健脾理氣化濕方對(duì)大鼠脂肪肝保護(hù)作用的研究

1、<p>　　健脾理氣化濕方對(duì)大鼠脂肪肝保護(hù)作用的研究</p><p>　　龔亞華1，侯天祿1,2，成揚(yáng)1，陳建杰2</p><p>　　1上海市浦東新區(qū)傳染病醫(yī)院 肝科，201299，上海；2上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院 肝科，201203，上海。</p><p>　　摘要：目的：研究健脾理氣化濕方對(duì)大鼠脂肪肝的保護(hù)作用。方法：雄性Wistar大鼠40只，隨

2、機(jī)分正常組、模型組、低劑量組、高劑量組。模型組、低劑量和高劑量組以40%CCl4橄欖油溶液1ml/kg體質(zhì)量腹腔注射，2次/周，共4周。模型組、低劑量和高劑量組在第1、2周給予高脂低蛋白飼料，第3、4周予純玉米粉飼料。自造模之日起，按照1ml/100g大鼠體重給予低劑量和高劑量中藥灌胃。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后大鼠經(jīng)下腔靜脈采血并分離血清，統(tǒng)一于肝臟左葉切取組織，于10%中性福爾馬林固定。檢測(cè)血清ALT、AST、GGT活性，肝組織行HE染色。結(jié)果：模

3、型組大鼠血清ALT、AST和GGT均較正常組顯著增高（P<0.01）；經(jīng)健脾理氣化濕方中藥干預(yù)，ALT、AST和GGT均顯著下降（P<0.05），其中高劑量組ALT和AST下降幅度均優(yōu)于低劑量組（P<0.05），而低劑量組和高劑量組GGT下降幅度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。HE染色可見模型組大鼠小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松，肝細(xì)胞變性，胞漿內(nèi)見大量脂肪空泡。健脾理氣化濕方干預(yù)組可見大鼠肝細(xì)胞損傷及脂肪變性程度明

4、顯減輕，肝小葉結(jié)構(gòu)比較清晰，肝細(xì)胞胞漿內(nèi)脂肪空泡與模型</p><p>　　關(guān)鍵詞：健脾理氣化濕方，脂肪肝，大鼠。</p><p>　　Study the effect of Jianpiliqi Huashi recipe on fatty liver in rats. GONG Yahua1, HOU Tianlu1,2, CHENG Yang2, CHEN Jianjie1. 1 D

5、epartment of Liver disease, Shanghai Infectious Disease Hospital of Pudong District, 201299, Shanghai; 2 Department of Liver disease, Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2

6、01203, Shanghai.</p><p>　　Abstract: Objective: To study the protective effect of Jianpi Liqi Huashi Recipe on rats with fatty liver. Methods: 40 male Wistar rats were randomly divided into normal, model, low

7、-dose and high-dose group. Rats in model, low-dose and high-dose group were intraperitoneal injected with 40% CCl4 olive oil solution by 1ml/kg body weight, 2 times/week for 4 weeks. Rats in model, low-dose and high-dose

8、 group were given high-fat and low-protein diet during the first 2 weeks, and pure corn diet durin</p><p>　　Keywords: Jianpiliqi Huashi Recipe, fatty liver, rats.</p><p>　　非酒精性脂肪肝（Non-alcoholic

9、 fatty liver disease，NAFLD）是一種胰島素抵抗（insulin resistance，IR）和遺傳易感性相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝損傷，疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝（Non-alcoholic fatty liver，NAFL）、非酒精性脂肪性肝炎（Non-alcoholic steatohepatitis，NASH）及其相關(guān)肝硬化。隨著肥胖及其相關(guān)代謝紊亂起病漸趨低齡化，而且程度日益加劇，NAFLD對(duì)肝臟健康的影響變

10、得愈來(lái)愈嚴(yán)重[1,2]。</p><p>　　由于脂肪肝發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，導(dǎo)致現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)其治療缺少有效藥物，目前治療以控制原發(fā)病，對(duì)癥治療為主。隨著中醫(yī)在理論研究和臨床研究方面的不斷深入，作為NAFLD的藥物治療途徑之一，中醫(yī)藥對(duì)NAFLD的防治具有一定的優(yōu)勢(shì)[3]。健脾理氣化濕方系上海浦東新區(qū)傳染病醫(yī)院院內(nèi)協(xié)定方，用于治療NAFLD患者取得了較好療效。為闡明該方的作用，本研究采四氯化碳聯(lián)合高脂低蛋白飲食誘導(dǎo)大鼠

11、脂肪肝模型，使用該方進(jìn)行干預(yù)，以探討該方的保護(hù)作用。</p><p><b>　　材料與方法</b></p><p><b>　　1材料</b></p><p><b>　　1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物</b></p><p>　　Wistar大鼠40只，雄性，SPF級(jí)，體重（170

12、7;10）克，上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，許可證號(hào)：SCXR（滬）：2008-0016。飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。</p><p>　　1.2藥物和主要試劑</p><p>　　健脾理氣化濕方，根據(jù)課題組擁有的國(guó)家發(fā)明專利進(jìn)行制備[4]。</p><p>　　分析純CCl4和化學(xué)純橄欖油，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）

13、、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自南京建成生物工程研究所。</p><p><b>　　2方法</b></p><p><b>　　2.1模型制備</b></p><p>　　大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按體重分層隨機(jī)法分正常組（10只）、模型組（10只）、低劑量組（10只）、高劑量組（1

14、0只）。模型組、低劑量和高劑量組以40%CCl4橄欖油溶液1ml/kg(不是體重的劑量表述？）體質(zhì)量腹腔注射，2次/周，共4周。正常組大鼠予相同時(shí)間、相同部位注射等量生理鹽水。</p><p>　　模型組、低劑量和高劑量組在第1、2周給予高脂低蛋白飼料（79.5%玉米粉、20%豬油、0.5%膽固醇），第3、4周予純玉米粉飼料，自由飲水。普通飼料、高脂低蛋白飼料、純玉米粉飼料均由上海中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房提供。正常組常規(guī)

15、飲食，自由飲水。</p><p><b>　　2.2給藥方法</b></p><p>　　按照臨床人體用量8倍和16倍，分別設(shè)定低劑量組和高劑量組。自造模之日起，按照1ml/100g大鼠體重給予低劑量和高劑量中藥灌胃。正常組與模型組按1ml/100g大鼠體重給予生理鹽水灌胃。</p><p><b>　　2.3觀察指標(biāo)</b&g

16、t;</p><p><b>　　2.3.1標(biāo)本采集</b></p><p>　　實(shí)驗(yàn)結(jié)束后大鼠禁食不禁水24h，用3%戊巴比妥鈉2ml/kg體重的劑量腹腔注射，麻醉后的大鼠打開腹腔，然后用10ml注射器經(jīng)下腔靜脈采血，4℃下靜置3h后，3000rpm/min，離心15min，取上清分裝于1.5ml離心管，-70℃低溫保存待測(cè)。摘下肝臟，統(tǒng)一于肝臟左葉切取1.0cm

17、x 1.0cmx 0.3cm肝組織2塊，分別于10%中性福爾馬林固定和O.C.T包埋。余下肝組織-70℃低溫保存。</p><p>　　2.3.2肝組織HE染色：</p><p>　　10%中性甲醛溶液固定的肝臟組織修整后于脫水機(jī)中脫水，后于自動(dòng)石蠟包埋機(jī)中包埋，4℃保存，切片厚度為4μm，進(jìn)行常規(guī)蘇木精和伊紅（hematoxylin and eosin，HE）染色[5]。</p&g

18、t;<p>　　2.3.3血清肝臟生化功能：</p><p>　　根據(jù)試劑盒提供的實(shí)驗(yàn)方案，檢測(cè)血清ALT、AST、GGT活性。</p><p><b>　　3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法</b></p><p>　　采用SPSS 17.0軟件統(tǒng)計(jì)系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)量資料以±s表示，采用ANOVA程序進(jìn)行單因素方差分析，并用LSD程序進(jìn)

19、行兩兩比較，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。</p><p><b>　　結(jié)果</b></p><p>　　1各組大鼠肝臟病理改變</p><p>　　顯微鏡下觀察，HE染色可見正常組（改成正常組和圖片名稱對(duì)應(yīng)？）大鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整，肝細(xì)胞以中央靜脈為中心呈放射狀排列，肝竇結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞形態(tài)正常。模型組大鼠小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞胞質(zhì)疏松，肝

20、細(xì)胞變性，胞漿內(nèi)見大量脂肪空泡。健脾理氣化濕方干預(yù)組可見大鼠肝細(xì)胞損傷及脂肪變性程度明顯減輕，肝小葉結(jié)構(gòu)比較清晰，肝細(xì)胞胞漿內(nèi)脂肪空泡與模型組相比有顯著差異，尤其以高劑量組改善程度更為明顯（見圖1）。</p><p>　　A、正常組，B、模型組，C、低劑量組，D、高劑量組</p><p>　　圖1、各組大鼠肝組織病理變化（HE染色，x200倍）。</p><p>　

21、　2各組大鼠血清肝功能變化</p><p>　　模型組大鼠血清肝功能指標(biāo)ALT、AST和GGT均較正常組顯著增高（P<0.01）；經(jīng)健脾理氣化濕方中藥干預(yù)，ALT、AST和GGT均顯著下降（P<0.05），其中健脾理氣化濕方高劑量組ALT和AST下降幅度均優(yōu)于低劑量組（P<0.05），而低劑量組和高劑量組GGT下降幅度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（見表1）。</p><

22、p>　　表1 各組大鼠血清肝功能的變化 （±s）</p><p>　　與正常組比較，1P<0.01；與模型組比較，2P<0.05、3P<0.01；與低劑量組比較，4P<0.05；5P>0.05</p><p><b>　　討論</b></p><p>　　在NAFLD漫長(zhǎng)病程中，NASH為NAFL發(fā)

23、生肝硬化的限速步驟?，F(xiàn)有的動(dòng)態(tài)肝活檢資料和隊(duì)列研究顯示，NAFLD自然轉(zhuǎn)歸主要取決于其肝臟組織學(xué)類型。NAFL患者肝病常呈靜止?fàn)顟B(tài)（除非受到“二次打擊”發(fā)生了NASH），隨訪10～20年肝硬化發(fā)生率僅0.6%～3%，而NASH患者10年內(nèi)肝硬化發(fā)生率15%～25%。因此對(duì)NASH的危害需要高度重視，積極防治對(duì)阻止肝纖維化、肝硬化的發(fā)生發(fā)展十分重要[3]。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)治療脂肪肝尚無(wú)特別辦法，治療原發(fā)病采用胰島素增敏劑，治療肥胖采用減肥藥

24、物（奧利司他、西布曲明），針對(duì)血脂紊亂采用降血脂藥（貝特類、他汀類），以及抗氧化、抗炎等藥物為主。而臨床實(shí)踐證明，此類藥物短期療效并不理想，長(zhǎng)期服用又具有肝毒性，使肝功能損害加重。</p><p>　　上海市名中醫(yī)、浦東新區(qū)名中醫(yī)陳建杰教授綜合傳統(tǒng)中醫(yī)理論，并結(jié)合自己長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐，認(rèn)為NAFLD的病因、病機(jī)主要有以下幾點(diǎn)：①飲食不節(jié)：NAFLD患者常過(guò)食辛辣、膏梁厚味之品，助濕生熱，濕熱內(nèi)蘊(yùn)，致使肝失條達(dá)，脾失

25、健運(yùn)，氣機(jī)郁滯，血脈瘀阻，痰濁內(nèi)生，氣血痰瘀結(jié)于脅下，形成本病。②肝失疏泄：由于上海為國(guó)際化大都市，節(jié)奏快，競(jìng)爭(zhēng)激烈，故患者學(xué)習(xí)、工作、生活壓力較大，極易情志失調(diào)，或濕熱毒邪侵及肝臟，肝失條達(dá)，氣機(jī)郁結(jié)，日久則氣滯血瘀，瘀血停積，肝絡(luò)阻塞而成本病。情志為非常重要的誘發(fā)因素，所以肝失疏泄，氣機(jī)郁結(jié)與本病的發(fā)生亦密切相關(guān)。③脾失健運(yùn)：患者多因憂思傷脾，或病后虛弱，正氣未復(fù)，致肝臟失養(yǎng)，氣機(jī)不暢，影響脾之健運(yùn)，精微反為糟柏，濁邪害清，脂濁內(nèi)集

26、，而成本病。④濕滯中焦：由于營(yíng)養(yǎng)過(guò)剩，代謝障礙，加之當(dāng)代人喜車船代步，多逸少勞，導(dǎo)致濕熱壅結(jié)中焦，日久不解，化為痰濕，肝膽疏泄失常，脂濁內(nèi)生，脈絡(luò)被阻，停于脅下而成本病[6,7]。</p><p>　　基于對(duì)NAFLD的病因病機(jī)的深刻認(rèn)識(shí)，陳建杰教授在長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中，采用疏肝理氣、健脾化濕的方法，不斷探索和總結(jié)，最終擬定了健脾理氣化濕方治療NAFLD患者。該方具有疏肝理氣、健脾化濕之功。本次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示該方可以

27、有效減輕四氯化碳聯(lián)合高脂低蛋白飲食誘導(dǎo)的大鼠脂肪肝模型肝組織損傷和脂肪變性，減輕肝臟脂肪沉積；能夠有效改善肝組織病理改變，顯著改善肝臟生化功能，從而減輕肝臟損傷和促進(jìn)肝功能恢復(fù)，具有良好的臨床應(yīng)用前景，值得進(jìn)一步深入研究。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　Fan JG. Epidemiology of non-alcoholic f

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