蛙的系列實(shí)驗(yàn)

1、蛙的系列實(shí)驗(yàn),,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1.學(xué)習(xí)坐骨神經(jīng)——腓腸肌標(biāo)本的制備技術(shù)。2.了解蛙微循環(huán)區(qū)各類血管血流特點(diǎn)及某些藥物對血管舒縮活動(dòng)的影響。3.了解脊髓反射和反射弧的組成及反射弧各部位的作用。4.了解迷路在維持動(dòng)物姿勢平衡和正常運(yùn)動(dòng)中的作用。5.初步培養(yǎng)學(xué)生合理利用實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行綜合實(shí)驗(yàn)的能力。,1．蛙類心跳起源的分析。2．蛙類微循環(huán)的觀察。3．脊髓反射和反射弧的分析。4．蛙一側(cè)迷路破壞的效應(yīng)。5．蛙類坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本的制備

2、。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容（供選擇）,材料與用品,（一）材料 活蛙（限1人1只蛙）。（二）用品 顯微鏡、解剖器具、毀髓針、玻璃針、蠟盤、有孔橡皮蛙板、鐵支架、細(xì)鐵絲鉤或蛙嘴夾、電爐、溫度計(jì)、秒表、注射器、小燒杯、大燒杯、滴管、培養(yǎng)皿、大頭針、紗布、棉球、細(xì)線、小濾紙片。0.65%生理鹽水、0.01 %去甲腎上腺素、0.01%組織胺、20%氨基甲酸乙酯、1％可卡因、任氏液、0.5％、1％和2%硫酸溶液、瑞氏染液、蒸餾水、冰水、水。,操作

3、與觀察 （具體實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目及其順序由學(xué)生自行選擇和安排）,1．左手握蛙，背部向上，用食指下壓其頭部前端，使頭前俯，中指抵住其胸部，拇指按其背部，使頭與脊柱相連處凸起。右手持毀髓針自兩眼之間沿中線向后端觸劃，當(dāng)觸到一凹陷處即枕骨后凹。 2．將毀髓針由凹陷處垂直刺入，再將針尖從枕骨大孔向前刺入顱腔，并在顱腔內(nèi)攪動(dòng)，搗毀腦組織。如針確在顱腔內(nèi)，則可感到針觸及顱骨（圖16－1）。 3．將針退回至枕骨大孔，然后針尖轉(zhuǎn)向后方與脊柱平行插入

4、椎管，一邊伸入，一邊旋轉(zhuǎn)毀髓針以毀髓。當(dāng)蛙四肢僵直而后又松軟下垂時(shí)，即表明腦和脊髓完全破壞。如動(dòng)物仍表現(xiàn)四肢肌肉緊張或活動(dòng)自如，則必須重新毀髓。 4．拔出毀髓針，用一小干棉球?qū)⑨樋锥伦?，以止其出血?（一）雙毀髓,（二）心搏起源的分析 1．暴露心臟 (1)將雙毀髓蛙背位置蠟盤中，展開四肢，用大頭針于腕部和蹌部釘人，以將蛙固定在蠟盤中。**為什么用雙毀髓蛙進(jìn)行心搏起源的分析？ (2)左手持鑷提起胸骨后方腹部皮膚，

5、右手持剪剪開一小口，然后將剪刀由切口處伸入皮下，向左右兩側(cè)鎖骨的外側(cè)方向剪開皮膚，并向頭端掀開皮膚。 (3)再用鑷子提起胸骨后方的腹肌，用金冠剪在腹肌上剪一小口后，沿皮膚切口方向剪開胸壁， **剪時(shí)剪刀尖緊貼胸壁，以免損傷內(nèi)臟和血管，剪斷左右烏喙骨和鎖骨，剪去胸壁，使創(chuàng)口成1個(gè)倒三角形，此時(shí)可見到心臟在圍心腔內(nèi)搏動(dòng)。 (4)左手持眼科鑷提起半透明圍心膜，右手用眼科剪剪開圍心膜，暴露心臟。 **以下實(shí)驗(yàn)中應(yīng)不時(shí)用任氏液保持

6、心臟濕潤。為什么？,2．觀察心臟的構(gòu)造（圖16－2） 參見本實(shí)驗(yàn)“蛙的外形及內(nèi)部構(gòu)造”中“心臟及其周圍血管”部分。 3．觀察心搏過程 觀察靜脈竇、心房和心室收縮的順序，并用秒表記錄心搏頻率。注意心室收縮時(shí)容積和顏色的變化。 4．不同溫度刺激蛙心各部位 用盛有約40 。C溫水的小試管底部分別接觸心房、心室和靜脈竇1 min，重復(fù)3次并記錄每次溫度刺激時(shí)心臟各部位的搏動(dòng)頻率。換用盛冰水的小試管，重復(fù)上述試驗(yàn)并

7、記錄。 **小試管底部接觸所刺激部位時(shí)，不能接觸到心臟其他部位，以免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析心臟何部位的搏動(dòng)為心搏的起源。,5．斯氏結(jié)扎 (1)用眼科鑷在左右動(dòng)脈干下穿一線備用，將心尖翻向頭端，暴露心臟背面，然后將放置在動(dòng)脈干下的那條線在竇房溝處作一結(jié)扎（圖16－3），即為斯氏第1結(jié)扎（圖16－2A）：觀察心臟各部分搏動(dòng)節(jié)律的變化，可見心房、心室立即停止搏動(dòng)，而靜脈竇仍繼續(xù)搏動(dòng)，用秒表記錄靜脈竇搏動(dòng)頻率。待心房和心室恢復(fù)

8、搏動(dòng)后，分別記錄它們的搏動(dòng)頻率。 (2)然后在冠狀溝處穿線做第2結(jié)扎，即斯氏第2結(jié)扎（圖16－2B）。這時(shí)心房和靜脈竇仍繼續(xù)搏動(dòng)，心室則停止搏動(dòng)。待心室恢復(fù)搏動(dòng)后，記錄心臟各部位的搏動(dòng)頻率。 **根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，分析蛙心臟不同部位節(jié)律性的高低，正常情況下心臟節(jié)律活動(dòng)的順序。,（三）蛙類徽循環(huán)的觀察 蛙的腸系膜、舌及后肢足蹼等部位的組織較薄，適于用來制備微循環(huán)觀察標(biāo)本。1．蛙腸系膜標(biāo)本的制備 (1)取蛙I只，稱重后

9、于其皮下淋巴竇注人20%氨基甲酸乙酯(2－3 mg /g體重)，約10－15min，動(dòng)物即進(jìn)入麻醉狀態(tài)。 (2)將已麻醉的蛙背位固定于蛙板上，使其身體左側(cè)緊靠蛙板上的小孔。用鑷子輕輕提起左側(cè)腹壁， **不要將內(nèi)臟也夾起。再用剪刀在腹壁上剪一長約1cm的縱向切口。輕輕拉出小腸拌，將腸系膜展開過蛙板上的小孔，并用大頭針固定在蛙板上（圖16－4）。 **小腸拌不能繃得太緊，以免拉破腸系膜或阻斷血流，另需要適量任氏液潤濕腸系膜，以免干燥

10、，影響血液循環(huán)。,2．若用蛙舌或足蹼作觀察標(biāo)本，則用大頭針將麻醉的蛙固定在蛙板上，使其鼻端離板孔0.5 cm，拖出舌頭，拉緊過孔，并用大頭針將舌緣固定在蛙板孔的周緣；或?qū)⑼軆勺阒赫归_，使趾蹼過孔，用大頭針固定。 3．觀察 將標(biāo)本置低倍鏡下觀察?？梢娪性S多縱橫交錯(cuò)粗細(xì)不等的血管。根據(jù)血管的粗細(xì)和分支情況、血流方向和血流特征，可區(qū)別小動(dòng)脈、小靜脈和毛細(xì)血管。 (1)動(dòng)脈血流的觀察 在鏡下移動(dòng)標(biāo)本直到發(fā)現(xiàn)一段

11、較粗血管內(nèi)的血液流向2分支血管，這段血管就是小動(dòng)脈。注意觀察管中血流速度快，不均勻，有搏動(dòng)，有軸流現(xiàn)象（血細(xì)胞在血管中央流動(dòng)）。,(2)靜脈血流的觀察 移動(dòng)標(biāo)本真到發(fā)現(xiàn)血流由2支血管匯人1支血管，這2個(gè)分支血管就是小靜脈，觀察管內(nèi)血流有無搏動(dòng)和軸流現(xiàn)象，比較動(dòng)脈和靜脈內(nèi)血流的速度。 (3)毛細(xì)血管血流的觀察 尋找管徑最小、透明、近乎無色的血管即毛細(xì)血管。在高倍鏡下可見一串串紅細(xì)胞以單個(gè)排列形式在管內(nèi)移動(dòng)，或紅細(xì)胞斷斷續(xù)續(xù)

12、地單個(gè)移動(dòng)。血流速度如何？有無搏動(dòng)？** 3類血管的形態(tài)和血流特點(diǎn)與其生理功能有何聯(lián)系？ 4．血管對藥物的反應(yīng) (1)滴加幾滴0.01%去甲腎上腺素于腸系膜上，持續(xù)觀察各血管管徑及血流的變化。出現(xiàn)變化后立即用任氏液沖洗。 (2)待血流恢復(fù)正常后，再滴加幾滴0.01％組織胺于腸系膜上，觀察血管及血流的變化。若用蛙蹼作為觀察標(biāo)本，則難以觀蔡血管對藥物的反應(yīng)。,（四）蛙類一側(cè)迷路破壞的效應(yīng) 1．將蛙放在桌面上和水盆中，觀察其

13、正常的姿勢和運(yùn)動(dòng)。 2．破壞蛙的一側(cè)迷路并觀察其效應(yīng)。 (1)用紗布包住蛙軀干部，使其腹面向上握于左手中，翻開下頜用左手拇指壓住。右手持手術(shù)刀在顱底口腔粘膜作一橫切口，分開粘膜，即可看到“十”字形的副蝶骨。迷路即位于副蝶骨橫突的左右兩旁（圖16－5）。 (2)用手術(shù)刀削去一側(cè)橫突的骨質(zhì)，可看到粟粒大小的小白點(diǎn)，此處即是內(nèi)耳囊。將毀髓針刺人內(nèi)耳囊2－3mm，勿刺得太深，以免損傷中樞神經(jīng)，轉(zhuǎn)動(dòng)針尖，攪毀其中的迷路。

14、 (3)靜待數(shù)分鐘后，觀察蛙在桌面上的姿勢和運(yùn)動(dòng)；將蛙放在水盆內(nèi)，觀察其游泳動(dòng)作。比較手術(shù)動(dòng)物與正常動(dòng)物的姿勢和運(yùn)動(dòng)。 **內(nèi)耳迷路有何功能？,（五）脊髓反射及反射弧的分析 1．制備脊蛙（無頭蛙） (1)斷頭法:左手持蛙，右手持粗剪刀從蛙右側(cè)口角處插入（如圖中“x”所示）上、下頜之間，沿兩眼后連線剪去頭顱，即成脊蛙。用蘸有0.65％生理鹽水的脫脂棉覆蓋在傷口上，避免傷口干燥，但不要將脫脂棉從傷口塞人，以免造成脊髓的興奮狀

15、態(tài)。 (2)毀蛙腦 :按本實(shí)驗(yàn)“雙毀髓”法操作，但只搗毀腦組織。 **不能損傷脊髓，以免破壞反射中樞。,2．脊蛙處理 用鐵絲鉤穿過脊蛙下頜（或用蛙嘴夾夾住脊蛙下頜），懸掛在支架上，用燒杯內(nèi)清水浸洗蛙體，使皮膚濕潤，防止于燥， **為什么？ 剛施過手術(shù)的脊蛙，立即進(jìn)入無反應(yīng)的休克狀態(tài)，不能馬上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，待蛙體安靜5－10 min后，其脊髓反射逐漸出現(xiàn)。 **如冬季做此實(shí)驗(yàn)，應(yīng)事先將蛙放在30－40。C溫水里浸浴2－3

16、 min，以增強(qiáng)其代謝，保證實(shí)驗(yàn)效果。 3．脊髓反射的觀察 (1)屈反射:將蛙右后肢最長趾浸人培養(yǎng)皿內(nèi)0.5%硫酸溶液中，右后肢收縮。立即用燒杯內(nèi)清水洗凈腳趾上的殘余硫酸，并用紗布輕輕擦干，重復(fù)該試驗(yàn)，用秒表記錄從趾尖浸入起到屈反射出現(xiàn)所需時(shí)間，重復(fù)3次，求其平均值，此值即為反射時(shí)。 **以下每項(xiàng)實(shí)驗(yàn)后均要及時(shí)用清水將蛙體上殘余硫酸洗凈。為什么？用同樣方法刺激蛙左后肢腳趾，也出現(xiàn)屈反射。,(2)搔扒反射:用浸有1％硫酸溶液的濾紙

17、片貼在蛙左側(cè)背部皮膚上，蛙立即用左后肢除去紙片，記錄反射時(shí)。把濾紙片貼在蛙右側(cè)背部，右后肢也同樣除去紙片。 4．反射弧的分析(1)在蛙右后肢踝關(guān)節(jié)上方，用眼科剪將皮膚作一環(huán)形切口，再用鑷子剝?nèi)デ锌谝韵缕つw， **趾尖皮膚應(yīng)除凈。稍停，再用0.5 %硫酸刺激去皮腳趾，觀察右后肢動(dòng)不動(dòng)， **為什么？(2)將浸有2％硫酸溶液的濾紙片貼在該切口以上的皮膚上，觀察右后肢有無反射發(fā)生， **說明什么？(3)取下脊蛙，將它腹位固定在蠟盤上

18、，使其趾端向外側(cè)翻轉(zhuǎn)，足底朝上。沿肢體方向剪開左側(cè)股部皮膚，用玻璃針分離肌肉和結(jié)締組織，在股二頭肌和半膜肌的肌間溝內(nèi)有1條白色較粗的神經(jīng)（圖16－8A），即坐骨神經(jīng)。在坐骨神經(jīng)下穿1條細(xì)線。用線將神經(jīng)提起， **活標(biāo)本的神經(jīng)不能用金屬鑷子夾持。在神經(jīng)下放1團(tuán)浸有1％可卡因（局麻藥）的棉花，記錄時(shí)間。重新將脊蛙掛在支架上,(4)每隔1min將蛙左后肢最長趾浸人0.5%硫酸液中，觀察其有無屈反射，直至屈反射不再出現(xiàn)，并記錄時(shí)間。 **為什么

19、屈反射不再出現(xiàn)？立即將浸有2％硫酸的濾紙片貼在蛙左側(cè)背部皮膚上，觀察左后肢有無搔扒反射。 **若有搔扒反射，說明什么？每隔1min重復(fù)上次該刺激，直到左后肢搔扒反射不再出現(xiàn)，記錄時(shí)間。比較從給藥到屈反射消失和給藥到搔扒反射消失的反射時(shí)， **說明什么？ (5)毀脊髓:用鑷子夾右后肢，當(dāng)確實(shí)看到右后膚屈反射時(shí)， **為何要做此檢測？從支架上取下脊蛙，將毀髓針由原進(jìn)針處插入，然后針頭向后插入椎管，搗毀脊髓（參見本實(shí)驗(yàn)“雙毀髓”法）

20、。垂復(fù)酸刺激，觀察有無反射發(fā)生。 **分析原因。,（六）蛙類坐骨神經(jīng)一腓腸肌標(biāo)本的制備1．剝制后肢標(biāo)本 左手持蛙兩前肢，右手用剪刀在蛙體前部橫向剪開皮膚一周，剝離身體下部及后肢的皮膚。然后左手持蛙兩后肢足部，倒置蛙體；右手持剪剪開腹壁，將內(nèi)臟向頭端剝離，并于泄殖腔處剪去內(nèi)臟， **勿傷及神經(jīng)。暴露脊柱兩旁的坐骨神經(jīng)叢，在該叢的前方剪斷脊柱，將身體前部、內(nèi)臟連同皮膚一并棄去，僅保留一段腰骶部脊柱連同后肢。將標(biāo)本放入盛有任氏液的燒

21、杯中，清洗手及解剖器械上的污物， **為什么要這樣處理？ 2．分離兩后肢 用蘸有任氏液的左手托起標(biāo)本，右手持金冠剪沿脊柱正中線縱向剪開脊柱（尾桿骨留在一側(cè)），并剪開恥骨聯(lián)合，使兩后肢完全分離。將分開的后肢，一只繼續(xù)剝制，另一只置任氏液中備用。,3．分離坐骨神經(jīng) 取一側(cè)后肢標(biāo)本，脊柱端腹面向上，趾端向外側(cè)翻轉(zhuǎn)，足底朝上固定在蠟盤上。 用玻璃針沿坐骨神經(jīng)走向分離神經(jīng)，并用眼科剪剪去小分支。再循股部坐骨神經(jīng)溝（股二頭

22、肌及半膜肌之肌間溝）細(xì)心分離坐骨神經(jīng)至腘（圖16－8A）**不能用金屬器皿觸碰神經(jīng)干。剪去肌肉及大部分脊柱骨，只保留坐骨神經(jīng)發(fā)出部位的一小段脊柱骨。 4．分離股骨頭 左手捏住股骨，沿膝關(guān)節(jié)剪去股骨周圍的肌肉，用金冠剪自膝關(guān)節(jié)向前刮干凈股骨上的肌肉。在股骨近膝關(guān)節(jié)1 cm處剪斷股骨。,5．游離腓腸肌 用手術(shù)鑷在腓腸肌跟腱下穿線，并結(jié)扎。提起結(jié)扎線，剪斷肌腱與腓腸肌的聯(lián)系，游離腓腸肌至膝關(guān)節(jié)處。剪去膝關(guān)節(jié)下部的后肢，保留腓

23、腸肌與股骨的聯(lián)系，即制成完整的坐骨神經(jīng)－腓腸肌標(biāo)本。 標(biāo)本應(yīng)包括坐骨神經(jīng)、腓腸肌、股骨頭和一段脊柱骨4部分（圖16－8B）。 6．檢查標(biāo)本的興奮性左手持鑷輕輕提起標(biāo)本的脊柱骨片，使神經(jīng)離開蠟板，右手用蘸有任氏液的鋅銅弓的兩極接觸標(biāo)本的坐骨神經(jīng)，如腓腸肌立即收縮，則表明標(biāo)本的興奮性良好。然后將標(biāo)本放人任氏液中。 **制備標(biāo)本過程中，要經(jīng)常用任氏液濕潤去皮膚標(biāo)本，為什么？,作業(yè)與思考,1．.根據(jù)蛙類心搏起源分析的實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明兩