健脾理氣化濕方對大鼠脂肪肝保護作用的研究

1、<p>　　健脾理氣化濕方對大鼠脂肪肝保護作用的研究</p><p>　　龔亞華1，侯天祿1,2，成揚1，陳建杰2</p><p>　　1上海市浦東新區(qū)傳染病醫(yī)院 肝科，201299，上海；2上海中醫(yī)藥大學附屬曙光醫(yī)院 肝科，201203，上海。</p><p>　　摘要：目的：研究健脾理氣化濕方對大鼠脂肪肝的保護作用。方法：雄性Wistar大鼠40只，隨

2、機分正常組、模型組、低劑量組、高劑量組。模型組、低劑量和高劑量組以40%CCl4橄欖油溶液1ml/kg體質(zhì)量腹腔注射，2次/周，共4周。模型組、低劑量和高劑量組在第1、2周給予高脂低蛋白飼料，第3、4周予純玉米粉飼料。自造模之日起，按照1ml/100g大鼠體重給予低劑量和高劑量中藥灌胃。實驗結束后大鼠經(jīng)下腔靜脈采血并分離血清，統(tǒng)一于肝臟左葉切取組織，于10%中性福爾馬林固定。檢測血清ALT、AST、GGT活性，肝組織行HE染色。結果：模

3、型組大鼠血清ALT、AST和GGT均較正常組顯著增高（P<0.01）；經(jīng)健脾理氣化濕方中藥干預，ALT、AST和GGT均顯著下降（P<0.05），其中高劑量組ALT和AST下降幅度均優(yōu)于低劑量組（P<0.05），而低劑量組和高劑量組GGT下降幅度無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。HE染色可見模型組大鼠小葉結構紊亂，肝細胞胞質(zhì)疏松，肝細胞變性，胞漿內(nèi)見大量脂肪空泡。健脾理氣化濕方干預組可見大鼠肝細胞損傷及脂肪變性程度明

4、顯減輕，肝小葉結構比較清晰，肝細胞胞漿內(nèi)脂肪空泡與模型</p><p>　　關鍵詞：健脾理氣化濕方，脂肪肝，大鼠。</p><p>　　Study the effect of Jianpiliqi Huashi recipe on fatty liver in rats. GONG Yahua1, HOU Tianlu1,2, CHENG Yang2, CHEN Jianjie1. 1 D

5、epartment of Liver disease, Shanghai Infectious Disease Hospital of Pudong District, 201299, Shanghai; 2 Department of Liver disease, Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2

6、01203, Shanghai.</p><p>　　Abstract: Objective: To study the protective effect of Jianpi Liqi Huashi Recipe on rats with fatty liver. Methods: 40 male Wistar rats were randomly divided into normal, model, low

7、-dose and high-dose group. Rats in model, low-dose and high-dose group were intraperitoneal injected with 40% CCl4 olive oil solution by 1ml/kg body weight, 2 times/week for 4 weeks. Rats in model, low-dose and high-dose

8、 group were given high-fat and low-protein diet during the first 2 weeks, and pure corn diet durin</p><p>　　Keywords: Jianpiliqi Huashi Recipe, fatty liver, rats.</p><p>　　非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic

9、 fatty liver disease，NAFLD）是一種胰島素抵抗（insulin resistance，IR）和遺傳易感性相關的代謝應激性肝損傷，疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver，NAFL）、非酒精性脂肪性肝炎（Non-alcoholic steatohepatitis，NASH）及其相關肝硬化。隨著肥胖及其相關代謝紊亂起病漸趨低齡化，而且程度日益加劇，NAFLD對肝臟健康的影響變

10、得愈來愈嚴重[1,2]。</p><p>　　由于脂肪肝發(fā)病機制十分復雜，導致現(xiàn)代醫(yī)學對其治療缺少有效藥物，目前治療以控制原發(fā)病，對癥治療為主。隨著中醫(yī)在理論研究和臨床研究方面的不斷深入，作為NAFLD的藥物治療途徑之一，中醫(yī)藥對NAFLD的防治具有一定的優(yōu)勢[3]。健脾理氣化濕方系上海浦東新區(qū)傳染病醫(yī)院院內(nèi)協(xié)定方，用于治療NAFLD患者取得了較好療效。為闡明該方的作用，本研究采四氯化碳聯(lián)合高脂低蛋白飲食誘導大鼠

11、脂肪肝模型，使用該方進行干預，以探討該方的保護作用。</p><p><b>　　材料與方法</b></p><p><b>　　1材料</b></p><p><b>　　1.1實驗動物</b></p><p>　　Wistar大鼠40只，雄性，SPF級，體重（170

12、7;10）克，上海西普爾-必凱實驗動物有限公司提供，許可證號：SCXR（滬）：2008-0016。飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學實驗動物中心。</p><p>　　1.2藥物和主要試劑</p><p>　　健脾理氣化濕方，根據(jù)課題組擁有的國家發(fā)明專利進行制備[4]。</p><p>　　分析純CCl4和化學純橄欖油，購自中國醫(yī)藥集團上海化學試劑公司。丙氨酸氨基轉移酶（ALT）

13、、天門冬氨酸氨基轉移酶（AST）、谷氨酰轉肽酶（GGT）檢測試劑盒，購自南京建成生物工程研究所。</p><p><b>　　2方法</b></p><p><b>　　2.1模型制備</b></p><p>　　大鼠適應性喂養(yǎng)1周后，按體重分層隨機法分正常組（10只）、模型組（10只）、低劑量組（10只）、高劑量組（1

14、0只）。模型組、低劑量和高劑量組以40%CCl4橄欖油溶液1ml/kg(不是體重的劑量表述？）體質(zhì)量腹腔注射，2次/周，共4周。正常組大鼠予相同時間、相同部位注射等量生理鹽水。</p><p>　　模型組、低劑量和高劑量組在第1、2周給予高脂低蛋白飼料（79.5%玉米粉、20%豬油、0.5%膽固醇），第3、4周予純玉米粉飼料，自由飲水。普通飼料、高脂低蛋白飼料、純玉米粉飼料均由上海中醫(yī)藥大學動物房提供。正常組常規(guī)

15、飲食，自由飲水。</p><p><b>　　2.2給藥方法</b></p><p>　　按照臨床人體用量8倍和16倍，分別設定低劑量組和高劑量組。自造模之日起，按照1ml/100g大鼠體重給予低劑量和高劑量中藥灌胃。正常組與模型組按1ml/100g大鼠體重給予生理鹽水灌胃。</p><p><b>　　2.3觀察指標</b&g

16、t;</p><p><b>　　2.3.1標本采集</b></p><p>　　實驗結束后大鼠禁食不禁水24h，用3%戊巴比妥鈉2ml/kg體重的劑量腹腔注射，麻醉后的大鼠打開腹腔，然后用10ml注射器經(jīng)下腔靜脈采血，4℃下靜置3h后，3000rpm/min，離心15min，取上清分裝于1.5ml離心管，-70℃低溫保存待測。摘下肝臟，統(tǒng)一于肝臟左葉切取1.0cm

17、x 1.0cmx 0.3cm肝組織2塊，分別于10%中性福爾馬林固定和O.C.T包埋。余下肝組織-70℃低溫保存。</p><p>　　2.3.2肝組織HE染色：</p><p>　　10%中性甲醛溶液固定的肝臟組織修整后于脫水機中脫水，后于自動石蠟包埋機中包埋，4℃保存，切片厚度為4μm，進行常規(guī)蘇木精和伊紅（hematoxylin and eosin，HE）染色[5]。</p&g

18、t;<p>　　2.3.3血清肝臟生化功能：</p><p>　　根據(jù)試劑盒提供的實驗方案，檢測血清ALT、AST、GGT活性。</p><p><b>　　3統(tǒng)計學方法</b></p><p>　　采用SPSS 17.0軟件統(tǒng)計系統(tǒng)進行統(tǒng)計處理。計量資料以±s表示，采用ANOVA程序進行單因素方差分析，并用LSD程序進

19、行兩兩比較，以P<0.05為有統(tǒng)計學差異。</p><p><b>　　結果</b></p><p>　　1各組大鼠肝臟病理改變</p><p>　　顯微鏡下觀察，HE染色可見正常組（改成正常組和圖片名稱對應？）大鼠肝組織結構完整，肝細胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝竇結構清晰，肝細胞形態(tài)正常。模型組大鼠小葉結構紊亂，肝細胞胞質(zhì)疏松，肝

20、細胞變性，胞漿內(nèi)見大量脂肪空泡。健脾理氣化濕方干預組可見大鼠肝細胞損傷及脂肪變性程度明顯減輕，肝小葉結構比較清晰，肝細胞胞漿內(nèi)脂肪空泡與模型組相比有顯著差異，尤其以高劑量組改善程度更為明顯（見圖1）。</p><p>　　A、正常組，B、模型組，C、低劑量組，D、高劑量組</p><p>　　圖1、各組大鼠肝組織病理變化（HE染色，x200倍）。</p><p>　

21、　2各組大鼠血清肝功能變化</p><p>　　模型組大鼠血清肝功能指標ALT、AST和GGT均較正常組顯著增高（P<0.01）；經(jīng)健脾理氣化濕方中藥干預，ALT、AST和GGT均顯著下降（P<0.05），其中健脾理氣化濕方高劑量組ALT和AST下降幅度均優(yōu)于低劑量組（P<0.05），而低劑量組和高劑量組GGT下降幅度無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（見表1）。</p><

22、p>　　表1 各組大鼠血清肝功能的變化 （±s）</p><p>　　與正常組比較，1P<0.01；與模型組比較，2P<0.05、3P<0.01；與低劑量組比較，4P<0.05；5P>0.05</p><p><b>　　討論</b></p><p>　　在NAFLD漫長病程中，NASH為NAFL發(fā)

23、生肝硬化的限速步驟?，F(xiàn)有的動態(tài)肝活檢資料和隊列研究顯示，NAFLD自然轉歸主要取決于其肝臟組織學類型。NAFL患者肝病常呈靜止狀態(tài)（除非受到“二次打擊”發(fā)生了NASH），隨訪10～20年肝硬化發(fā)生率僅0.6%～3%，而NASH患者10年內(nèi)肝硬化發(fā)生率15%～25%。因此對NASH的危害需要高度重視，積極防治對阻止肝纖維化、肝硬化的發(fā)生發(fā)展十分重要[3]。目前現(xiàn)代醫(yī)學對治療脂肪肝尚無特別辦法，治療原發(fā)病采用胰島素增敏劑，治療肥胖采用減肥藥

24、物（奧利司他、西布曲明），針對血脂紊亂采用降血脂藥（貝特類、他汀類），以及抗氧化、抗炎等藥物為主。而臨床實踐證明，此類藥物短期療效并不理想，長期服用又具有肝毒性，使肝功能損害加重。</p><p>　　上海市名中醫(yī)、浦東新區(qū)名中醫(yī)陳建杰教授綜合傳統(tǒng)中醫(yī)理論，并結合自己長期的臨床實踐，認為NAFLD的病因、病機主要有以下幾點：①飲食不節(jié)：NAFLD患者常過食辛辣、膏梁厚味之品，助濕生熱，濕熱內(nèi)蘊，致使肝失條達，脾失

25、健運，氣機郁滯，血脈瘀阻，痰濁內(nèi)生，氣血痰瘀結于脅下，形成本病。②肝失疏泄：由于上海為國際化大都市，節(jié)奏快，競爭激烈，故患者學習、工作、生活壓力較大，極易情志失調(diào)，或濕熱毒邪侵及肝臟，肝失條達，氣機郁結，日久則氣滯血瘀，瘀血停積，肝絡阻塞而成本病。情志為非常重要的誘發(fā)因素，所以肝失疏泄，氣機郁結與本病的發(fā)生亦密切相關。③脾失健運：患者多因憂思傷脾，或病后虛弱，正氣未復，致肝臟失養(yǎng)，氣機不暢，影響脾之健運，精微反為糟柏，濁邪害清，脂濁內(nèi)集

26、，而成本病。④濕滯中焦：由于營養(yǎng)過剩，代謝障礙，加之當代人喜車船代步，多逸少勞，導致濕熱壅結中焦，日久不解，化為痰濕，肝膽疏泄失常，脂濁內(nèi)生，脈絡被阻，停于脅下而成本病[6,7]。</p><p>　　基于對NAFLD的病因病機的深刻認識，陳建杰教授在長期的臨床實踐中，采用疏肝理氣、健脾化濕的方法，不斷探索和總結，最終擬定了健脾理氣化濕方治療NAFLD患者。該方具有疏肝理氣、健脾化濕之功。本次動物實驗顯示該方可以

27、有效減輕四氯化碳聯(lián)合高脂低蛋白飲食誘導的大鼠脂肪肝模型肝組織損傷和脂肪變性，減輕肝臟脂肪沉積；能夠有效改善肝組織病理改變，顯著改善肝臟生化功能，從而減輕肝臟損傷和促進肝功能恢復，具有良好的臨床應用前景，值得進一步深入研究。</p><p><b>　　參考文獻：</b></p><p>　　Fan JG. Epidemiology of non-alcoholic f

28、atty liver disease in China[J]. J Hepatol, 2009, 50(1): 204-210.</p><p>　　Wong VW, Chu WC, Wong GL, et al. Prevalence of non-alcoholic fatty liver disease and advanced fibrosis in Hong Kong Chinese: a popula

29、tion study using proton-magnetic resonance spectroscopy and transient elastography[J]. Gut. 2012; 61(3): 409-415.</p><p>　　中華醫(yī)學會肝病學分會脂肪肝和酒精性肝病學組。非酒精性脂肪性肝病診療指南[J]。中華肝臟病雜志，2010，18（3）：163-166。</p><p&

30、gt;　　成揚，陳建杰，侯天祿，等。一種用于治療脂肪肝的中藥組合物及其用途[P]。中國，申請?zhí)枺?01310669545.7。</p><p>　　Cheng Y, Wang HH, Hu YY, et al. Structural shifts of gut flora in rat acute alcoholic liver injury and jianpi huoxue decoction's e

31、ffect displayed by ERIC-PCR fingerprint[J]. Chin J Integr Med, 2011; 17(5): 361-368.</p><p>　　杜秀萍，陳建杰。陳建杰治療脂肪肝經(jīng)驗[J]。遼寧中醫(yī)藥大學學報，2011，5：81-82。</p><p>　　葉青艷，陳逸云，陳建杰。陳建杰從“肥人多痰濕”論治非酒精性脂肪性肝病經(jīng)驗[J]。 遼寧中醫(yī)