我國工程抗體研發(fā)概況

1、我國工程抗體研發(fā)概況,XXX,YYYYYYYYYYYYYYY,1979 - 1980 國內(nèi)個別單位開始單抗的研制1984年以前 基本是技術(shù)方法的建立和完善1985年以后 單抗為基礎(chǔ)的診斷試劑用于研 究和臨床1987年以后 單抗的體內(nèi)診斷和治療制劑被 列 入863計劃1992年 我

2、國第一個單抗衍生物被SDA 批準(zhǔn)進入臨床,單克隆抗體技術(shù)在我國的發(fā)展,,細(xì)胞表面抗原,血型抗原,組織相容性抗原,,白細(xì)胞分化抗原,,,,CD2CD3CD25CD10CD20CD38CD45CD71CD41CD42CD8,...,腫瘤相關(guān)抗原,胃癌,肺癌,肝癌,鼻咽癌,大腸癌,宮頸癌,乳腺癌,結(jié)腸癌,卵巢癌,,,,,,,,,胰腺癌,喉癌,腦膠質(zhì)瘤,骨肉瘤,,,,,,

3、病毒,HFRSV,新城疫,甲肝,輪狀,登革,乙肝,RSV,乙腦,,,,,,,,,流感,馬雅羅Mayaro,基孔貢亞Chikungunya,Ross River,羅斯河,蓋塔Getah,柯薩奇,狂犬,新培斯Sindbis,,,,,,,,,,,,,,,,,細(xì)菌,大腸桿菌,沙門氏菌,痢疾桿菌,軍團桿菌,結(jié)核桿菌,綠膿桿菌,麻風(fēng)桿菌,霍亂弧菌,,,,,,,,,寄生蟲,血吸蟲,瘧原蟲,弓形蟲,旋毛蟲,絲蟲,毛滴蟲,絳蟲,利什曼原蟲,,,,

4、,,,,,可溶性抗原,酶,血漿蛋白,毒素,細(xì)胞因子,補體,激素,小分子化合物,,,,,,,,單克隆抗體的主要用途,,,,,診斷,基礎(chǔ)研究,監(jiān)測,治療,,,,,單克隆抗體用于基礎(chǔ)研究,細(xì)胞種類及亞型的分析,細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的研究,細(xì)胞膜受體及其功能研究,蛋白質(zhì)分離、純化,基因分離及功能研究,單克隆抗體用于疾病診斷,傳染病診斷,腫瘤診斷,免疫性疾病診斷,內(nèi)分泌疾病診斷,血液病診斷,單克隆抗體用于食品與環(huán)境監(jiān)測,,,,食品,水,土壤,

5、“七五”863,導(dǎo)向藥物的研究,肝癌導(dǎo)向藥物的研究胃癌導(dǎo)向藥物的研究肺癌導(dǎo)向藥物的研究白血病導(dǎo)向藥物的研究人-鼠嵌合抗體的研究人-人單克隆抗體的研究中草藥及其他“彈頭”藥物的研究,“八五”863,基因工程抗體及導(dǎo)向藥物的研究,,肝癌導(dǎo)向藥物的研究胃癌導(dǎo)向藥物的研究肺癌導(dǎo)向藥物的研究白血病導(dǎo)向藥物的研究人-人單克隆抗體的研究高效“彈頭”藥物及新型交聯(lián)方法的研究基因工程抗體的研究全套抗體(repertoire)表達(dá)

6、系統(tǒng)的構(gòu)建,“九五”863,抗體工程,抗體為載體的導(dǎo)向藥物 鼠抗體人源化及人源抗體 特殊功能的抗體及衍生物 基因工程抗體表達(dá)系統(tǒng),,抗體人源化和人源抗體,嵌合抗體,重構(gòu)抗體,鼠抗體表面氨基酸殘基“人源化”,抗原表位定向選擇,噬菌體抗體庫,,,,,,在我國研制成功的人源化和人源抗體,嵌合抗體（抗CEA、VEGF、TNFa、gpIIb/IIIa） 重構(gòu)抗體（抗人CD3） 人源抗體（抗甲肝病毒、抗乙肝病毒

7、、流行性 出血熱、TNF）,抗體親和力改造,鏈替換(Chain Shuffling),計算機輔助設(shè)計下的定點突變,高親和力克隆的選擇,雙特異性抗體,抗人肝癌單抗 /抗人 CD3單抗 抗Her2/neu單抗/抗人CD16單抗 抗人CD20單抗/抗人CD3單抗 抗人卵巢癌單抗/抗人CD3單抗,抗體融合蛋白,抗人Her2/neu單抗-IL-2,CTLA-4-Ig,,抗纖維蛋白-ProU

8、K,抗活化血小板-UK,抗人卵巢癌單抗-IL-2,偶連細(xì)胞毒物質(zhì),連接放射性同位素(131I、99mTc） 連接植物或細(xì)菌毒素（ricin、PE40） 連接細(xì)胞毒性藥物（C1027、柔紅霉素）,SDA批準(zhǔn)進入臨床的體內(nèi)診斷用抗體,131I-抗人肝癌單克隆抗體(HAb18、Hepama-1） 99mTc-抗人小細(xì)胞肺癌單克隆抗體（2F7）,SDA批準(zhǔn)進入臨床的治療用單抗,抗T細(xì)胞和C-ALL免疫毒素抗EGFR的人源化抗

9、體131I-抗肝癌單克隆抗體抗人CD25單克隆抗體抗乙腦單克隆抗體抗流行性出血熱抗體抗131I- CEA人源化抗體抗人CD3單克隆抗體抗人IL-8單克隆抗體,我國體內(nèi)診斷和治療用抗體的研制,我國工程抗體研發(fā)中存在的主要問題,基因工程抗體表達(dá)量低,動物細(xì)胞規(guī)模化培養(yǎng)技術(shù)落后,,新抗體,我國抗體表達(dá)載體的研究,原核表達(dá)系統(tǒng),包涵體方式表達(dá)可溶性表達(dá),真核表達(dá)系統(tǒng),昆蟲細(xì)胞哺乳動物細(xì)胞植物動物,,,,,,,動物細(xì)胞培養(yǎng)

10、,中空纖維系統(tǒng)微囊培養(yǎng)氣升式培養(yǎng)微載體培養(yǎng)懸浮培養(yǎng),今后抗體藥物發(fā)展的方向,尋找新的靶抗原建立高通量抗體制備和篩選技術(shù)基于抗原立體結(jié)構(gòu)設(shè)計和改造抗體基于抗原-抗體相互作用設(shè)計抗體模擬物,新的靶抗原的發(fā)現(xiàn),疾病發(fā)病機理的研究人類基因組研究蛋白質(zhì)組研究,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,HRP-anti-E-Tag,,,scFv-E-Tag,Ag

11、Filter,Master Filter,2xYT-AG,2xYT-AG,2xYT-AI,,,,,Colony-lift assay,DevelopAg-Filter,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,絲狀噬菌體,E.coli,traA,,,A,B,噬菌體展示技術(shù)與細(xì)菌展示技術(shù)結(jié)合的原理圖,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

12、,,,,,,,,,,Antibody,VP16 AD,Antigen,LexA-DBD,Vector 1,Vector 2,Co-transfect yeast cells,LacZ gene activation,His3 gene activation,Lex A-DBS,or,雙雜交系統(tǒng)篩選細(xì)胞內(nèi)功能性抗體,,Library B,DHFR-f2,,,Library A,DHFR-f1,lactamase,,,cotransform

13、,,,,,,,,,,,,,,,,,Sequence DNA,lactamase,Lib A-DHFR-f1,Lib B-DHFR-f2,,,,,,,,,抗原,抗體,DHFR-f1,DHFR-f2,,,,DHFR,Epitope與抗體功能,FRP5 (Anti-ErbB2) +/-,Herceptin (Anti-ErbB2) +/+,VL,VH,CDR,CDR,VH,VL,Western-blot (Z12),1 GST2

14、 GST+hTNF92-1573 GST+hTNF1-914 GST+hTNF,,1 157,,92 157,kD26333643,,,1 91,4 3 2 1 M,4 3 2 1 M,蛋白轉(zhuǎn)膜，麗春紅顯色,免疫印