實驗動物學微生物控制

1、第 四 章實驗動物微生物和寄生蟲質量控制,中科院武漢病毒研究所 安學芳電話：027-87198353,13797098651 Email：anxf@wh.iov.cn,,,,1、遺傳學控制2、環(huán)境控制3、微生物學控制4、營養(yǎng)控制,實驗動物標準化質量控制,,,為什么要進行微生物和寄生蟲控制？,威脅人的健康和生命 對動物生產(chǎn)有影響 使實驗被迫中斷 實驗的準確性、重復性可疑,,1、威脅人的健康和生命（人獸共患病） （

2、1）病毒：流行性出血熱、淋巴細胞脈絡叢腦炎、B病毒、狂犬病 （2）細菌：沙門氏菌、結核分枝桿菌、志賀氏桿菌 （3）寄生蟲：卡氏肺孢子蟲、弓形蟲 在很多情況下，這些病原體動物僅呈隱性感染，對飼養(yǎng)和動物實驗人員存在著巨大的潛在危害，很可能造成人員的感染甚至烈性傳染病流行。 危及人類健康甚至生命。,,,2、烈性傳染病對實驗動物生產(chǎn)、實驗造成嚴重危害（1） 種子群死亡——不能生產(chǎn)。（2） 正在進行的實驗死亡——實驗被迫中斷。

3、 例如：鼠痘、兔流行性出血癥、犬瘟熱、犬細小病毒性腸炎鼠痘、犬細小病毒出血性腸炎、兔球蟲病、兔流行性出血熱、犬瘟熱等烈性傳染病，雖不是人畜共患病，但其傳播速度快，會導致實驗動物大批量的死亡，或動物群體的健康素質下降，從而造成動物繁殖能力下降，導致正在進行的科學實驗被迫中止，造成難以計算的經(jīng)濟損失。,,,3、影響動物生產(chǎn)和生物學特性的改變獲得免疫或隱性感染的動物，會給人假像造成錯誤的結果隱性感染的病毒和細菌，如：小鼠肝炎病毒，仙臺

4、病毒、綠膿桿菌、巴氏桿菌以及囊尾蚴、腸道寄生蟲等等。常常隱性感染而不發(fā)病，給人以假象，看似正常的動物，進行動物實驗后由于應激而出現(xiàn)亞健康狀態(tài)，影響實驗結果，使得科研結果的不真實可靠，沒有重復性，嚴重的甚至發(fā)病死亡。,4、污染 某些病毒造成細胞培養(yǎng)物、腫瘤移植物或者以動物組織作為生產(chǎn)基質的生物制品的污染，不僅干擾試驗，還將病毒擴散，造成病原傳播，以至于危害人類。,必須對實驗動物進行微生物和寄生蟲控制,根據(jù)國家標準GB 149

5、22.1-2-2011 對實驗動物進行等級分類控制,第一節(jié) 實驗動物分級第二節(jié) 普通級動物 第三節(jié) 清潔級動物與無特定病原體動物第四節(jié) 悉生動物第五節(jié)無菌動物第六節(jié) 實驗動物的微生物和寄生蟲監(jiān)測,主 要 內(nèi) 容,,第一節(jié) 實驗動物分級,依照對微生物學質量的控制，或根據(jù)微生物凈化程度，對實驗動物進行分級 國際：實驗動物分為三個等級 國內(nèi)：實驗動物分為四個等級,,3級,4級,第二節(jié) 普通動物(Conventiona

6、l animal, CV),一、基本概念 二、普通動物的管理與用途 三、實驗動物常見人獸共患病四、動物間烈性傳染病,,一、基本概念普通級動物又稱一級動物，是微生物分級控制標準中要求最低的動物。要求不攜帶人獸共患病和自身的烈性傳染病的病原及寄生蟲，動物體內(nèi)外所攜帶的微生物和寄生蟲很難控制。飼養(yǎng)條件：普通環(huán)境。,,微生物分級中級別最低 生活的環(huán)境要求低 微生物控制標準低 質量較低 在實驗研究中敏感性低,普通級動物特點（5

7、個低）,,具體表現(xiàn),1、微生物學特點： 要求不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原和動物烈性傳染病的病原。2、飼養(yǎng)管理： 飼養(yǎng)于開放環(huán)境，但仍然對溫度，濕度，飼料，墊料，飲水，衛(wèi)生等有一定控制。3、生理學特點： 外觀健康，飲食排泄正常，無異常分泌物，無臨床癥狀，臟器無眼觀病灶。,,目前還承認的普通級動物,大鼠、小鼠沒有普通級,！,,（一 ）管理具有實驗動物生產(chǎn)許可證的單位去購買動物通風、干燥、清潔清潔飲用水、干凈

8、飼料，符合國家標準物品不要求滅菌，空氣無需凈化對溫度、濕度、光照、噪音、氨濃度有要求防蟲、鼠害、大動物接種必要的疫苗飼養(yǎng)管理中采取一系列相應的措施，如：建立消毒防疫制度、建立并遵守動物室操作規(guī)程等。,,二、普通動物的管理與用途,,實驗動物原則上是不能用疫苗接種和使用藥物等手段來預防和控制傳染病 但是大型實驗動物可選擇使用對實驗干擾不大的疫苗或藥物。（兔出血熱癥、狂犬病）,1、教學示教之用。2、某些科學研究為探索方

9、法而從事的預試 驗之用。3、沒有培養(yǎng)出高級別的動物，不得以用之。,（二）普通級動物的用途,,三、實驗動物常見人獸共患病,俗稱瘋狗病或恐水癥，由狂犬病病毒（Rhabdovirus，RV)感染犬引起的，以極度興奮、狂躁不安、流涎、攻擊人獸為特征的一種高度接觸性，人獸共患病。,1、狂犬病 （Rabies),,（一）流行病學資料： 全球均有發(fā)生，以亞洲和非洲為主。我國是高發(fā)地區(qū)之一。 過去3個月來，病毒性疾病狂犬病已奪走

10、中國西南省份云南省5人的生命，中國已經(jīng)發(fā)起與狂犬病作斗爭的運動，將近五千條狗已被宰殺。,（二）易感動物： 所有的溫血動物都對RV易感。 犬、貓、蝙蝠、狐貍、狼、貓鼬、浣熊、臭鼬等為高危動物。人也易感，我國引發(fā)狂犬病的主要為犬，其次為貓。 （三）傳播途徑： 接觸傳播（唾液）：咬傷、帶毒唾液濺入眼結膜。（四）潛伏期：十幾天至幾年，幾十年。,潛伏期與傷口距神經(jīng)中樞的距離、侵入病毒的毒力和數(shù)量有關。,,,咬傷,帶病毒的唾液

11、濺入眼結膜,臨床癥狀：潛伏期、前驅期、急性神經(jīng)癥狀期和麻 痹期即昏迷死亡期 。診斷：1. 狂犬病特異性抗原。 2. 在腦組織中存在Negri體（狂犬病病毒包 涵體）。 3. 在腦組織或唾液中用細胞培養(yǎng)分離到病毒預防和控制：禁止野犬進入動物房周圍，對實驗犬 和實驗人員接種狂犬病疫苗。,電鏡下的狂犬病病

12、毒,狂犬病病毒的結構模式圖,1.主要存在于中樞神經(jīng)組織、唾液腺和唾液內(nèi)。2.人感染狂犬病病毒，且患狂犬病后的死亡率為100%。 3.主要通過動物咬傷或帶病毒的唾液濺入眼結膜后致病。4.人被動物咬傷后，傷口應立即徹底清洗，不包扎，并立即（24小時內(nèi)）到防疫部門進行預防注射。,動物實驗工作者切記：,！,,主要通過動物咬傷或帶病毒的唾液濺入眼結膜后致病。,人也可感染狂犬病病毒，且患狂犬病后的死亡率為100%,在購入犬做實驗時，從具有生產(chǎn)

13、許可證的標準化犬場購入合格實驗犬* 做犬類實驗前，應給所有犬注射狂犬疫苗,由流行性出血熱病毒（Bunyaviridae, Hantavirus漢坦病毒）引起的烈性傳染病，也是很危險的人獸共患病。病原體：布尼亞病毒科、漢坦病毒（HV）有近30種血清型/基因型，在我國流行的主要是野鼠型和家鼠型。是一種自然疫源性疾病，主要在野鼠中流行，隱性感染為主。人、大鼠、小鼠、豚鼠、兔、豬和猴均易感。 黑線姬鼠、長爪沙鼠對本病特別敏感。,

14、2、流行性出血熱(Epidemic hemorrhagic fever EHF),,,,感染途徑： 呼吸道傳播：污染塵埃，塵埃飛揚形成氣溶膠吸入感染 接觸傳播：病毒污染血、尿—破損皮膚接觸傳播 蟲媒傳播：革螨等昆蟲叮咬完整皮膚。 消化道和垂直傳播主要癥狀：大小鼠無明顯臨床癥狀。人感染后，潛伏期14天，主要表現(xiàn)發(fā)熱、皮膚有出血點、腎功能衰竭和循環(huán)衰竭等癥狀，嚴重時可導致死亡，死亡率較高。,2015年5月全國法定傳染病

15、疫情概況,2015年5月（5月1日零時至5月31日24時），全國（不含港澳臺）共報告法定傳染病727388例，死亡1363人。-國家衛(wèi)計委,實驗動物設施感染案例,劉艷、武桂珍報道（中國CDC，2011）：,防止感染流行性出血熱的最主要措施是 滅野鼠、防止野鼠進入實驗室,實驗人員感染的示意途徑,,,,在中國、日本、韓國、比利時、英國有實驗室感染人,是由LCMV引起的人和多種動物的病毒性疾病，主要侵害中樞神經(jīng)系統(tǒng)，尤其是脈絡叢和腦膜，是一種

16、重要的人獸共患病。野鼠是LCM病毒的天然宿主。動物多呈隱性感染，少數(shù)發(fā)病，出現(xiàn)急性癥狀，死亡率低。,3、淋巴細胞性脈絡叢腦膜炎（ lymphocytic choriomeningitis LCM）,,,,,,皮膚（完、破）,結膜,吸入,經(jīng)口,,唾液鼻分泌物尿液,腫瘤,可帶病毒,,流行病學： 傳染源:野鼠是天然宿主。 傳播途徑：接觸傳播，垂直傳播。 易感動物：所有的嚙齒類動物以及犬、猴、馬、兔、人均易感。臨床癥狀：動物

17、多呈隱性感染。少數(shù)發(fā)病，出現(xiàn)急性癥狀，死亡率甚低。人感染后大多呈流感樣、腦膜炎癥狀，預后良好，僅有極少數(shù)病例死亡。預防控制：嚴格控制和防止野鼠、感染動物或被污染的移植物等引入動物室，是防止發(fā)生本病的關鍵。,又稱B病毒?。˙ virus disease），是由與人的單純性皰疹病毒相近的B病毒引起的猴良性皰疹性口炎，可自愈。但人感染B病毒后則產(chǎn)生致死性腦炎或腦脊髓炎。,4、猴皰疹病毒（Simian herpesvirus）,,病原：Cer

18、copithecine Herpesvirus Type 1流行病學：傳染源:感染B病毒的非人靈長類動物。 傳播途徑：接觸傳播（咬傷、抓傷）。 易感動物：猴、人。臨床癥狀：發(fā)熱、頭痛、器官壞死、出血性休克、 嚴重致死。診斷：血清學檢查。預防和控制：對進入實驗室的猴做徹底的檢疫，避 免接觸野生猴類,B病毒可自然感染獼猴、紅面猴、食蟹猴。猴皰疹或

19、潰瘍滲出物中含有病毒，在猴群內(nèi)通過直接接觸污染物傳播，可能還通過空氣傳播。人感染Ｂ病毒主要是被猴咬傷所致，當人被猴咬傷后應立即用肥皂水清洗傷口， 用碘酊消毒，并隔離3周， 出現(xiàn)癥狀，及時對癥治療。,購入猴做實驗，注意隔離、檢疫和檢測,5、沙門氏菌（salmonella） 沙門氏菌是革蘭氏陰性桿菌，在自然界分布廣泛，是較常見的人畜共患傳染病，主要引起消化系統(tǒng)的疾病。主要是由鼠傷寒沙門氏菌(S.ty

20、phimurium)和腸炎沙門氏菌(S.enterititis)引起（普通級動物排除的）,,易感動物：小鼠和豚鼠最易感，靈長類易感，大鼠較弱，兔具有一定的抗感染能力，對靈長類動物致病性較強。感染途徑：消化道（吃食、飲水、乳汁），蒼蠅、野鼠為傳播媒介，發(fā)病特點：發(fā)病迅速，死亡率高,豚鼠的脾臟病變,急性發(fā)病動物,以急性敗血癥死亡而不表現(xiàn)臨床癥狀,亞急性感染,隨糞便排出病菌，感染同類和人，使其在運輸、寒冷和實驗處置等應激發(fā)病,,引起動

21、物腹瀉、結膜炎,,,隱性感染動物,臨床表現(xiàn),對干燥、腐敗、日光等因素具有一定抵抗力。對化學消毒劑的抵抗力不強。,,預防和控制,（1）從預防作手，堅持日常消毒，一般常用消毒劑和方法均能達到消毒目的。（2）發(fā)現(xiàn)患病動物和可疑動物及時隔離，盡早處理。（3）對動物的食物和飲水進行嚴格消毒，一旦發(fā)現(xiàn)有動物染病，立即撲殺并對環(huán)境徹底消毒。,革蘭氏陰性桿菌，急性、慢性和帶菌三種表現(xiàn)形式靈長類動物帶菌率較高。引起人和靈長類動物細菌性痢疾。急

22、性：高熱、嘔吐、排膿血便、劇烈腹痛、 導致死亡。 慢性：糊狀或水樣大便，間歇發(fā)作，自然緩解， 部分長期隱性帶菌，干擾實驗。,6、志賀菌（Shigella)感染,,7、分枝桿菌(Mycobacterium),結核分枝桿菌主要有三型，即牛型、人型和 禽型。 人和多種動物易感。 實驗動物中，獼猴最敏 感，是影響其健康的 主要疾病之一。,,結核桿菌為嚴格需氧菌，在外界環(huán)境中生存力較

23、強，水中存活5個月，土壤中可存活7個月。潛伏期十幾天至數(shù)年。（因健康、營養(yǎng)、管理、品種、年齡等而異）。,購入猴做實驗，注意隔離、檢疫和檢測,由剛第弓形蟲（Toxoplasma gondii）引起世界范圍分布的人畜共患原蟲病。A.寄生部位：卵囊、假包囊、包囊寄生在人的除紅細胞以外的有核細胞內(nèi)。B.終末宿主：貓和貓科動物。,8、弓形蟲（Toxoplasma gondii）病,我誤食含弓漿蟲成熟卵囊的食物，或含弓漿蟲包囊的肉類和乳類,

24、,C.中間宿主：人、小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠、犬和其他家畜、靈長類等，小鼠是主要的中間宿主。D.感染階段：成熟卵囊，假包囊，包囊 卵囊在潮濕的環(huán)境中可長期存活，并可抵抗酸堿和大多數(shù)消毒藥。,弓形體病多發(fā)于幼犬，臨床上類似犬瘟熱和犬傳染性肝炎的癥狀。主要表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、厭食、精神萎頓，嚴重犬有出血性腹瀉、嘔吐，眼和鼻有分泌物，呼吸困難。成年犬呈隱性感染，懷孕母犬發(fā)生早產(chǎn)或流產(chǎn)。,禁止貓進入動物房周圍，防止實驗動物的飼料、飲水被貓

25、糞便污染，一旦感染撲殺整個感染群。,,四、動物間烈性傳染病,1、鼠痘（mouse pox）2、兔出血癥（rabbit epidermic hemorrhagic fever）,,1、鼠痘（mouse pox） 又稱脫腳病(ectromelia)，是由鼠痘病毒感染引起的小鼠急性烈性傳染病。本病全身感染，傳播快，死亡率高，是危害實驗小鼠最為嚴重的病毒之一。 主要傳染源：病鼠及無癥狀帶毒鼠,易感動物：主要在實驗小鼠中流行，不

26、同品系小鼠對鼠痘的易感性不同，A、DBA、CBA、KM等小鼠易感。傳播途徑：皮膚傷口、呼吸道、消化道、節(jié)肢動物。傳播特點：傳播快、死亡率高。急性病例小鼠可突然發(fā)生死亡。慢性型病例：腳、尾和鼻部出現(xiàn)皮疹和潰瘍，嚴重者可見腳、尾壞死脫落（痘斑、脫腳、斷尾）,隱性感染的實驗小鼠無臨床癥狀，但在許多因素作用時，如運輸、X射線照射、人工感染結核菌、組織移植等，都可激活鼠痘病毒而使鼠痘流行。,實驗處理,,C57BL/6 小鼠對鼠痘病毒抵抗力

27、較強,2、兔出血癥（rabbit epidermic hemorrhagic fever） 又稱兔瘟，是家兔的一種急性烈性傳染病。具有傳播快、病程短，發(fā)病率和死亡率高的特點。分為急性和慢性。 主要感染青壯年兔，且病情嚴重，多呈急性經(jīng)過。三月齡以內(nèi)的幼兔較少患病，發(fā)病多呈慢性經(jīng)過。乳兔不發(fā)病。,接種疫苗,急性發(fā)病開始時多無癥狀，常突然倒地，抽搐，尖叫后死亡。病程稍慢的亞急性型，體溫可升高到41℃以上，食欲減退，精神沉郁

28、，被毛粗亂，結膜潮紅。臨死前呼吸困難，掙扎，角弓反張。慢性發(fā)病時，體溫升高，精神不振，消瘦，最終衰竭死亡。,為了保持普通級動物的健康必須到有具有動物生產(chǎn)許可證的單位去購買動物。在具有動物實驗許可證的環(huán)境下實驗。加強飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生消毒，新引進兔檢疫，定期進行檢測。定期接種疫苗，接種疫苗后，3-4天后即可產(chǎn)生較強的免疫力，免疫效果可持續(xù)6個月以上。,一、基本概念 二、潛在感染的病毒 三、條件致病菌四、對實驗干擾大的寄生蟲,

29、第三節(jié) 清潔級動物與無特定病原體級動物,,（一）、概念（二）、相同點（三）、不同點,一、兩個級別動物的基本概念,,（一）、基本概念 1、 清潔級動物(Clean animals,CL) 除普通級動物應排除的病原體 外，不攜帶對動物危害大和對科學研究干擾大的病原的實驗動物,不帶有人獸共患病、動物烈性傳染病和對科學研究干擾大的病原。,（1）是根據(jù)我國國情而設立的等級動物。（2）除普通動物應該排除的病原外，

30、還不攜帶對科 學研究干擾大的病原。（3）來源于SPF動物或剖腹產(chǎn)動物。（4）飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中。（5）目前我們國家使用量比較大的實驗動物。,清潔級動物：,2、無特定病原體級動物（Specific pathogen free animals,SPF)除清潔級動物應排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病菌和對科學實驗干擾大的病原的實驗動物，簡稱SPF動物。目前國際上公認SPF動物適用于所有科研實驗，是國際標準級別的實驗

31、動物。,,（1）國際通用。 （2）SPF動物來源于無菌動物。（3）飼養(yǎng)在屏障系統(tǒng)中。（4）目前我們國家使用廣泛的實驗動物。,SPF動物：,（二）清潔級動物和SPF動物的共同特點： 生活在屏障環(huán)境 內(nèi)環(huán)境中沒有烈性致病微生物及寄生蟲。 生產(chǎn)、實驗的效果比普通動物好。 一旦遭到污染后，病原體的傳播強烈。,（三）不同點,清潔級動物：（1）是根據(jù)我國國情而設立的等級動物。（2）除普通級動物應該排除的病原外，還不攜帶對科學研究干

32、擾大的病原。（3）來源于SPF動物或剖腹產(chǎn)動物。,SPF級動物：（1）國際通用。 （2）除清潔級動物應排除的病原體外，不攜帶主要潛在感染病原或條件致病病原和對研究實驗干擾大的病原。（3）來源于無菌動物。,！,1．鼠肝炎病毒2．仙臺病毒3．呼腸病毒III型4．嚙齒類動物細小病毒,二、潛在感染的病毒 （動物無癥狀）,,1．鼠肝炎病毒（mouse hepatitis virus MHV）,病毒特性：冠狀病毒科， 56℃加熱能使病

33、毒感染 性喪失，正常情況下為非致病性，呈 隱性感染。呼吸道繁殖和腸道繁殖2種 毒株。傳染源：病鼠和無癥狀帶毒鼠。感染途徑：消化道、呼吸道、垂直傳播。易感動物：只感染小鼠，人不感染。致病性：可引起小鼠致死性肝炎、腦炎和腸 炎，感染的裸小鼠常呈暴發(fā)性發(fā)病， 改變小鼠機體的各種免疫應答參數(shù)。,,嚴重干擾實驗研究,1、在

34、應激條件下，引起小鼠致死性肝炎、腦炎、腸炎。臨床上嗜肝型、嗜神經(jīng)型和嗜腸型，表現(xiàn)抑郁倦怠，營養(yǎng)不良，體重減輕，嗜神經(jīng)型可見驚厥、旋轉和結膜炎。均具有肝壞死、肝出血。2、改變機體各種免疫應答參數(shù)：降低血清免疫球蛋白水平；影響吞噬細胞數(shù)目。3、改變酶系統(tǒng)：增高或降低一些肝臟的酶活性。,,感染鼠肝炎的裸鼠waste syndrome,裸鼠的肝臟病變出血和壞死,鼠肝炎是影響科學研究主要病原之一，也是實驗鼠群中難以清除的病毒之一。裸鼠感染

35、MHV，肝臟均可見大量不規(guī)則的壞死灶，消瘦，作為該病的“哨兵鼠”。血清學陽性鼠，全群淘汰，封閉，消毒，停止生產(chǎn)和實驗活動。珍貴品系動物，剖腹產(chǎn)和胚胎移植生物凈化處理，并嚴格消毒措施。,病毒：副粘病毒科，條件致病、潛在感染。易感動物：感染大小鼠引起呼吸道疾病，多見于斷 乳小鼠，也可感染倉鼠和豚鼠傳播途徑：空氣傳播，隱性感染發(fā)病特點：急性爆發(fā)，造成呼吸道疾病的流行易感小鼠：NIH、129/J、裸鼠、DBA/2

36、較強抵抗力：C57BL/6、AKR/J、BALB/CJ,2．仙臺病毒(Sendai Virus),,仙臺病毒,,對免疫系統(tǒng)的干擾：可嚴重影響動物體液和細胞介導的免疫應答,對致瘤作用研究的干擾： 誤診和不能復制白血病,對小鼠生殖系統(tǒng)的影響：影響胎兒的發(fā)育，乳鼠死亡率增高,,,對麻醉實驗和吸入毒理學研究等產(chǎn)生嚴重干擾,臨床癥狀極輕或不顯癥狀，少數(shù)弓背豎毛，呼吸困難。最難控制的病毒性疾病之一引入基因工程小鼠繁殖，隔離檢疫4-6周，血清學

37、檢測陰性方可進入設施剖腹產(chǎn)和胚胎移植凈化,3、呼腸病毒III型(Reovirus type 3 Reo-3),小鼠感染呼腸病毒III型多為呈隱性感染。乳小鼠可見脂肪性下痢，肝炎、腦炎、胰腺炎等癥狀。,,,4、嚙齒類動物細小病毒,小鼠細小病毒(Minute virus of mice MVM)和大鼠細小病毒(Rat parvovirus)。迄今所知的唯一抗癌譜廣、具有高度抗癌特異性的微生物，對肝癌、胃癌、肉瘤等多種腫瘤均有明顯殺傷

38、作用，故其感染將會給腫瘤的研究造成嚴重的干擾。,,1.支氣管敗血性波氏桿菌（B.brochiseptica）2.巴氏桿菌(Pasteurella)3.綠膿桿菌(P.aeruginosa)4.鼠棒狀桿菌(C.kutscheri)5.泰澤氏菌(Tyzzer’s organism)6.支原體（Mycoplasma）7.金黃色葡萄球菌（ Staphylococcus aureus）,三、條件致病菌,,○ 家兔和豚鼠尤為敏感，侵害部位

39、是呼吸器官（鼻腔炎、支氣管肺炎）○本菌對環(huán)境抵抗力較強，可在異種動物間互相傳染，傳播性強 ○隱性感染，在不良情況下可使動物發(fā)病,,,1.支氣管敗血性波氏桿菌（B.brochiseptica）,,革蘭氏陰性短桿菌，無芽孢。有致病作用的是多殺巴斯德菌和嗜肺巴斯德菌。 △多殺巴斯德菌(P．multocida) 對兔和小鼠有較強的致病作用，主要侵襲部位呼吸系統(tǒng)。 △嗜肺巴斯德菌(P．pneumotropica)在動物的呼吸道、生殖道

40、帶菌率較高，但致病性不強。（清潔級大鼠）,2.巴氏桿菌(Pasteurella),,G-小桿菌，端生單鞭毛，產(chǎn)生綠黃色熒光色素，本菌在 自然界廣泛存在，并可正常寄居在動物皮膚、口腔、鼻 腔及胃腸道。易感動物：小鼠、大鼠、豚、兔。感染方式：隱形感染，誘發(fā)、繼發(fā)或混合感染引起慢性炎癥。實驗刺激：如放射性照射、實驗燒傷、外科處理、使用免疫抑制劑或抗生素時，可誘發(fā)動物致命的綠膿桿菌菌血癥，引起內(nèi)臟器官廣泛的灶性壞死。,3

41、、綠膿桿菌(P.aeruginosa),,北京天壇生物制品股份有限公司的NIH小鼠綠膿桿菌陽性率10/10，處理意見是降級或凈化使用。（實驗動物信息8（89）2008，4,能獨立生活的最小的微生物，無細胞壁。危害實驗動物的支原體，主要有肺支原體(M.pulmonis)、溶神經(jīng)支原體(M.neurolyticum)和關節(jié)炎支原體(M.arthrilidis)。易感動物：大鼠和小鼠。大鼠較小鼠癥狀明顯，可引起鼠呼吸道支原體病和鼠

42、生殖器支原體病，有時并發(fā)中耳炎形成動物“歪頭”病。,4.支原體（Mycoplasma）,,特性：G+桿菌，呈小棒槌狀，無芽孢和莢膜。致病性：只對小鼠和大鼠致病，多為隱性感染。寄居在呼吸道和腸道，誘因作用下引起致死性膿毒血癥。,5.鼠棒狀桿菌（C.Kutscheri）,,特性：G+毛發(fā)狀芽孢桿菌致病性：多種動物致病，沙鼠和地鼠易感。動物多以隱性感染狀態(tài)存在，靶細胞主要是回盲腸及結腸粘膜上皮細胞。出血性腸炎和彌漫性肝灶性壞死。,6

43、.泰澤氏菌（Tyzzer’s organism）,,G+球菌，自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物金葡菌腸毒素引起食物中毒大小鼠易感，感染可引起雄鼠化膿性睪丸炎、雌鼠子宮內(nèi)膜炎，通過胎盤垂直傳遞給子鼠SPF級大小鼠攜帶檢測出,,7.金黃色葡萄球菌（ Staphylococcus aureus）,四、寄生蟲感染對動物和動物實驗的干擾,1、掠奪宿主的營養(yǎng)因種類、數(shù)量、寄生部位不同，對動物影響不同?；紫x寄生小腸，以半消

44、化物質為食，導致動物發(fā) 育緩慢、體重下降營養(yǎng)不良。螨皮下吸血，鉤蟲移位吸血導致動物慢性貧血。2、體表寄生蟲對宿主的干擾 虱、螨吸血的同時分泌有毒素的唾液，刺激宿主神經(jīng)末梢產(chǎn)生騷癢。,,3、對宿主產(chǎn)生機械損傷 蟲體移行可對組織、臟器造成損傷。 蛔蟲幼蟲移行，損傷腸壁、肺毛細血管和肺泡壁。 腸道中，與粘液混合形成栓塞，引起腸梗阻或破裂。4、產(chǎn)生毒性作用 即寄生蟲分泌物、排泄物的毒性。如肝片吸蟲導 致膽管

45、纖維變性，肝臟萎縮硬化。5、對生理、生化、免疫的影響,1、兔球蟲（Coccidiosis） 家兔的球蟲病可分為腸型、肝型和混合型三種?；旌闲驮谂R床最為常見家兔病初食欲減退 ，精神沉郁，伏臥不動，生長發(fā)育停滯，眼、鼻分泌物增多，體溫略高，貧血、下痢，尿頻，腹圍增大有的兔可突然側身倒下，頭向后仰，四肢抽搐甚至死亡,2、短膜殼絳蟲（Hvmenolepis nana） ◇常寄生于大、小鼠、倉鼠和猴的小腸內(nèi) ◇感染

46、人，且致病性較強 ◇短膜殼絳蟲不需要中間宿主,一、概念二、特征三、培育四、飼養(yǎng)和管理五、應用,第四節(jié) 無菌動物（germ free animals ，GF ）,,一、概念無可檢出的一切生命體的實驗動物（現(xiàn)有的檢驗技術），是國際通用動物。飼養(yǎng)條件：無菌隔離器內(nèi)。來源：第一代通過無菌剖腹產(chǎn)術，人工哺乳獲得。 以后通過無菌動物雌雄交配繁殖或無菌剖腹 產(chǎn)術，保姆鼠代奶擴群 （無菌卵的孵化

47、）。定期檢查：無一切微生物 和寄生蟲。,,無菌動物在自然界并不存在，必須人為的建成。無菌動物的理論基礎和實踐依據(jù)在于胎盤屏障和屏障觀念。1895年有了這個設想開始，到1969年，已經(jīng)育成了小鼠、家兔、豚鼠、雞、貓、羊、狗、貓、猴、豬等無菌動物。,二、特征 外觀和普通動物相同，但是其機能、形態(tài)結構與普通動物有很大不同。除查不到微生物以外，還有許多特征區(qū)別于其它動物。,消化系統(tǒng)：腸道肌

48、層薄，盲腸肥大（普通動物5-6倍）。易發(fā)生盲腸扭轉導致腸壁破裂死亡。腸粘膜絨毛增多，肝臟重量相對下降 血液循環(huán)系統(tǒng)：心臟相對縮小，白細胞減少，波動范圍小或值恒定（無病原侵入）,免疫系統(tǒng)：不發(fā)達。胸腺、淋巴結、脾臟小。產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱，血清中IgG、IgM水平低下，血液中無抗體，對微生物感染異常敏感。,生殖：無菌條件對動物生殖影響不大，無菌大小鼠繁殖率高于普通大小鼠；但是兔與豚鼠因為盲腸膨大，影響產(chǎn)仔。切除盲腸可增

49、加繁殖率。,代謝：無菌動物血液中含氮量少，腸管對 水的吸收率低，代謝周期長。 營養(yǎng)：無菌動物體內(nèi)不能合成維生素B 和K， 導致維生素缺乏證 抗輻射能力：強 壽命：長,三、無菌動物的培育,來源：用剖腹取胎法獲得幼子，使其生來無菌培育原理：胎盤屏障作用方法：子宮切開術（大動物）、子宮切除術（小動物）無菌隔離器中人工喂

50、乳或奶媽代養(yǎng)定期檢測,注意,確定預產(chǎn)期無菌剖腹產(chǎn)必須在分娩前數(shù)小時完成手術時間提前過早,早產(chǎn),幼仔太小,先天不足,不易存活。離正常分娩時間太近,容易出現(xiàn)手術感染預產(chǎn)期和臨產(chǎn)期有一定誤差，但可以作為很重要的參考依據(jù)，做好臨產(chǎn)判斷手術技術熟練，時間短，嚴格無菌操作大、小鼠一般不能超過10min，豚鼠應短于5min,四、無菌動物的飼養(yǎng)管理,飼養(yǎng)于隔離環(huán)境無菌飼養(yǎng)定期檢測（糞便）補充維生素,無菌動物在因為有以下特征，所以對微生

51、物感染敏感免疫器官相對小血液中無抗體白細胞數(shù)目相對少，且恒定產(chǎn)生丙種球蛋白的能力很弱無菌動物在消化與代謝方面中有以下特征腸道肌層薄，盲腸肥大體內(nèi)不能合成維生素B和K代謝周期長,對無菌動物的培育的正確描述無菌動物在自然界并不存在，必須用人為的方法培育而成。生活在隔離系統(tǒng)中。所用一切物品經(jīng)過消毒滅菌處理。定期對環(huán)境和動物進行檢測。,五、無菌動物的應用,微生物研究老年病研究心血管疾病研究免疫學研究臨床腫瘤研究

52、藥理與毒理研究,,（1）微生物的研究 無菌動物可用于建立具有人正常菌叢或致病菌叢的動物模型，變成悉生動物，用來研究某些疾病的病原、微生物之間的拮抗、病毒、真菌。,說明大腸桿菌對痢疾桿菌有拮抗作用,（2）、衰老機理研究 無菌動物的壽命比同種普通動物的壽命長（無菌大鼠較普通大鼠壽命長1-2年)，對2—3年齡無菌大鼠的研究證明，其心、腎、肺、腦等部位沒有檢出與年齡相關的病變，而作為對照組的普通大鼠則有這種變化。 提示

53、微生物的存在與機體衰老有關。,（3）、免疫學研究 無菌動物血液中無特異性抗體，很適合做各種免疫現(xiàn)象的研究。免疫抑制劑常以無菌動物作研究。這是因為在普通動物中應用免疫抑制劑可降低其抵抗力,從而引起繼發(fā)感染而死亡。 例如:無菌大鼠足底皮下注射γ球蛋白，12天殺死動物，觀察腸系膜淋巴結等，其重量明顯增加。,（4）、臨床上的研究,人們很早就認為，齲齒的形成與乳酸桿菌有關。但是沒有實驗證實。無菌動物的出現(xiàn)才使人類研究齲齒變成了可能

54、。無菌動物不發(fā)生齲齒。沒有細菌的參與齲齒不可能形成，細菌是此病的元兇。引起齲齒的細菌——鏈球菌。,（5）、在腫瘤研究中的應用 小鼠腫瘤常由病毒引起，有些病毒還可以通過胎盤傳播，用無菌小鼠有研究腫瘤的價值。研究發(fā)現(xiàn)蘇鐵素在普通動物體內(nèi),可被細菌分解產(chǎn)生致癌物質而引發(fā)腫瘤,但在無菌體內(nèi)則不會。無菌動物可在腫瘤發(fā)生與微生物的關系以及致癌物質的致癌作用研究中發(fā)揮重要作用。,（6）、藥理與毒理研究 觀察發(fā)現(xiàn)普通級豚鼠對青霉素的敏感

55、性高于無菌豚鼠,這是因為青霉素過敏與腸道菌群代謝有關。普通級動物進食大豆易于中毒,而無菌動物則不會。提示某些物質的毒理作用常與腸道微生物代謝有關。無菌動物適用于慢性毒性實驗。,第五節(jié) 實驗動物的微生物和寄生蟲監(jiān)測,1、監(jiān)測的意義2、監(jiān)測標準3、目的,保證實驗動物質量及標準化的必要手段,GB 14922.2-2011,微生物檢測目的掌握實驗動物群體中微生物和寄生蟲的感染狀況及時發(fā)現(xiàn)問題并進行有效控制保證實驗動物的的微生物等

56、級質量,4. 檢測頻率 普通動物 清潔動物 SPF動物 無菌動物,,每三個月至少檢測動物一次,每年檢測動物一次，每2-4周檢查一次動物的生活環(huán)境標本和糞便標本,,5.取樣要求 取成年動物,6. 檢測項目分類 必須檢測項目：每次都要必須檢測 必要時檢測項目：是指從國外引進實驗動物時；懷疑有本病流行時；申請實驗許可證時必須檢測。,,表2 豚鼠、地鼠、兔病原菌檢測項目,,表3 犬、猴病原菌項目,表

57、3 犬、猴病原菌項目,表4 小鼠、大鼠病毒檢測項目,,,表5 豚鼠、地鼠、兔病毒檢測項目,表5 豚鼠、地鼠、兔病毒檢測項目,表6 犬、猴病毒檢測項目,表6 犬、猴病毒檢測項目,表7 小鼠和大鼠寄生蟲學檢測指標,,表8 豚鼠、地鼠和兔寄生蟲學檢測指標,,表9 犬和猴寄生蟲學檢測指標,,表3 犬和猴寄生蟲學檢測指標,思考題：1.為什么要對實驗動物進行微生物學質量控制？2.我國對實驗動物是如何進行分級的？不同等級的實驗動物各有哪些