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文檔簡介
1、目的:
通過復(fù)制非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠模型并予以活血化痰方干預(yù),探討非酒精性脂肪肝可能的發(fā)病機制,探討活血化痰方對NAFLD大鼠模型的干預(yù)、治療的可能機制,為臨床應(yīng)用活血化痰方防治NAFLD提供實驗依據(jù)。
方法:
健康雄性SD大鼠60只,體重130-150g,級別為清潔級,適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,按體重編號,完全隨機分為正常組(A組,10只)和高脂造模組60只。高脂飼料飼組又分為模型組(B組
2、,20只),二甲雙胍干預(yù)組(C組,10只),活血化痰方低劑量干預(yù)組(D組,10只),活血化痰方高劑量干預(yù)組(E組,10只)。自飼養(yǎng)第8周起,模型組每周隨機處死1只大鼠,取肝臟HE巳染色確定B組大鼠達到重度脂肪肝后結(jié)束實驗。實驗過程中觀察大鼠的一般情況,HE巳染色對肝臟脂肪變性程度及炎癥程度進行分級、評分,全自動生化分析儀檢測血清中ALT、AST、TG、TC含量,免疫蛋白印跡檢測法檢測模型組及空白組大鼠肝組織中CBS、CSE蛋白水平的表達
3、,檢測血清、肝組織NO、H2S水平,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定血清瘦素、脂聯(lián)素、IL-6、IL-10、TNF-α水平。
結(jié)果:
1.本實驗16周成功復(fù)制了大鼠重度非酒精性脂肪性肝(NAFLD)模型。16周末時模型組大鼠體重明顯高于正常組,(P<0.01),B組大鼠肝重量明顯高于A組(P<0.05),B組大鼠肝指數(shù)明顯高于A組(P<0.01),與正常組相比,模型組大鼠血清ALT、AST、TG、TC水平
4、明顯升(P<0.05或P<0.01),與A組相比,B組大鼠肝臟脂肪變程度顯著增加(P<0.01),與A組相比,B組大鼠肝臟炎癥程度顯著增加(P<0.01),與A組比較,B組大鼠肝臟肝組織NO的含量明顯增加,H2S含量明顯減少,兩組有顯著性差異(P<0.01),大鼠肝組織中CBS、CSE蛋白表達水平結(jié)果,B組與A組比較,CBS,CSE蛋白表達水平明顯減低,兩組均有顯著性差異(P<0.05)。與A組相比,B組大鼠血清NO水平明顯升高(P<0
5、.01),與A組相比,B組大鼠血清H2S水平明顯降低(P<0.05),與A組相比,B組大鼠血清IL-6水平明顯升高(P<0.01),與A組相比,B組大鼠血清TNF-α水平明顯升高(P<0.05),與A組相比,B組大鼠血清IL-6水平明顯升高(P<0.01),與A組相比,B組大鼠血清TNF-α水平明顯升高(P<0.05);與A組相比,B組大鼠血清瘦素含量明顯升高(P<0.01),脂聯(lián)素含量明顯降低(P<0.05)。
2.C、
6、D、E組大鼠腹腔脂肪組織較模型組含量少,肝臟體積稍大,偏黃色或暗紅色,部分大鼠肝臟切面有油膩感。B組大鼠肝組織可見重度彌漫性肝細胞大泡性脂肪變,C、D、E組大鼠輕、中度肝細胞大泡性脂肪變,較模型組減輕,A組大鼠肝臟無明顯炎性改變,B組肝臟炎性改變較明顯,大量肝細胞腫脹伴有氣球樣變,部分小葉內(nèi)有少量壞死灶,匯管區(qū)可見大量炎性細胞浸潤并且向小葉內(nèi)延伸,小部分有炎性細胞聚集,C、D、E組大鼠少量肝細胞腫脹伴氣球樣變,無明顯小葉內(nèi)有壞死灶,匯管
7、區(qū)少許炎性細胞浸潤,偶有有炎性細胞聚集,較B組明顯減輕。
3與A組大鼠相比,B組肝組織中CBS、CSE蛋白表達水平顯著降低(P<0.05);與B組相比,C、D、E組蛋白表達水平增高(P<0.05,或P<0.01),與C組相比,D、E組均無差異,D、E組之間無差異。與A組大鼠相比,B組肝組織中NO顯著增高(P<0.01),與B組相比,C、D、E干預(yù)組肝組織中NO降低(P<0.05,或P<0.01),與C組相比,D、E干預(yù)組之
8、間均無差異;與A組相比,B組肝組織中H2S降低(P<0.01),與B組相比,C、D、E組肝組織中H2S升高(P<0.05,或P<0.01),與C、D、E組均無差異,D、E組之間無差異;
4.與A組大鼠相比,B組血清中ALT、AST、TG、TC顯著增高(P<0.01);與B相比,C、D、E組血清中ALT、AST、TG、TC顯著降低(P<0.05,或P<0.01);與C組相比,D、E組均無差異,D、E組之間無差異。
9、 5.與A組大鼠相比,B血清中瘦素水平顯著升高(P<0.01);與B組相比,C組、D組、E組血清中瘦素顯著降低(P<0.05,或P<0.01);與C組相比,E組無差異;與D組有顯著差異;與A組大鼠相比,B組血清中脂聯(lián)素水平顯著降低(P<0.01);與B組相比,C組、D組、E組血清中脂聯(lián)素水平顯著升高(P<0.05,或P<0.01);與C組相比,D組、E組無差異;D組、E組之間無差異
6.血清中IL-6、IL-10、TNF
10、-α的含量變化;血清IL-6水平與A組大鼠相比,B組顯著升高,C組、D組、E組較模型組降低,但三者之間無明顯差異;與A組比較,B組血清IL-10水平顯著降低(P<0.01);與B組相比,C組、D組、E組血清中IL-10水平顯著提高(P<0.05,或P<0.01),C組、E組較活D組提高顯著;血清TNF-α水平與A組比較,B及D組顯著增高(P<0.01),C組、E劑量組較B組有顯著降低;
結(jié)論:
1.高脂飼料喂
11、養(yǎng)8周成功復(fù)制了大鼠單純性脂肪肝(NAFL),16周功復(fù)制了大鼠重度非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型;
2.活血化痰方有減少非酒精性脂肪性肝病大鼠血清TG、TC含量,有降低ALT、AST作用,可有效干預(yù)非酒精性脂肪性肝病大鼠模型的形成;減少血清中IL-6、TNF-α的生成,促進血清中IL-10的生成,可明顯減輕非酒精性脂肪性肝病中的炎癥反應(yīng);
3.脂聯(lián)素、瘦素在脂肪肝的發(fā)病過程中起了重要作用,活血化痰方提高
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