表明，懷牛膝與川牛膝的紫外光譜、紅外光譜與X射線衍射圖譜存在明顯差異；醇提懷牛膝總皂苷的最佳工藝為8倍量80％乙