動(dòng)物檢疫專業(yè)方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證檢驗(yàn)檢疫標(biāo)準(zhǔn)管理信息系統(tǒng)

1、動(dòng)物檢疫專業(yè)方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證,馬貴平2013年6月,內(nèi) 容,動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證方案動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序,內(nèi) 容,動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證方案 1選定試行驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn) 2標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作要求 3驗(yàn)證時(shí)間 4備選標(biāo)準(zhǔn)的驗(yàn)證,內(nèi) 容,動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序 1 適用范圍 2 術(shù)語(yǔ)和定義 3 方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng) 4 標(biāo)委會(huì)的驗(yàn)證或/和審定活動(dòng),動(dòng)

2、物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證方案,1選定試行驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn) 云南檢驗(yàn)檢疫局負(fù)責(zé)起草制定的“猴T淋巴細(xì)胞白血病檢疫技術(shù)規(guī)范”（2011B018） 中國(guó)檢科院負(fù)責(zé)起草制定的“牛及其產(chǎn)品中特定轉(zhuǎn)基因成分定性PCR檢測(cè)方法”（2012B398）。 前者涉及的技術(shù)方法有 ELISA 和PCR ，后者涉及的技術(shù)方法是PCR。,動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證方案,1 選定試行驗(yàn)證的標(biāo)準(zhǔn) 備選了2個(gè)正在起草制定的標(biāo)準(zhǔn)：

3、天津檢驗(yàn)檢疫局承擔(dān)的“口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢疫技術(shù)規(guī)范”（2012B031） 福建檢驗(yàn)檢疫局承擔(dān)的“牛病毒性腹瀉/粘膜病檢疫規(guī)范”（2011B464r）。 備選驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)按照被選定驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)的要求進(jìn)行驗(yàn)證準(zhǔn)備。,2 標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作要求,標(biāo)準(zhǔn)起草人按照“動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序 ”對(duì)起草制定的標(biāo)準(zhǔn)送審稿進(jìn)行驗(yàn)證。驗(yàn)證方法敏感性和特異性的陽(yáng)性樣品、陰性樣品量根據(jù)被驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)能達(dá)到的參數(shù)而定。 注：假定方法標(biāo)準(zhǔn)DSe為

4、98%、DSp為95%，置信區(qū)間為95%，DSe和DSp的錯(cuò)估率為5%。陽(yáng)性樣品不應(yīng)少于30份， 陰性樣品不應(yīng)少于73份。標(biāo)準(zhǔn)起草人完成驗(yàn)證試驗(yàn)并取得滿意的結(jié)果后，向動(dòng)檢標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委秘書(shū)處提交標(biāo)準(zhǔn)送審稿及標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證文字材料。,特定置信區(qū)間下不同的DSe和DSp要求的已知樣品的理論數(shù)量,來(lái)自O(shè)IE《Manual of Diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial Animals 2012》：

5、C H A P T E R 1.1.5 PRINCIPLES AND METHODS OF VALIDATION OF DIAGNOSTIC ASSAYS FOR INFECTIOUS DISEASES,2 標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作要求,動(dòng)檢標(biāo)準(zhǔn)專業(yè)委秘書(shū)處收到標(biāo)準(zhǔn)送審稿及其驗(yàn)證材料后，指派2名專家對(duì)有關(guān)材料進(jìn)行審查。審查合格的，秘書(shū)處指定3個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行驗(yàn)證。標(biāo)準(zhǔn)起草人向獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室提供驗(yàn)證所需的樣品，獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室也可以用自己擁有的經(jīng)確認(rèn)的已知

6、樣品。審查不合格的，要求標(biāo)準(zhǔn)起草人繼續(xù)完善相關(guān)材料。獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室按照“動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序 ”對(duì)指定的標(biāo)準(zhǔn)送審稿進(jìn)行驗(yàn)證。并將驗(yàn)證結(jié)果及相關(guān)驗(yàn)證記錄提交給秘書(shū)處。,2 標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作要求,秘書(shū)處指定至少3名專家與標(biāo)準(zhǔn)起草人對(duì)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室的驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行分析、判定。驗(yàn)證結(jié)果符合“動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序 ”相關(guān)要求及被驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)適用目的的，推薦進(jìn)行會(huì)議審定。驗(yàn)證結(jié)果不符合“動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序 ”相關(guān)要求及被驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)不適用

7、目的的，不推薦進(jìn)行會(huì)議審定，要求標(biāo)準(zhǔn)起草人繼續(xù)完善后再驗(yàn)證。,2 標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作要求,負(fù)責(zé)“猴T淋巴細(xì)胞白血病檢疫技術(shù)規(guī)范”驗(yàn)證工作的三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室： 廣西檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室 廣東檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室 上海檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)“牛及其產(chǎn)品中特定轉(zhuǎn)基因成分定性PCR檢測(cè)方法”驗(yàn)證工作的三個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室： 珠海檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室 山東檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室 福建檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室,2 標(biāo)準(zhǔn)

8、驗(yàn)證工作要求,本次標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證工作總負(fù)責(zé)人為孫穎杰責(zé)任人為馬貴平驗(yàn)證工作組專家為鄭騰、薄清如、林志雄、岳志芹。責(zé)任人和專家負(fù)責(zé)本次標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證試驗(yàn)材料的審核。,3 驗(yàn)證時(shí)間,起草制定標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室須于2013年8月底完成驗(yàn)證工作。指定的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室須于2013年9月底完成驗(yàn)證工作。,4 備選標(biāo)準(zhǔn)的驗(yàn)證,指定北京檢驗(yàn)檢疫局、中國(guó)檢科院、遼寧檢驗(yàn)檢疫局、深圳檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)檢實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證天津檢驗(yàn)檢疫局起草制定的“口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢疫技術(shù)規(guī)范”（2

9、012B031）、福建檢驗(yàn)檢疫局承擔(dān)的“牛病毒性腹瀉/粘膜病檢疫規(guī)范”（2011B464r）。標(biāo)準(zhǔn)制定實(shí)驗(yàn)室和獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的驗(yàn)證工作要求與本方案第2條的要求相同。,內(nèi) 容,動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序 1 適用范圍 2 術(shù)語(yǔ)和定義 3 方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng) 4 標(biāo)委會(huì)的驗(yàn)證或/和審定活動(dòng),動(dòng)物疫病診斷方法標(biāo)準(zhǔn)驗(yàn)證程序,1 適用范圍本程序規(guī)定了動(dòng)物檢疫方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂過(guò)程中的驗(yàn)證要求及程序。本程序適

10、用于出入境動(dòng)物檢疫方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂過(guò)程中的驗(yàn)證活動(dòng)。,2 術(shù)語(yǔ)和定義,,方法標(biāo)準(zhǔn)(standard)：為實(shí)現(xiàn)特定檢測(cè)目的，對(duì)所采取的途徑、步驟和手段的規(guī)定要求所做的統(tǒng)一認(rèn)定。它以科學(xué)、技術(shù)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)的綜合成果為基礎(chǔ)，經(jīng)有關(guān)方面協(xié)商一致，由主管機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)，以特定形式發(fā)布，作為共同遵守的準(zhǔn)則和依據(jù)。驗(yàn)證（Verification）：通過(guò)提供客觀證據(jù)對(duì)規(guī)定要求已得到滿足的認(rèn)定。確認(rèn)(Validation)：通過(guò)提供客觀證據(jù)對(duì)特定的預(yù)期用途或應(yīng)

11、用要求已得到滿足的認(rèn)定。,2 術(shù)語(yǔ)和定義,,樣品（Sample）：取自某一整體的一個(gè)或多個(gè)部分，旨在提供該整體的相關(guān)信息，通常作為判斷該整體的基礎(chǔ)。臨界值（Cut-off value）：區(qū)分陰性和陽(yáng)性結(jié)果的試驗(yàn)數(shù)值，是連續(xù)的檢測(cè)結(jié)果中間的一個(gè)值。重復(fù)性（Repeatability）：是指在相同的檢測(cè)條件下，對(duì)同一樣品的同一目標(biāo)分析值進(jìn)行連續(xù)多次測(cè)量，所得結(jié)果之間的一致性。敏感性（Sensitivity）：指檢出的陽(yáng)性樣本占被檢陽(yáng)性

12、樣品總數(shù)的百分比。也就是指診斷/檢測(cè)疾病時(shí)不漏診/不漏檢（假陰性）的機(jī)會(huì)有多大（?。?2 術(shù)語(yǔ)和定義,,特異性（Specificity）：指檢出的陰性樣本占被檢陰性樣品總數(shù)的百分比。也就是指診斷/檢測(cè)疾病時(shí)不誤診（假陽(yáng)性）的機(jī)會(huì)有多大（?。?。線性范圍（Linear range）：檢測(cè)結(jié)果或檢測(cè)結(jié)果的轉(zhuǎn)換值和目標(biāo)檢測(cè)物的濃度呈線性關(guān)系的數(shù)值范圍。在線性范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高,重復(fù)性好,結(jié)論可信度高。再現(xiàn)性（Reproducibi

13、lity）：就是當(dāng)一個(gè)方法被不同實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用于同一樣品的不同重復(fù)的檢測(cè)時(shí)，能夠給出相同結(jié)果的能力。,3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng),驗(yàn)證時(shí)應(yīng)考慮所有影響方法標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)結(jié)果的因素。如果所制修訂的方法標(biāo)準(zhǔn)等同采用了知名的技術(shù)組織或刊物認(rèn)可或發(fā)布的方法，或者是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方法，在被證實(shí)適用于規(guī)定的檢測(cè)/診斷目的之前，都應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。 如果所制修訂的方法標(biāo)準(zhǔn)采用的是非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)（制定）的方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過(guò)的

14、標(biāo)準(zhǔn)方法，在被證實(shí)適用于預(yù)期的檢測(cè)/診斷目的之前，應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)。,3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng),應(yīng)記錄驗(yàn)證活動(dòng)所用的方法及獲得的結(jié)果。選擇樣品時(shí)，應(yīng)注意的因素：質(zhì)量和數(shù)量。選擇試劑時(shí)，應(yīng)注意的因素：標(biāo)準(zhǔn)化，保質(zhì) 方法標(biāo)準(zhǔn)的敏感性的驗(yàn)證：篩查方法要求敏感性必須高。,3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng),方法標(biāo)準(zhǔn)特異性的驗(yàn)證 ： 1 如果是用于確診的，方法標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)具有足夠的特異性，以將檢測(cè)中產(chǎn)生的交叉反應(yīng)降到最低。 2 樣品應(yīng)包括

15、含有目標(biāo)分析物的樣品和含有目標(biāo)分析物的相似物的樣品。,3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng),重復(fù)性的驗(yàn)證重復(fù)性所選擇的樣品應(yīng)該是在方法的線性范圍內(nèi)具有代表性的樣品。所用樣品數(shù)量與前述敏感性和特異性驗(yàn)證試驗(yàn)所用數(shù)量相同。設(shè)定相同的程序、相同的操作人員、在相同的條件下使用相同的儀器、相同的地點(diǎn)在3個(gè)不同的日期進(jìn)行，以保證所有的檢測(cè)是獨(dú)立的。重復(fù)性的變異不能超過(guò)30%。如果超過(guò)30%，就需要進(jìn)行更多的初步研究，以證明該方法是足夠穩(wěn)定的。,3方法

16、標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng),線性范圍臨界值（cut-off 值）方法標(biāo)準(zhǔn)間的比較和協(xié)調(diào) 方法標(biāo)準(zhǔn)間比較是為了證明新方法是現(xiàn)有技術(shù)的提高；方法標(biāo)準(zhǔn)間比較包括對(duì)方法的工作特性（如敏感性和特異性）或?qū)Ψ椒ǖ牟僮魈匦裕ㄈ绯杀?、所需環(huán)境、時(shí)間周期、檢測(cè)量等）進(jìn)行比較。 Robustness 、Ruggedness,Robustness,measure of a test's capacity to remain unaf

17、fected by small changes or variation introduced in test conditions to mimic anticipated routine laboratory operation, part of optimization studies and reflected in repeatability assessments (e.g. incubation times, reacti

18、on temperatures, buffer pH/ionic strength, reagent dilutions, sample condition and/or preparation, etc.).測(cè)試一種試驗(yàn)?zāi)軌虮３植皇苄〉淖兓蛟谠囼?yàn)條件下模仿預(yù)期的常規(guī)實(shí)驗(yàn)室操作產(chǎn)生的變化、優(yōu)化研究部分內(nèi)容產(chǎn)生的變化、重復(fù)性評(píng)估（如孵育時(shí)間，反應(yīng)溫度，緩沖液pH/離子強(qiáng)度，試劑稀釋，樣本條件和/或制劑等反映的影響）中產(chǎn)生的變化的影響

19、的能力。,Ruggedness,A measure of an assay’s capacity to remain unaffected by substantial changes or substitutions in test conditions anticipated in multi-laboratory utilization, part of fitness studies and reproducibility as

20、sessments (shipping conditions, technology transfer, reagents batches, equipment, testing platform and/or environments).一種試驗(yàn)?zāi)軌蛟诙鄠€(gè)實(shí)驗(yàn)室間使用、部分適應(yīng)性研究、再現(xiàn)性評(píng)估（運(yùn)輸條件，技術(shù)轉(zhuǎn)移，試劑批次，設(shè)備，測(cè)試平臺(tái)和/或環(huán)境）等預(yù)期的試驗(yàn)條件下維持其不受較大變化或替代影響的能力。,3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)

21、證活動(dòng),再現(xiàn)性的驗(yàn)證對(duì)再現(xiàn)性的評(píng)估最少需在標(biāo)委會(huì)的三個(gè)實(shí)驗(yàn)室（或3名實(shí)驗(yàn)員）進(jìn)行，應(yīng)對(duì)相同的樣品組使用相同的方法進(jìn)行檢測(cè)。理想狀態(tài)下，這些樣品應(yīng)該是來(lái)自于目標(biāo)動(dòng)物群的獨(dú)立樣品，代表群體中的目標(biāo)檢測(cè)物的活性范圍。如果這樣的樣品不可獲得，那么對(duì)已知陽(yáng)性樣品進(jìn)行系列稀釋以達(dá)到需要的活性范圍也是可以接受的。,3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng),再現(xiàn)性的驗(yàn)證驗(yàn)證再現(xiàn)性所用的樣品，應(yīng)逐個(gè)進(jìn)行分裝、編碼、分發(fā)、運(yùn)輸?shù)絽⒓訉?shí)驗(yàn)室或分發(fā)給實(shí)驗(yàn)員，在相同

22、的條件下儲(chǔ)存。對(duì)參加實(shí)驗(yàn)室（或?qū)嶒?yàn)員）的檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行收集、評(píng)估。這些數(shù)據(jù)包括：實(shí)驗(yàn)室（或?qū)嶒?yàn)員）間平均值、標(biāo)準(zhǔn)偏差、每個(gè)樣品和對(duì)照的變化范圍。,3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng),再現(xiàn)性的驗(yàn)證進(jìn)行再現(xiàn)性評(píng)估時(shí)，建議每個(gè)實(shí)驗(yàn)室（或每個(gè)實(shí)驗(yàn)員）將每個(gè)樣品做兩個(gè)或三個(gè)重復(fù)，以進(jìn)一步評(píng)估方法在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部的重復(fù)性。,3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng),再現(xiàn)性的驗(yàn)證將兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室（或?qū)嶒?yàn)員）的平均值進(jìn)行比較，如果,= 重復(fù)性標(biāo)準(zhǔn)偏差,= 再現(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)偏差

23、,認(rèn)為兩個(gè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的平均值在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒(méi)有顯著差異。,3方法標(biāo)準(zhǔn)制修訂人員的驗(yàn)證活動(dòng),方法的應(yīng)用 只有那些表現(xiàn)出能夠適應(yīng)檢測(cè)目的的方法才可以被應(yīng)用到實(shí)際檢測(cè)工作中。在應(yīng)用過(guò)程中得到行業(yè)、國(guó)家、地區(qū)或國(guó)際認(rèn)可的方法才能夠上升為標(biāo)準(zhǔn)。方法有效性的控制 內(nèi)部質(zhì)量控制、外部質(zhì)量控制方法/標(biāo)準(zhǔn)的文件化 提交驗(yàn)證材料 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)束后，須整理好相應(yīng)的試驗(yàn)記錄、試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告，與有關(guān)方法標(biāo)準(zhǔn)審定申請(qǐng)一并提交給動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化專

24、業(yè)委秘書(shū)處待審定。,4 標(biāo)委會(huì)的驗(yàn)證或/和審定活動(dòng),秘書(shū)處指定進(jìn)行再現(xiàn)性試驗(yàn)的三個(gè)實(shí)驗(yàn)室（或3名實(shí)驗(yàn)員）。秘書(shū)處指定不少于3名專家對(duì)標(biāo)準(zhǔn)制/修訂人提交的方法標(biāo)準(zhǔn)送審材料進(jìn)行技術(shù)審定。有三分之二的審定專家認(rèn)為需要進(jìn)行再驗(yàn)證的，標(biāo)準(zhǔn)制修訂人須對(duì)擬審定的方法標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行再驗(yàn)證。驗(yàn)證結(jié)果符合要求的，經(jīng)認(rèn)監(jiān)委標(biāo)準(zhǔn)化部批準(zhǔn)后，才可參加出入境檢驗(yàn)檢疫動(dòng)物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化專業(yè)委組織的會(huì)議審定。,謝 謝,Thank you very much for your