根霉與米曲酶原生質(zhì)體一次基因改組后代酶活力發(fā)酵酒釀特性研究【開題報(bào)告】

1、<p><b>　　畢業(yè)論文開題報(bào)告</b></p><p><b>　　生物工程</b></p><p>　　根霉與米曲酶原生質(zhì)體一次基因改組后代酶活力發(fā)酵酒釀特性研究</p><p>　　1. 課題研究意義及國內(nèi)外研究現(xiàn)狀</p><p>　　酒釀是中國的傳統(tǒng)食品，其富含糖類、蛋白質(zhì)等

2、，是深受大眾喜愛的食品之一。近年來，隨著生物技術(shù)的發(fā)展，傳統(tǒng)食品的研究也在不斷的深入中。利用新的技術(shù)去改良和鑒定舊的生產(chǎn)工藝，使之不斷的完善和精確，以達(dá)到使產(chǎn)品的產(chǎn)量增加，使產(chǎn)品的口味、色澤、香氣等多方面的提高，也能使產(chǎn)品中的有害物質(zhì)盡可能的降低。除此之外，新的技術(shù)還能更精確的控制產(chǎn)品的生產(chǎn)過程，從而達(dá)到生產(chǎn)者的目的。微生物原生質(zhì)體融合可以使后代繼承兩個(gè)親本的特性，而經(jīng)過培養(yǎng)后，不同代數(shù)的后代也會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)的區(qū)別，通過后代的變化規(guī)律可以更

3、好進(jìn)行產(chǎn)品生產(chǎn)工藝的調(diào)整。</p><p>　　米曲酶和根霉是發(fā)酵酒釀中主要的微生物，兩種微生物的融合后代制得的曲種可以利用糖化酶活力、蛋白酶活力，以得到不同后代的活力。酒釀的發(fā)酵是通過微生物(根霉、米曲霉等)將糊化后的淀粉糖化，蛋白質(zhì)水解成氨基酸，并使糖化產(chǎn)物通過糖酵解途徑轉(zhuǎn)變成酒精。</p><p>　　通過米曲酶（親本）原生質(zhì)體和根霉（親本）原生質(zhì)體滅活后融合，并培養(yǎng)至一定代數(shù)后進(jìn)行

4、發(fā)酵酒釀。融合后代發(fā)酵所得的產(chǎn)品進(jìn)行酒精度、糖度、酸度等的測(cè)定，得出的結(jié)果與親本（酵母、米曲酶）發(fā)酵酒釀的產(chǎn)品所得結(jié)果進(jìn)行比較，以得出融合后代的發(fā)酵酒釀特性和穩(wěn)定性等遺傳特性和變化規(guī)律。</p><p>　　2. 課題研究的主要內(nèi)容、預(yù)期目標(biāo)和研究方案</p><p><b>　　主要內(nèi)容：</b></p><p>　　1培養(yǎng)基的制備，滅菌，菌

5、種的接種、擴(kuò)大培養(yǎng)</p><p>　　2制備曲種，測(cè)定蛋白酶活力、糖化酶活力</p><p><b>　　3酒釀發(fā)酵</b></p><p>　　4酒釀中乙醇含量、甲醇含量、糖度、酸度和香味物質(zhì)的測(cè)定</p><p><b>　　預(yù)期目標(biāo)：</b></p><p>　　獲得

6、產(chǎn)品，通過產(chǎn)品測(cè)定出的數(shù)據(jù)得出融合后代的發(fā)酵酒釀特性和穩(wěn)定性等遺傳特性和變化規(guī)律</p><p><b>　　研究方案：</b></p><p><b>　　1菌種的擴(kuò)大培養(yǎng)</b></p><p>　　將準(zhǔn)備好的菌種在無菌超凈工作臺(tái)上接種于馬鈴薯固體培養(yǎng)基上，28～30℃下培養(yǎng)48h。</p><p&

7、gt;　　2曲種的制備與數(shù)據(jù)測(cè)定</p><p>　　2.1 用煮好的米飯，平均分裝到培養(yǎng)瓶中，放入高壓滅菌鍋內(nèi)在121℃條件下滅菌40min，排氣、降溫取出，趁熱馬上將瓶?jī)?nèi)米飯培養(yǎng)基抖散，冷至30℃左右，在無菌超凈工作臺(tái)進(jìn)行接種。培養(yǎng)箱28℃下培養(yǎng)3d后，取出風(fēng)干稱重。</p><p>　　2.2 將制備好的曲種取出若干，以酪蛋白為底物利用福林酚法測(cè)定蛋白酶活力，以淀粉為底物利用碘量法測(cè)

8、定糖化酶活力。</p><p><b>　　3酒釀發(fā)酵</b></p><p>　　大米→清理→浸泡→清洗→蒸飯→滅菌→冷卻→接種→固體培養(yǎng)</p><p><b>　　4各項(xiàng)數(shù)據(jù)測(cè)定</b></p><p>　　乙醇含量使用指示劑法測(cè)定，甲醇含量使用品紅-亞硫酸法測(cè)定，糖度使用斐林法測(cè)定，酸度使用

9、滴定法測(cè)定，蛋白含量使用福林酚法測(cè)定，并取酒糟通過質(zhì)譜儀測(cè)定風(fēng)味物質(zhì)。</p><p><b>　　3. 課題進(jìn)度計(jì)劃</b></p><p>　　2010年11月-2011年12月 實(shí)驗(yàn)資料的收集和實(shí)驗(yàn)資料歸納</p><p>　　2011年12月-2011年1月 實(shí)驗(yàn)方案的制定和實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備</p><p>　　201

10、1年1月-2011年2月 曲種的制備及其數(shù)據(jù)測(cè)定</p><p>　　2011年2月-2011年3月 酒釀的制備及其數(shù)據(jù)測(cè)定</p><p><b>　　4. 參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] Hopwood D A,Wright H M.Genetic recombination through protoplast fusion

11、 in Streptomyces [J].J Gen Microbiol,1979,111(1):137-143</p><p>　　[2] 彭幫柱,岳田利,袁亞宏等.酵母菌原生質(zhì)體融合技術(shù)[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2004,13(1):101-10 3.</p><p>　　[3] 王燕.熱-紫外滅活雙親原生質(zhì)體融合選育米曲霉新菌株的研究[J].中國釀造,2008,19:42-4 4.<

12、;/p><p>　　[4] 李立風(fēng),潘力,彭昶等.基因組改組:幾株同源醬油曲霉的多親株電融合育種[J].中國調(diào)味品, 2007,7:14-18.</p><p>　　[5] 粱平彥，劉宏迪，展青霉和產(chǎn)黃青霉的種間體細(xì)胞雜交[J].微生物學(xué)報(bào)，1982，22（3）：248—256.</p><p>　　[6] 蘆志龍，吳冰，袁爾東等.基因組改組技術(shù)及其在微生物育種中的應(yīng)用