實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)微生物控制

1、第 四 章實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物和寄生蟲質(zhì)量控制,中科院武漢病毒研究所 安學(xué)芳電話：027-87198353,13797098651 Email：anxf@wh.iov.cn,,,,1、遺傳學(xué)控制2、環(huán)境控制3、微生物學(xué)控制4、營(yíng)養(yǎng)控制,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量控制,,,為什么要進(jìn)行微生物和寄生蟲控制？,威脅人的健康和生命 對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)有影響 使實(shí)驗(yàn)被迫中斷 實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性、重復(fù)性可疑,,1、威脅人的健康和生命（人獸共患?。?（

2、1）病毒：流行性出血熱、淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦炎、B病毒、狂犬病 （2）細(xì)菌：沙門氏菌、結(jié)核分枝桿菌、志賀氏桿菌 （3）寄生蟲：卡氏肺孢子蟲、弓形蟲 在很多情況下，這些病原體動(dòng)物僅呈隱性感染，對(duì)飼養(yǎng)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)人員存在著巨大的潛在危害，很可能造成人員的感染甚至烈性傳染病流行。 危及人類健康甚至生命。,,,2、烈性傳染病對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)造成嚴(yán)重危害（1） 種子群死亡——不能生產(chǎn)。（2） 正在進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)死亡——實(shí)驗(yàn)被迫中斷。

3、 例如：鼠痘、兔流行性出血癥、犬瘟熱、犬細(xì)小病毒性腸炎鼠痘、犬細(xì)小病毒出血性腸炎、兔球蟲病、兔流行性出血熱、犬瘟熱等烈性傳染病，雖不是人畜共患病，但其傳播速度快，會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大批量的死亡，或動(dòng)物群體的健康素質(zhì)下降，從而造成動(dòng)物繁殖能力下降，導(dǎo)致正在進(jìn)行的科學(xué)實(shí)驗(yàn)被迫中止，造成難以計(jì)算的經(jīng)濟(jì)損失。,,,3、影響動(dòng)物生產(chǎn)和生物學(xué)特性的改變獲得免疫或隱性感染的動(dòng)物，會(huì)給人假像造成錯(cuò)誤的結(jié)果隱性感染的病毒和細(xì)菌，如：小鼠肝炎病毒，仙臺(tái)

4、病毒、綠膿桿菌、巴氏桿菌以及囊尾蚴、腸道寄生蟲等等。常常隱性感染而不發(fā)病，給人以假象，看似正常的動(dòng)物，進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后由于應(yīng)激而出現(xiàn)亞健康狀態(tài)，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，使得科研結(jié)果的不真實(shí)可靠，沒(méi)有重復(fù)性，嚴(yán)重的甚至發(fā)病死亡。,4、污染 某些病毒造成細(xì)胞培養(yǎng)物、腫瘤移植物或者以動(dòng)物組織作為生產(chǎn)基質(zhì)的生物制品的污染，不僅干擾試驗(yàn)，還將病毒擴(kuò)散，造成病原傳播，以至于危害人類。,必須對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行微生物和寄生蟲控制,根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB 149

5、22.1-2-2011 對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行等級(jí)分類控制,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分級(jí)第二節(jié) 普通級(jí)動(dòng)物 第三節(jié) 清潔級(jí)動(dòng)物與無(wú)特定病原體動(dòng)物第四節(jié) 悉生動(dòng)物第五節(jié)無(wú)菌動(dòng)物第六節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物和寄生蟲監(jiān)測(cè),主 要 內(nèi) 容,,第一節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分級(jí),依照對(duì)微生物學(xué)質(zhì)量的控制，或根據(jù)微生物凈化程度，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行分級(jí) 國(guó)際：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為三個(gè)等級(jí) 國(guó)內(nèi)：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為四個(gè)等級(jí),,3級(jí),4級(jí),第二節(jié) 普通動(dòng)物(Conventiona

6、l animal, CV),一、基本概念 二、普通動(dòng)物的管理與用途 三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常見(jiàn)人獸共患病四、動(dòng)物間烈性傳染病,,一、基本概念普通級(jí)動(dòng)物又稱一級(jí)動(dòng)物，是微生物分級(jí)控制標(biāo)準(zhǔn)中要求最低的動(dòng)物。要求不攜帶人獸共患病和自身的烈性傳染病的病原及寄生蟲，動(dòng)物體內(nèi)外所攜帶的微生物和寄生蟲很難控制。飼養(yǎng)條件：普通環(huán)境。,,微生物分級(jí)中級(jí)別最低 生活的環(huán)境要求低 微生物控制標(biāo)準(zhǔn)低 質(zhì)量較低 在實(shí)驗(yàn)研究中敏感性低,普通級(jí)動(dòng)物特點(diǎn)（5

7、個(gè)低）,,具體表現(xiàn),1、微生物學(xué)特點(diǎn)： 要求不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原和動(dòng)物烈性傳染病的病原。2、飼養(yǎng)管理： 飼養(yǎng)于開放環(huán)境，但仍然對(duì)溫度，濕度，飼料，墊料，飲水，衛(wèi)生等有一定控制。3、生理學(xué)特點(diǎn)： 外觀健康，飲食排泄正常，無(wú)異常分泌物，無(wú)臨床癥狀，臟器無(wú)眼觀病灶。,,目前還承認(rèn)的普通級(jí)動(dòng)物,大鼠、小鼠沒(méi)有普通級(jí),！,,（一 ）管理具有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證的單位去購(gòu)買動(dòng)物通風(fēng)、干燥、清潔清潔飲用水、干凈

8、飼料，符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物品不要求滅菌，空氣無(wú)需凈化對(duì)溫度、濕度、光照、噪音、氨濃度有要求防蟲、鼠害、大動(dòng)物接種必要的疫苗飼養(yǎng)管理中采取一系列相應(yīng)的措施，如：建立消毒防疫制度、建立并遵守動(dòng)物室操作規(guī)程等。,,二、普通動(dòng)物的管理與用途,,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物原則上是不能用疫苗接種和使用藥物等手段來(lái)預(yù)防和控制傳染病 但是大型實(shí)驗(yàn)動(dòng)物可選擇使用對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾不大的疫苗或藥物。（兔出血熱癥、狂犬?。?1、教學(xué)示教之用。2、某些科學(xué)研究為探索方

9、法而從事的預(yù)試 驗(yàn)之用。3、沒(méi)有培養(yǎng)出高級(jí)別的動(dòng)物，不得以用之。,（二）普通級(jí)動(dòng)物的用途,,三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常見(jiàn)人獸共患病,俗稱瘋狗病或恐水癥，由狂犬病病毒（Rhabdovirus，RV)感染犬引起的，以極度興奮、狂躁不安、流涎、攻擊人獸為特征的一種高度接觸性，人獸共患病。,1、狂犬病 （Rabies),,（一）流行病學(xué)資料： 全球均有發(fā)生，以亞洲和非洲為主。我國(guó)是高發(fā)地區(qū)之一。 過(guò)去3個(gè)月來(lái)，病毒性疾病狂犬病已奪走

10、中國(guó)西南省份云南省5人的生命，中國(guó)已經(jīng)發(fā)起與狂犬病作斗爭(zhēng)的運(yùn)動(dòng)，將近五千條狗已被宰殺。,（二）易感動(dòng)物： 所有的溫血?jiǎng)游锒紝?duì)RV易感。 犬、貓、蝙蝠、狐貍、狼、貓鼬、浣熊、臭鼬等為高危動(dòng)物。人也易感，我國(guó)引發(fā)狂犬病的主要為犬，其次為貓。 （三）傳播途徑： 接觸傳播（唾液）：咬傷、帶毒唾液濺入眼結(jié)膜。（四）潛伏期：十幾天至幾年，幾十年。,潛伏期與傷口距神經(jīng)中樞的距離、侵入病毒的毒力和數(shù)量有關(guān)。,,,咬傷,帶病毒的唾液

11、濺入眼結(jié)膜,臨床癥狀：潛伏期、前驅(qū)期、急性神經(jīng)癥狀期和麻 痹期即昏迷死亡期 。診斷：1. 狂犬病特異性抗原。 2. 在腦組織中存在Negri體（狂犬病病毒包 涵體）。 3. 在腦組織或唾液中用細(xì)胞培養(yǎng)分離到病毒預(yù)防和控制：禁止野犬進(jìn)入動(dòng)物房周圍，對(duì)實(shí)驗(yàn)犬 和實(shí)驗(yàn)人員接種狂犬病疫苗。,電鏡下的狂犬病病

12、毒,狂犬病病毒的結(jié)構(gòu)模式圖,1.主要存在于中樞神經(jīng)組織、唾液腺和唾液內(nèi)。2.人感染狂犬病病毒，且患狂犬病后的死亡率為100%。 3.主要通過(guò)動(dòng)物咬傷或帶病毒的唾液濺入眼結(jié)膜后致病。4.人被動(dòng)物咬傷后，傷口應(yīng)立即徹底清洗，不包扎，并立即（24小時(shí)內(nèi)）到防疫部門進(jìn)行預(yù)防注射。,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)工作者切記：,！,,主要通過(guò)動(dòng)物咬傷或帶病毒的唾液濺入眼結(jié)膜后致病。,人也可感染狂犬病病毒，且患狂犬病后的死亡率為100%,在購(gòu)入犬做實(shí)驗(yàn)時(shí)，從具有生產(chǎn)

13、許可證的標(biāo)準(zhǔn)化犬場(chǎng)購(gòu)入合格實(shí)驗(yàn)犬* 做犬類實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)給所有犬注射狂犬疫苗,由流行性出血熱病毒（Bunyaviridae, Hantavirus漢坦病毒）引起的烈性傳染病，也是很危險(xiǎn)的人獸共患病。病原體：布尼亞病毒科、漢坦病毒（HV）有近30種血清型/基因型，在我國(guó)流行的主要是野鼠型和家鼠型。是一種自然疫源性疾病，主要在野鼠中流行，隱性感染為主。人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、豬和猴均易感。 黑線姬鼠、長(zhǎng)爪沙鼠對(duì)本病特別敏感。,

14、2、流行性出血熱(Epidemic hemorrhagic fever EHF),,,,感染途徑： 呼吸道傳播：污染塵埃，塵埃飛揚(yáng)形成氣溶膠吸入感染 接觸傳播：病毒污染血、尿—破損皮膚接觸傳播 蟲媒傳播：革螨等昆蟲叮咬完整皮膚。 消化道和垂直傳播主要癥狀：大小鼠無(wú)明顯臨床癥狀。人感染后，潛伏期14天，主要表現(xiàn)發(fā)熱、皮膚有出血點(diǎn)、腎功能衰竭和循環(huán)衰竭等癥狀，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致死亡，死亡率較高。,2015年5月全國(guó)法定傳染病

15、疫情概況,2015年5月（5月1日零時(shí)至5月31日24時(shí)），全國(guó)（不含港澳臺(tái)）共報(bào)告法定傳染病727388例，死亡1363人。-國(guó)家衛(wèi)計(jì)委,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施感染案例,劉艷、武桂珍報(bào)道（中國(guó)CDC，2011）：,防止感染流行性出血熱的最主要措施是 滅野鼠、防止野鼠進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)人員感染的示意途徑,,,,在中國(guó)、日本、韓國(guó)、比利時(shí)、英國(guó)有實(shí)驗(yàn)室感染人,是由LCMV引起的人和多種動(dòng)物的病毒性疾病，主要侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，尤其是脈絡(luò)叢和腦膜，是一種

16、重要的人獸共患病。野鼠是LCM病毒的天然宿主。動(dòng)物多呈隱性感染，少數(shù)發(fā)病，出現(xiàn)急性癥狀，死亡率低。,3、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎（ lymphocytic choriomeningitis LCM）,,,,,,皮膚（完、破）,結(jié)膜,吸入,經(jīng)口,,唾液鼻分泌物尿液,腫瘤,可帶病毒,,流行病學(xué)： 傳染源:野鼠是天然宿主。 傳播途徑：接觸傳播，垂直傳播。 易感動(dòng)物：所有的嚙齒類動(dòng)物以及犬、猴、馬、兔、人均易感。臨床癥狀：動(dòng)物

17、多呈隱性感染。少數(shù)發(fā)病，出現(xiàn)急性癥狀，死亡率甚低。人感染后大多呈流感樣、腦膜炎癥狀，預(yù)后良好，僅有極少數(shù)病例死亡。預(yù)防控制：嚴(yán)格控制和防止野鼠、感染動(dòng)物或被污染的移植物等引入動(dòng)物室，是防止發(fā)生本病的關(guān)鍵。,又稱B病毒病（B virus disease），是由與人的單純性皰疹病毒相近的B病毒引起的猴良性皰疹性口炎，可自愈。但人感染B病毒后則產(chǎn)生致死性腦炎或腦脊髓炎。,4、猴皰疹病毒（Simian herpesvirus）,,病原：Cer

18、copithecine Herpesvirus Type 1流行病學(xué)：傳染源:感染B病毒的非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物。 傳播途徑：接觸傳播（咬傷、抓傷）。 易感動(dòng)物：猴、人。臨床癥狀：發(fā)熱、頭痛、器官壞死、出血性休克、 嚴(yán)重致死。診斷：血清學(xué)檢查。預(yù)防和控制：對(duì)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的猴做徹底的檢疫，避 免接觸野生猴類,B病毒可自然感染獼猴、紅面猴、食蟹猴。猴皰疹或

19、潰瘍滲出物中含有病毒，在猴群內(nèi)通過(guò)直接接觸污染物傳播，可能還通過(guò)空氣傳播。人感染Ｂ病毒主要是被猴咬傷所致，當(dāng)人被猴咬傷后應(yīng)立即用肥皂水清洗傷口， 用碘酊消毒，并隔離3周， 出現(xiàn)癥狀，及時(shí)對(duì)癥治療。,購(gòu)入猴做實(shí)驗(yàn)，注意隔離、檢疫和檢測(cè),5、沙門氏菌（salmonella） 沙門氏菌是革蘭氏陰性桿菌，在自然界分布廣泛，是較常見(jiàn)的人畜共患傳染病，主要引起消化系統(tǒng)的疾病。主要是由鼠傷寒沙門氏菌(S.ty

20、phimurium)和腸炎沙門氏菌(S.enterititis)引起（普通級(jí)動(dòng)物排除的）,,易感動(dòng)物：小鼠和豚鼠最易感，靈長(zhǎng)類易感，大鼠較弱，兔具有一定的抗感染能力，對(duì)靈長(zhǎng)類動(dòng)物致病性較強(qiáng)。感染途徑：消化道（吃食、飲水、乳汁），蒼蠅、野鼠為傳播媒介，發(fā)病特點(diǎn)：發(fā)病迅速，死亡率高,豚鼠的脾臟病變,急性發(fā)病動(dòng)物,以急性敗血癥死亡而不表現(xiàn)臨床癥狀,亞急性感染,隨糞便排出病菌，感染同類和人，使其在運(yùn)輸、寒冷和實(shí)驗(yàn)處置等應(yīng)激發(fā)病,,引起動(dòng)

21、物腹瀉、結(jié)膜炎,,,隱性感染動(dòng)物,臨床表現(xiàn),對(duì)干燥、腐敗、日光等因素具有一定抵抗力。對(duì)化學(xué)消毒劑的抵抗力不強(qiáng)。,,預(yù)防和控制,（1）從預(yù)防作手，堅(jiān)持日常消毒，一般常用消毒劑和方法均能達(dá)到消毒目的。（2）發(fā)現(xiàn)患病動(dòng)物和可疑動(dòng)物及時(shí)隔離，盡早處理。（3）對(duì)動(dòng)物的食物和飲水進(jìn)行嚴(yán)格消毒，一旦發(fā)現(xiàn)有動(dòng)物染病，立即撲殺并對(duì)環(huán)境徹底消毒。,革蘭氏陰性桿菌，急性、慢性和帶菌三種表現(xiàn)形式靈長(zhǎng)類動(dòng)物帶菌率較高。引起人和靈長(zhǎng)類動(dòng)物細(xì)菌性痢疾。急

22、性：高熱、嘔吐、排膿血便、劇烈腹痛、 導(dǎo)致死亡。 慢性：糊狀或水樣大便，間歇發(fā)作，自然緩解， 部分長(zhǎng)期隱性帶菌，干擾實(shí)驗(yàn)。,6、志賀菌（Shigella)感染,,7、分枝桿菌(Mycobacterium),結(jié)核分枝桿菌主要有三型，即牛型、人型和 禽型。 人和多種動(dòng)物易感。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，獼猴最敏 感，是影響其健康的 主要疾病之一。,,結(jié)核桿菌為嚴(yán)格需氧菌，在外界環(huán)境中生存力較

23、強(qiáng)，水中存活5個(gè)月，土壤中可存活7個(gè)月。潛伏期十幾天至數(shù)年。（因健康、營(yíng)養(yǎng)、管理、品種、年齡等而異）。,購(gòu)入猴做實(shí)驗(yàn)，注意隔離、檢疫和檢測(cè),由剛第弓形蟲（Toxoplasma gondii）引起世界范圍分布的人畜共患原蟲病。A.寄生部位：卵囊、假包囊、包囊寄生在人的除紅細(xì)胞以外的有核細(xì)胞內(nèi)。B.終末宿主：貓和貓科動(dòng)物。,8、弓形蟲（Toxoplasma gondii）病,我誤食含弓漿蟲成熟卵囊的食物，或含弓漿蟲包囊的肉類和乳類,

24、,C.中間宿主：人、小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、犬和其他家畜、靈長(zhǎng)類等，小鼠是主要的中間宿主。D.感染階段：成熟卵囊，假包囊，包囊 卵囊在潮濕的環(huán)境中可長(zhǎng)期存活，并可抵抗酸堿和大多數(shù)消毒藥。,弓形體病多發(fā)于幼犬，臨床上類似犬瘟熱和犬傳染性肝炎的癥狀。主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、厭食、精神萎頓，嚴(yán)重犬有出血性腹瀉、嘔吐，眼和鼻有分泌物，呼吸困難。成年犬呈隱性感染，懷孕母犬發(fā)生早產(chǎn)或流產(chǎn)。,禁止貓進(jìn)入動(dòng)物房周圍，防止實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼料、飲水被貓

25、糞便污染，一旦感染撲殺整個(gè)感染群。,,四、動(dòng)物間烈性傳染病,1、鼠痘（mouse pox）2、兔出血癥（rabbit epidermic hemorrhagic fever）,,1、鼠痘（mouse pox） 又稱脫腳病(ectromelia)，是由鼠痘病毒感染引起的小鼠急性烈性傳染病。本病全身感染，傳播快，死亡率高，是危害實(shí)驗(yàn)小鼠最為嚴(yán)重的病毒之一。 主要傳染源：病鼠及無(wú)癥狀帶毒鼠,易感動(dòng)物：主要在實(shí)驗(yàn)小鼠中流行，不

26、同品系小鼠對(duì)鼠痘的易感性不同，A、DBA、CBA、KM等小鼠易感。傳播途徑：皮膚傷口、呼吸道、消化道、節(jié)肢動(dòng)物。傳播特點(diǎn)：傳播快、死亡率高。急性病例小鼠可突然發(fā)生死亡。慢性型病例：腳、尾和鼻部出現(xiàn)皮疹和潰瘍，嚴(yán)重者可見(jiàn)腳、尾壞死脫落（痘斑、脫腳、斷尾）,隱性感染的實(shí)驗(yàn)小鼠無(wú)臨床癥狀，但在許多因素作用時(shí)，如運(yùn)輸、X射線照射、人工感染結(jié)核菌、組織移植等，都可激活鼠痘病毒而使鼠痘流行。,實(shí)驗(yàn)處理,,C57BL/6 小鼠對(duì)鼠痘病毒抵抗力

27、較強(qiáng),2、兔出血癥（rabbit epidermic hemorrhagic fever） 又稱兔瘟，是家兔的一種急性烈性傳染病。具有傳播快、病程短，發(fā)病率和死亡率高的特點(diǎn)。分為急性和慢性。 主要感染青壯年兔，且病情嚴(yán)重，多呈急性經(jīng)過(guò)。三月齡以內(nèi)的幼兔較少患病，發(fā)病多呈慢性經(jīng)過(guò)。乳兔不發(fā)病。,接種疫苗,急性發(fā)病開始時(shí)多無(wú)癥狀，常突然倒地，抽搐，尖叫后死亡。病程稍慢的亞急性型，體溫可升高到41℃以上，食欲減退，精神沉郁

28、，被毛粗亂，結(jié)膜潮紅。臨死前呼吸困難，掙扎，角弓反張。慢性發(fā)病時(shí)，體溫升高，精神不振，消瘦，最終衰竭死亡。,為了保持普通級(jí)動(dòng)物的健康必須到有具有動(dòng)物生產(chǎn)許可證的單位去購(gòu)買動(dòng)物。在具有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)許可證的環(huán)境下實(shí)驗(yàn)。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生消毒，新引進(jìn)兔檢疫，定期進(jìn)行檢測(cè)。定期接種疫苗，接種疫苗后，3-4天后即可產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫力，免疫效果可持續(xù)6個(gè)月以上。,一、基本概念 二、潛在感染的病毒 三、條件致病菌四、對(duì)實(shí)驗(yàn)干擾大的寄生蟲,

29、第三節(jié) 清潔級(jí)動(dòng)物與無(wú)特定病原體級(jí)動(dòng)物,,（一）、概念（二）、相同點(diǎn)（三）、不同點(diǎn),一、兩個(gè)級(jí)別動(dòng)物的基本概念,,（一）、基本概念 1、 清潔級(jí)動(dòng)物(Clean animals,CL) 除普通級(jí)動(dòng)物應(yīng)排除的病原體 外，不攜帶對(duì)動(dòng)物危害大和對(duì)科學(xué)研究干擾大的病原的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,不帶有人獸共患病、動(dòng)物烈性傳染病和對(duì)科學(xué)研究干擾大的病原。,（1）是根據(jù)我國(guó)國(guó)情而設(shè)立的等級(jí)動(dòng)物。（2）除普通動(dòng)物應(yīng)該排除的病原外，

30、還不攜帶對(duì)科 學(xué)研究干擾大的病原。（3）來(lái)源于SPF動(dòng)物或剖腹產(chǎn)動(dòng)物。（4）飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中。（5）目前我們國(guó)家使用量比較大的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。,清潔級(jí)動(dòng)物：,2、無(wú)特定病原體級(jí)動(dòng)物（Specific pathogen free animals,SPF)除清潔級(jí)動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病菌和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，簡(jiǎn)稱SPF動(dòng)物。目前國(guó)際上公認(rèn)SPF動(dòng)物適用于所有科研實(shí)驗(yàn)，是國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)級(jí)別的實(shí)驗(yàn)

31、動(dòng)物。,,（1）國(guó)際通用。 （2）SPF動(dòng)物來(lái)源于無(wú)菌動(dòng)物。（3）飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中。（4）目前我們國(guó)家使用廣泛的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。,SPF動(dòng)物：,（二）清潔級(jí)動(dòng)物和SPF動(dòng)物的共同特點(diǎn)： 生活在屏障環(huán)境 內(nèi)環(huán)境中沒(méi)有烈性致病微生物及寄生蟲。 生產(chǎn)、實(shí)驗(yàn)的效果比普通動(dòng)物好。 一旦遭到污染后，病原體的傳播強(qiáng)烈。,（三）不同點(diǎn),清潔級(jí)動(dòng)物：（1）是根據(jù)我國(guó)國(guó)情而設(shè)立的等級(jí)動(dòng)物。（2）除普通級(jí)動(dòng)物應(yīng)該排除的病原外，還不攜帶對(duì)科學(xué)研究干

32、擾大的病原。（3）來(lái)源于SPF動(dòng)物或剖腹產(chǎn)動(dòng)物。,SPF級(jí)動(dòng)物：（1）國(guó)際通用。 （2）除清潔級(jí)動(dòng)物應(yīng)排除的病原體外，不攜帶主要潛在感染病原或條件致病病原和對(duì)研究實(shí)驗(yàn)干擾大的病原。（3）來(lái)源于無(wú)菌動(dòng)物。,！,1．鼠肝炎病毒2．仙臺(tái)病毒3．呼腸病毒III型4．嚙齒類動(dòng)物細(xì)小病毒,二、潛在感染的病毒 （動(dòng)物無(wú)癥狀）,,1．鼠肝炎病毒（mouse hepatitis virus MHV）,病毒特性：冠狀病毒科， 56℃加熱能使病

33、毒感染 性喪失，正常情況下為非致病性，呈 隱性感染。呼吸道繁殖和腸道繁殖2種 毒株。傳染源：病鼠和無(wú)癥狀帶毒鼠。感染途徑：消化道、呼吸道、垂直傳播。易感動(dòng)物：只感染小鼠，人不感染。致病性：可引起小鼠致死性肝炎、腦炎和腸 炎，感染的裸小鼠常呈暴發(fā)性發(fā)病， 改變小鼠機(jī)體的各種免疫應(yīng)答參數(shù)。,,嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)研究,1、在

34、應(yīng)激條件下，引起小鼠致死性肝炎、腦炎、腸炎。臨床上嗜肝型、嗜神經(jīng)型和嗜腸型，表現(xiàn)抑郁倦怠，營(yíng)養(yǎng)不良，體重減輕，嗜神經(jīng)型可見(jiàn)驚厥、旋轉(zhuǎn)和結(jié)膜炎。均具有肝壞死、肝出血。2、改變機(jī)體各種免疫應(yīng)答參數(shù)：降低血清免疫球蛋白水平；影響吞噬細(xì)胞數(shù)目。3、改變酶系統(tǒng)：增高或降低一些肝臟的酶活性。,,感染鼠肝炎的裸鼠waste syndrome,裸鼠的肝臟病變出血和壞死,鼠肝炎是影響科學(xué)研究主要病原之一，也是實(shí)驗(yàn)鼠群中難以清除的病毒之一。裸鼠感染

35、MHV，肝臟均可見(jiàn)大量不規(guī)則的壞死灶，消瘦，作為該病的“哨兵鼠”。血清學(xué)陽(yáng)性鼠，全群淘汰，封閉，消毒，停止生產(chǎn)和實(shí)驗(yàn)活動(dòng)。珍貴品系動(dòng)物，剖腹產(chǎn)和胚胎移植生物凈化處理，并嚴(yán)格消毒措施。,病毒：副粘病毒科，條件致病、潛在感染。易感動(dòng)物：感染大小鼠引起呼吸道疾病，多見(jiàn)于斷 乳小鼠，也可感染倉(cāng)鼠和豚鼠傳播途徑：空氣傳播，隱性感染發(fā)病特點(diǎn)：急性爆發(fā)，造成呼吸道疾病的流行易感小鼠：NIH、129/J、裸鼠、DBA/2

36、較強(qiáng)抵抗力：C57BL/6、AKR/J、BALB/CJ,2．仙臺(tái)病毒(Sendai Virus),,仙臺(tái)病毒,,對(duì)免疫系統(tǒng)的干擾：可嚴(yán)重影響動(dòng)物體液和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答,對(duì)致瘤作用研究的干擾： 誤診和不能復(fù)制白血病,對(duì)小鼠生殖系統(tǒng)的影響：影響胎兒的發(fā)育，乳鼠死亡率增高,,,對(duì)麻醉實(shí)驗(yàn)和吸入毒理學(xué)研究等產(chǎn)生嚴(yán)重干擾,臨床癥狀極輕或不顯癥狀，少數(shù)弓背豎毛，呼吸困難。最難控制的病毒性疾病之一引入基因工程小鼠繁殖，隔離檢疫4-6周，血清學(xué)

37、檢測(cè)陰性方可進(jìn)入設(shè)施剖腹產(chǎn)和胚胎移植凈化,3、呼腸病毒III型(Reovirus type 3 Reo-3),小鼠感染呼腸病毒III型多為呈隱性感染。乳小鼠可見(jiàn)脂肪性下痢，肝炎、腦炎、胰腺炎等癥狀。,,,4、嚙齒類動(dòng)物細(xì)小病毒,小鼠細(xì)小病毒(Minute virus of mice MVM)和大鼠細(xì)小病毒(Rat parvovirus)。迄今所知的唯一抗癌譜廣、具有高度抗癌特異性的微生物，對(duì)肝癌、胃癌、肉瘤等多種腫瘤均有明顯殺傷

38、作用，故其感染將會(huì)給腫瘤的研究造成嚴(yán)重的干擾。,,1.支氣管敗血性波氏桿菌（B.brochiseptica）2.巴氏桿菌(Pasteurella)3.綠膿桿菌(P.aeruginosa)4.鼠棒狀桿菌(C.kutscheri)5.泰澤氏菌(Tyzzer’s organism)6.支原體（Mycoplasma）7.金黃色葡萄球菌（ Staphylococcus aureus）,三、條件致病菌,,○ 家兔和豚鼠尤為敏感，侵害部位

39、是呼吸器官（鼻腔炎、支氣管肺炎）○本菌對(duì)環(huán)境抵抗力較強(qiáng)，可在異種動(dòng)物間互相傳染，傳播性強(qiáng) ○隱性感染，在不良情況下可使動(dòng)物發(fā)病,,,1.支氣管敗血性波氏桿菌（B.brochiseptica）,,革蘭氏陰性短桿菌，無(wú)芽孢。有致病作用的是多殺巴斯德菌和嗜肺巴斯德菌。 △多殺巴斯德菌(P．multocida) 對(duì)兔和小鼠有較強(qiáng)的致病作用，主要侵襲部位呼吸系統(tǒng)。 △嗜肺巴斯德菌(P．pneumotropica)在動(dòng)物的呼吸道、生殖道

40、帶菌率較高，但致病性不強(qiáng)。（清潔級(jí)大鼠）,2.巴氏桿菌(Pasteurella),,G-小桿菌，端生單鞭毛，產(chǎn)生綠黃色熒光色素，本菌在 自然界廣泛存在，并可正常寄居在動(dòng)物皮膚、口腔、鼻 腔及胃腸道。易感動(dòng)物：小鼠、大鼠、豚、兔。感染方式：隱形感染，誘發(fā)、繼發(fā)或混合感染引起慢性炎癥。實(shí)驗(yàn)刺激：如放射性照射、實(shí)驗(yàn)燒傷、外科處理、使用免疫抑制劑或抗生素時(shí)，可誘發(fā)動(dòng)物致命的綠膿桿菌菌血癥，引起內(nèi)臟器官?gòu)V泛的灶性壞死。,3

41、、綠膿桿菌(P.aeruginosa),,北京天壇生物制品股份有限公司的NIH小鼠綠膿桿菌陽(yáng)性率10/10，處理意見(jiàn)是降級(jí)或凈化使用。（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物信息8（89）2008，4,能獨(dú)立生活的最小的微生物，無(wú)細(xì)胞壁。危害實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的支原體，主要有肺支原體(M.pulmonis)、溶神經(jīng)支原體(M.neurolyticum)和關(guān)節(jié)炎支原體(M.arthrilidis)。易感動(dòng)物：大鼠和小鼠。大鼠較小鼠癥狀明顯，可引起鼠呼吸道支原體病和鼠

42、生殖器支原體病，有時(shí)并發(fā)中耳炎形成動(dòng)物“歪頭”病。,4.支原體（Mycoplasma）,,特性：G+桿菌，呈小棒槌狀，無(wú)芽孢和莢膜。致病性：只對(duì)小鼠和大鼠致病，多為隱性感染。寄居在呼吸道和腸道，誘因作用下引起致死性膿毒血癥。,5.鼠棒狀桿菌（C.Kutscheri）,,特性：G+毛發(fā)狀芽孢桿菌致病性：多種動(dòng)物致病，沙鼠和地鼠易感。動(dòng)物多以隱性感染狀態(tài)存在，靶細(xì)胞主要是回盲腸及結(jié)腸粘膜上皮細(xì)胞。出血性腸炎和彌漫性肝灶性壞死。,6

43、.泰澤氏菌（Tyzzer’s organism）,,G+球菌，自然界中無(wú)處不在，空氣、水、灰塵及人和動(dòng)物的排泄物金葡菌腸毒素引起食物中毒大小鼠易感，感染可引起雄鼠化膿性睪丸炎、雌鼠子宮內(nèi)膜炎，通過(guò)胎盤垂直傳遞給子鼠SPF級(jí)大小鼠攜帶檢測(cè)出,,7.金黃色葡萄球菌（ Staphylococcus aureus）,四、寄生蟲感染對(duì)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的干擾,1、掠奪宿主的營(yíng)養(yǎng)因種類、數(shù)量、寄生部位不同，對(duì)動(dòng)物影響不同?；紫x寄生小腸，以半消

44、化物質(zhì)為食，導(dǎo)致動(dòng)物發(fā) 育緩慢、體重下降營(yíng)養(yǎng)不良。螨皮下吸血，鉤蟲移位吸血導(dǎo)致動(dòng)物慢性貧血。2、體表寄生蟲對(duì)宿主的干擾 虱、螨吸血的同時(shí)分泌有毒素的唾液，刺激宿主神經(jīng)末梢產(chǎn)生騷癢。,,3、對(duì)宿主產(chǎn)生機(jī)械損傷 蟲體移行可對(duì)組織、臟器造成損傷。 蛔蟲幼蟲移行，損傷腸壁、肺毛細(xì)血管和肺泡壁。 腸道中，與粘液混合形成栓塞，引起腸梗阻或破裂。4、產(chǎn)生毒性作用 即寄生蟲分泌物、排泄物的毒性。如肝片吸蟲導(dǎo) 致膽管

45、纖維變性，肝臟萎縮硬化。5、對(duì)生理、生化、免疫的影響,1、兔球蟲（Coccidiosis） 家兔的球蟲病可分為腸型、肝型和混合型三種?；旌闲驮谂R床最為常見(jiàn)家兔病初食欲減退 ，精神沉郁，伏臥不動(dòng)，生長(zhǎng)發(fā)育停滯，眼、鼻分泌物增多，體溫略高，貧血、下痢，尿頻，腹圍增大有的兔可突然側(cè)身倒下，頭向后仰，四肢抽搐甚至死亡,2、短膜殼絳蟲（Hvmenolepis nana） ◇常寄生于大、小鼠、倉(cāng)鼠和猴的小腸內(nèi) ◇感染

46、人，且致病性較強(qiáng) ◇短膜殼絳蟲不需要中間宿主,一、概念二、特征三、培育四、飼養(yǎng)和管理五、應(yīng)用,第四節(jié) 無(wú)菌動(dòng)物（germ free animals ，GF ）,,一、概念無(wú)可檢出的一切生命體的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（現(xiàn)有的檢驗(yàn)技術(shù)），是國(guó)際通用動(dòng)物。飼養(yǎng)條件：無(wú)菌隔離器內(nèi)。來(lái)源：第一代通過(guò)無(wú)菌剖腹產(chǎn)術(shù)，人工哺乳獲得。 以后通過(guò)無(wú)菌動(dòng)物雌雄交配繁殖或無(wú)菌剖腹 產(chǎn)術(shù)，保姆鼠代奶擴(kuò)群 （無(wú)菌卵的孵化

47、）。定期檢查：無(wú)一切微生物 和寄生蟲。,,無(wú)菌動(dòng)物在自然界并不存在，必須人為的建成。無(wú)菌動(dòng)物的理論基礎(chǔ)和實(shí)踐依據(jù)在于胎盤屏障和屏障觀念。1895年有了這個(gè)設(shè)想開始，到1969年，已經(jīng)育成了小鼠、家兔、豚鼠、雞、貓、羊、狗、貓、猴、豬等無(wú)菌動(dòng)物。,二、特征 外觀和普通動(dòng)物相同，但是其機(jī)能、形態(tài)結(jié)構(gòu)與普通動(dòng)物有很大不同。除查不到微生物以外，還有許多特征區(qū)別于其它動(dòng)物。,消化系統(tǒng)：腸道肌

48、層薄，盲腸肥大（普通動(dòng)物5-6倍）。易發(fā)生盲腸扭轉(zhuǎn)導(dǎo)致腸壁破裂死亡。腸粘膜絨毛增多，肝臟重量相對(duì)下降 血液循環(huán)系統(tǒng)：心臟相對(duì)縮小，白細(xì)胞減少，波動(dòng)范圍小或值恒定（無(wú)病原侵入）,免疫系統(tǒng)：不發(fā)達(dá)。胸腺、淋巴結(jié)、脾臟小。產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱，血清中IgG、IgM水平低下，血液中無(wú)抗體，對(duì)微生物感染異常敏感。,生殖：無(wú)菌條件對(duì)動(dòng)物生殖影響不大，無(wú)菌大小鼠繁殖率高于普通大小鼠；但是兔與豚鼠因?yàn)槊つc膨大，影響產(chǎn)仔。切除盲腸可增

49、加繁殖率。,代謝：無(wú)菌動(dòng)物血液中含氮量少，腸管對(duì) 水的吸收率低，代謝周期長(zhǎng)。 營(yíng)養(yǎng)：無(wú)菌動(dòng)物體內(nèi)不能合成維生素B 和K， 導(dǎo)致維生素缺乏證 抗輻射能力：強(qiáng) 壽命：長(zhǎng),三、無(wú)菌動(dòng)物的培育,來(lái)源：用剖腹取胎法獲得幼子，使其生來(lái)無(wú)菌培育原理：胎盤屏障作用方法：子宮切開術(shù)（大動(dòng)物）、子宮切除術(shù)（小動(dòng)物）無(wú)菌隔離器中人工喂

50、乳或奶媽代養(yǎng)定期檢測(cè),注意,確定預(yù)產(chǎn)期無(wú)菌剖腹產(chǎn)必須在分娩前數(shù)小時(shí)完成手術(shù)時(shí)間提前過(guò)早,早產(chǎn),幼仔太小,先天不足,不易存活。離正常分娩時(shí)間太近,容易出現(xiàn)手術(shù)感染預(yù)產(chǎn)期和臨產(chǎn)期有一定誤差，但可以作為很重要的參考依據(jù)，做好臨產(chǎn)判斷手術(shù)技術(shù)熟練，時(shí)間短，嚴(yán)格無(wú)菌操作大、小鼠一般不能超過(guò)10min，豚鼠應(yīng)短于5min,四、無(wú)菌動(dòng)物的飼養(yǎng)管理,飼養(yǎng)于隔離環(huán)境無(wú)菌飼養(yǎng)定期檢測(cè)（糞便）補(bǔ)充維生素,無(wú)菌動(dòng)物在因?yàn)橛幸韵绿卣?，所以?duì)微生

51、物感染敏感免疫器官相對(duì)小血液中無(wú)抗體白細(xì)胞數(shù)目相對(duì)少，且恒定產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱無(wú)菌動(dòng)物在消化與代謝方面中有以下特征腸道肌層薄，盲腸肥大體內(nèi)不能合成維生素B和K代謝周期長(zhǎng),對(duì)無(wú)菌動(dòng)物的培育的正確描述無(wú)菌動(dòng)物在自然界并不存在，必須用人為的方法培育而成。生活在隔離系統(tǒng)中。所用一切物品經(jīng)過(guò)消毒滅菌處理。定期對(duì)環(huán)境和動(dòng)物進(jìn)行檢測(cè)。,五、無(wú)菌動(dòng)物的應(yīng)用,微生物研究老年病研究心血管疾病研究免疫學(xué)研究臨床腫瘤研究

52、藥理與毒理研究,,（1）微生物的研究 無(wú)菌動(dòng)物可用于建立具有人正常菌叢或致病菌叢的動(dòng)物模型，變成悉生動(dòng)物，用來(lái)研究某些疾病的病原、微生物之間的拮抗、病毒、真菌。,說(shuō)明大腸桿菌對(duì)痢疾桿菌有拮抗作用,（2）、衰老機(jī)理研究 無(wú)菌動(dòng)物的壽命比同種普通動(dòng)物的壽命長(zhǎng)（無(wú)菌大鼠較普通大鼠壽命長(zhǎng)1-2年)，對(duì)2—3年齡無(wú)菌大鼠的研究證明，其心、腎、肺、腦等部位沒(méi)有檢出與年齡相關(guān)的病變，而作為對(duì)照組的普通大鼠則有這種變化。 提示

53、微生物的存在與機(jī)體衰老有關(guān)。,（3）、免疫學(xué)研究 無(wú)菌動(dòng)物血液中無(wú)特異性抗體，很適合做各種免疫現(xiàn)象的研究。免疫抑制劑常以無(wú)菌動(dòng)物作研究。這是因?yàn)樵谄胀▌?dòng)物中應(yīng)用免疫抑制劑可降低其抵抗力,從而引起繼發(fā)感染而死亡。 例如:無(wú)菌大鼠足底皮下注射γ球蛋白，12天殺死動(dòng)物，觀察腸系膜淋巴結(jié)等，其重量明顯增加。,（4）、臨床上的研究,人們很早就認(rèn)為，齲齒的形成與乳酸桿菌有關(guān)。但是沒(méi)有實(shí)驗(yàn)證實(shí)。無(wú)菌動(dòng)物的出現(xiàn)才使人類研究齲齒變成了可能

54、。無(wú)菌動(dòng)物不發(fā)生齲齒。沒(méi)有細(xì)菌的參與齲齒不可能形成，細(xì)菌是此病的元兇。引起齲齒的細(xì)菌——鏈球菌。,（5）、在腫瘤研究中的應(yīng)用 小鼠腫瘤常由病毒引起，有些病毒還可以通過(guò)胎盤傳播，用無(wú)菌小鼠有研究腫瘤的價(jià)值。研究發(fā)現(xiàn)蘇鐵素在普通動(dòng)物體內(nèi),可被細(xì)菌分解產(chǎn)生致癌物質(zhì)而引發(fā)腫瘤,但在無(wú)菌體內(nèi)則不會(huì)。無(wú)菌動(dòng)物可在腫瘤發(fā)生與微生物的關(guān)系以及致癌物質(zhì)的致癌作用研究中發(fā)揮重要作用。,（6）、藥理與毒理研究 觀察發(fā)現(xiàn)普通級(jí)豚鼠對(duì)青霉素的敏感

55、性高于無(wú)菌豚鼠,這是因?yàn)榍嗝顾剡^(guò)敏與腸道菌群代謝有關(guān)。普通級(jí)動(dòng)物進(jìn)食大豆易于中毒,而無(wú)菌動(dòng)物則不會(huì)。提示某些物質(zhì)的毒理作用常與腸道微生物代謝有關(guān)。無(wú)菌動(dòng)物適用于慢性毒性實(shí)驗(yàn)。,第五節(jié) 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的微生物和寄生蟲監(jiān)測(cè),1、監(jiān)測(cè)的意義2、監(jiān)測(cè)標(biāo)準(zhǔn)3、目的,保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量及標(biāo)準(zhǔn)化的必要手段,GB 14922.2-2011,微生物檢測(cè)目的掌握實(shí)驗(yàn)動(dòng)物群體中微生物和寄生蟲的感染狀況及時(shí)發(fā)現(xiàn)問(wèn)題并進(jìn)行有效控制保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的的微生物等

56、級(jí)質(zhì)量,4. 檢測(cè)頻率 普通動(dòng)物 清潔動(dòng)物 SPF動(dòng)物 無(wú)菌動(dòng)物,,每三個(gè)月至少檢測(cè)動(dòng)物一次,每年檢測(cè)動(dòng)物一次，每2-4周檢查一次動(dòng)物的生活環(huán)境標(biāo)本和糞便標(biāo)本,,5.取樣要求 取成年動(dòng)物,6. 檢測(cè)項(xiàng)目分類 必須檢測(cè)項(xiàng)目：每次都要必須檢測(cè) 必要時(shí)檢測(cè)項(xiàng)目：是指從國(guó)外引進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物時(shí)；懷疑有本病流行時(shí)；申請(qǐng)實(shí)驗(yàn)許可證時(shí)必須檢測(cè)。,,表2 豚鼠、地鼠、兔病原菌檢測(cè)項(xiàng)目,,表3 犬、猴病原菌項(xiàng)目,表

57、3 犬、猴病原菌項(xiàng)目,表4 小鼠、大鼠病毒檢測(cè)項(xiàng)目,,,表5 豚鼠、地鼠、兔病毒檢測(cè)項(xiàng)目,表5 豚鼠、地鼠、兔病毒檢測(cè)項(xiàng)目,表6 犬、猴病毒檢測(cè)項(xiàng)目,表6 犬、猴病毒檢測(cè)項(xiàng)目,表7 小鼠和大鼠寄生蟲學(xué)檢測(cè)指標(biāo),,表8 豚鼠、地鼠和兔寄生蟲學(xué)檢測(cè)指標(biāo),,表9 犬和猴寄生蟲學(xué)檢測(cè)指標(biāo),,表3 犬和猴寄生蟲學(xué)檢測(cè)指標(biāo),思考題：1.為什么要對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行微生物學(xué)質(zhì)量控制？2.我國(guó)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是如何進(jìn)行分級(jí)的？不同等級(jí)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各有哪些