牛膝總皂苷保護(hù)軟骨細(xì)胞作用及其機(jī)制研究.pdf

1、骨關(guān)節(jié)炎(osteoarthritis,OA)是一種以關(guān)節(jié)軟骨退行性病變?yōu)橹饕卣鞯穆怨顷P(guān)節(jié)病。目前臨床應(yīng)用的非甾體抗炎藥有引起胃腸道不良反應(yīng)及破壞軟骨細(xì)胞的弊端。中醫(yī)藥治療OA類疾病歷史悠久,實(shí)踐基礎(chǔ)豐厚,不良反應(yīng)少,因此可深入挖掘中醫(yī)藥治療的特色與優(yōu)勢(shì)。傳統(tǒng)中藥牛膝為莧科植物牛膝(Achyranthes bidentata Bl.)的根,是中醫(yī)臨床上治療OA的常用藥,具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、逐瘀通經(jīng)、引血下行功效。皂苷類成分是牛膝中重

2、要活性物質(zhì),本課題考察了牛膝總皂苷(Achyranthes bidentata Bl. saponins,ABS)對(duì)白介素-1β(IL-1β)和碘乙酸鈉(MIA)引起的大鼠軟骨細(xì)胞損傷的影響。
　　牛膝飲片經(jīng)75％乙醇回流提取,正丁醇萃取,D101大孔吸附樹脂富集收集50%乙醇洗脫液,減壓濃縮,得到ABS提取物。對(duì)ABS含量測(cè)定的5種顯色方法的考察結(jié)果表明:以5%香草醛-冰乙酸:高氯酸:冰乙酸(2:8:50)為最佳測(cè)定方法,峰型、

3、加樣回收率均優(yōu)于其它方法。測(cè)得ABS含量為52.45%。
　?、蛐湍z原酶消化大鼠軟骨,獲得軟骨細(xì)胞。加入(終濃度10 ng/mL)IL-1β,可見大鼠軟骨細(xì)胞活力下降,而3、10、30μg/mL終濃度的ABS能劑量依賴性提高細(xì)胞活力。Hochest33258及Annexin V-FITC/PI流式雙染細(xì)胞術(shù)檢測(cè)顯示, ABS對(duì)IL-1β所致軟骨細(xì)胞凋亡有一定的抑制作用。對(duì)于IL-1β誘導(dǎo)的抗凋亡蛋白Bcl-xL表達(dá)降低和凋亡蛋白B

4、ax、Bad表達(dá)上升,ABS有顯著抑制作用。對(duì)于IL-1β引起的caspase3活性的上升,ABS有顯著抑制作用。ABS還可下調(diào)IL-1β引起的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP3,MMP9)和環(huán)氧化合酶(COX-2)的表達(dá),抑制p53蛋白的磷酸化,并促進(jìn)細(xì)胞增殖抗原(PCNA)的表達(dá)。對(duì)于IL-1β誘導(dǎo)的NF-κB信號(hào)通路活化,ABS能抑制p65亞基的磷酸化,抑制IκBα的降解和磷酸化。
　　200±20 g雄性SD大鼠36只,隨機(jī)分為6組

5、:正常對(duì)照組、模型組、ABS(50,100,200 mg/kg)三個(gè)劑量組、硫酸氨基葡萄糖(75 mg/kg)陽性對(duì)照組。除對(duì)照組外,其余各組大鼠右肢膝關(guān)節(jié)腔注射MIA(1 mg),各組大鼠灌胃給藥或?qū)φ找?觀測(cè)大鼠關(guān)節(jié)腫脹情況。造模后第28天,各組大鼠斷頭取血,分離膝關(guān)節(jié)軟骨標(biāo)本。結(jié)果ABS(100,200mg/kg)可顯著抑制實(shí)驗(yàn)性O(shè)A大鼠關(guān)節(jié)腫脹,降低血清 IL-1β與一氧化氮(NO)水平,抑制軟骨膠原蛋白和蛋白多糖的降解。