小鼠及蛙類實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)

1、小鼠及蛙類基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)Basic Experimental Technique of Mouse and Frog,醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心洪天國(guó)2012年5月,小鼠及蛙類基本實(shí)驗(yàn)技術(shù),一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?學(xué)習(xí)并掌握小鼠捉拿和各種給藥方法 腹腔注射，灌胃給藥Intraperitoneal Injection and Intragastric Administration 學(xué)習(xí)并掌握蛙類捉拿及常用實(shí)驗(yàn)技術(shù) 坐骨神經(jīng)干

2、腓腸肌標(biāo)本制備，坐骨神經(jīng)干分離Making of Ischiatic Nerve -Gastrocnemius Muscle SpecimenFree of Sciatic Nerve熟悉機(jī)能實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物實(shí)驗(yàn)規(guī)章制度 動(dòng)物領(lǐng)取，動(dòng)物處理 Animal Collection and Burial,二、實(shí)驗(yàn)材料與動(dòng)物,試劑 （Agent）0.9%NaCl溶液（生理鹽水），任氏液（Ringer’s）器材 （Equime

3、nt）1ml注射器，小鼠灌胃器，蛙類基本手術(shù)器械（包括粗剪刀、眼科剪、組織鑷、刺蛙針、鋅銅弓、玻璃分針、蛙板等），圖釘，玻璃平皿，手術(shù)線，紗布等。 動(dòng)物 （Animal）小鼠（每組2只），蟾蜍（每組2只）,1.小鼠捉拿 （Mice Seizure）1）雙手捉拿方法,三、實(shí)驗(yàn)方法：小鼠實(shí)驗(yàn)技術(shù),1,2,3,4,右手抓尾后拉，左手拇指和食指抓住小鼠頭頸部皮膚，將其固定于左手大魚(yú)際處；拉直四肢并用左手無(wú)名指、小指壓緊尾和后肢

4、，右手即可作注射或其它實(shí)驗(yàn)操作。,2)單 手 捉 拿 方 法,3,1,2,4,2.小鼠腹腔注射 （Intraperitoneal Injection） 左手固定小鼠，使腹部朝上，右手持注射器，取45°角刺入左側(cè)下腹部向頭端刺入腹腔。進(jìn)針部位不宜太高，刺入不能太深，以免傷及內(nèi)臟，推注前應(yīng)回抽確認(rèn)。 注射量一般為0.1～0.2 ml/10g體重。,,,三、實(shí)驗(yàn)方法：小鼠實(shí)驗(yàn)技術(shù),3.小鼠灌胃（Intra

5、gastric Administration）,1,小白鼠,1,灌胃量一般為 0.1～0.3ml/10g體重。,2,以左手捉持小鼠，使頭部朝上，保持頭頸部平直。右手持裝有灌胃針頭的注射器，自右口角插人口腔，從上腭進(jìn)入食管。如遇阻力，應(yīng)退出后重插，不能強(qiáng)力插，以免穿破食管或誤入氣管。,三、實(shí)驗(yàn)方法：小鼠實(shí)驗(yàn)技術(shù),三、實(shí)驗(yàn)方法：蟾蜍(Toad )的捉拿,用左手將動(dòng)物貼緊在手掌中，并以左手中指、無(wú)名指、小指壓住其左腹側(cè)和后肢，拇指和食指分

6、別壓住背部、頭部和前肢，右手進(jìn)行操作。 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，可用圖釘，采取俯臥位或仰臥位固定在蛙板上。,注意:抓取蟾蜍時(shí)，禁忌擠壓兩側(cè)耳部毒腺，以免毒液射入眼中。,,,枕骨大孔,左手握蟾蜍，食指下壓吻端，拇指按壓背部，其余三指緊貼腹部。找到枕骨大孔刺入1-2mm，分別搗損腦組織和脊髓。 ※腦和脊髓完全破壞的標(biāo)志是：呼吸停止，四肢松軟并處于對(duì)稱位置。,三、實(shí)驗(yàn)方法：蛙類坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備,1.破壞腦脊髓（Dam

7、age of Spinal Cord and Brain）,,三、實(shí)驗(yàn)方法：蛙類坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備,在骶髂關(guān)節(jié)水平上1cm處剪斷脊柱，去除頭、前肢和內(nèi)臟，保留部分脊柱和下肢。用任氏液小心沖洗坐骨神經(jīng)及其周圍組織上的血液。,,2.剪除軀干上部及內(nèi)臟（Prune of Upper Part of Torso and Viscera）,剪去尾骨,剝?nèi)ビ嘞陆M織的皮膚,沿脊柱正中到恥骨聯(lián)合將標(biāo)本剪開(kāi),標(biāo)本放到盛有任氏液的燒杯中。,,,三、實(shí)

8、驗(yàn)方法：蛙類坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備,3.剝皮 （Skinning）,1,2,3,4,4.游離坐骨神經(jīng) （Free of Sciatic Nerve） 腓腸肌向上將標(biāo)本固定于蛙板上，由脊柱仔細(xì)將坐骨神經(jīng)分離至膝關(guān)節(jié)處，并在脊柱旁結(jié)扎。,三、實(shí)驗(yàn)方法：蛙類坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備,,,5.制成坐骨神經(jīng)—腓腸肌標(biāo)本（Making of Ischiatic Nerve -Gastrocnemius Muscle Specimen）

9、腓腸肌向上將標(biāo)本固定于蛙板上，由脊柱仔細(xì)將坐骨神經(jīng)分離至膝關(guān)節(jié)處，并在脊柱旁結(jié)扎。6.標(biāo)本檢驗(yàn) (Specimen Examination)用鋅銅弓（任氏液預(yù)先濕潤(rùn)）輕輕刺激坐骨神經(jīng)，腓腸肌收縮即表示標(biāo)本制備完好。,三、實(shí)驗(yàn)方法：蛙類坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備,視頻：蛙類坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本制備,四、注意事項(xiàng),捉拿小鼠時(shí)應(yīng)規(guī)范操作，避免被咬。腹腔注射時(shí)，針頭刺入部位不宜太接近上腹部或太深，以免刺破內(nèi)臟。針頭與腹腔的角度不宜太小，避

10、免刺入皮下。灌胃時(shí)，針頭沿鼠口角通過(guò)食管進(jìn)入胃內(nèi)。灌時(shí)如很通暢，則表示針頭已進(jìn)入胃內(nèi)；如動(dòng)物有嘔吐或強(qiáng)烈掙扎，必須拔出后按上述方法重新操作。如進(jìn)針不順，決不可硬向里插。,小鼠實(shí)驗(yàn),抓取蟾蜍時(shí)，小心毒液。,四、注意事項(xiàng),蛙類實(shí)驗(yàn),,,抓取蟾蜍時(shí)，小心毒液。分離神經(jīng)時(shí)，應(yīng)用玻璃分針。保持坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本活性（加任氏液、不要用手和器械夾捏）。,四、注意事項(xiàng),蛙類實(shí)驗(yàn),玻璃分針,機(jī)能實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物實(shí)驗(yàn)規(guī)章制度,動(dòng)物領(lǐng)取：實(shí)驗(yàn)開(kāi)始后，按規(guī)定數(shù)