微囊藻毒素MC-LR純品的制備工藝研究.pdf

1、近幾十年來,藍(lán)藻水華引起的淡水湖泊污染逐漸加劇。最近幾年我國云南滇池、江蘇太湖等地藍(lán)藻水華的爆發(fā)程度逐年加劇,其釋放的主要有害物質(zhì)為微囊藻毒素(microcystins,MCs)。微囊藻毒素-LR作為MCs的主要異構(gòu)體,其標(biāo)樣是飲用水水質(zhì)非常規(guī)指標(biāo)檢測(cè)所需要的主要標(biāo)準(zhǔn)樣品之一。目前,微囊藻毒素異構(gòu)體純品的提取、純化與制備等方面的研究國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道很多,涉及固相萃取、高效液相色譜、薄層層析等。但我國對(duì)于從藍(lán)藻中提取與制備MC-LR的研究尚

2、未形成成熟的方法,所需要的標(biāo)準(zhǔn)品幾乎全部從國外進(jìn)口。
　　 本研究以從云南滇池得到的天然藍(lán)藻為原料,通過對(duì)藍(lán)藻提取藻毒素的提取條件、藻毒素異構(gòu)體混合物分離條件、微囊藻毒素-LR制備條件等三個(gè)方面開展深入研究,得到了能夠滿足水質(zhì)監(jiān)測(cè)要求的MC-LR標(biāo)準(zhǔn)品。并對(duì)得到的樣品通過HPLC-MS進(jìn)行了表征。
　　 對(duì)從天然藍(lán)藻中提取微囊藻毒素異構(gòu)體的條件進(jìn)行了探索與優(yōu)化。研究了不同溶劑體系,提取手段及提取時(shí)間等因素對(duì)藻渣中微囊藻毒

3、素提取效果的影響,得到了微囊藻毒素粗提的最佳條件:以甲醇/水(65％v/v)作為提取溶劑在室溫條件下,磁力攪拌1.5h,超聲20min萃取得到粗提液,然后用0.45μm的微濾膜過濾去除大分子物質(zhì)以及纖維等雜質(zhì),得到MCs的粗品。MCs粗品通過固相萃取手段進(jìn)行前期純化,探索了固相萃取過程中淋洗液與洗脫液的配比對(duì)純化效果的影響,70％洗脫液可以將微囊藻毒素最大限度地從固相萃取柱上洗脫下來。
　　 使用高效液相色譜(HPLC)手段對(duì)所

4、提取的微囊藻毒素的異構(gòu)體粗品進(jìn)行純化分離,考察了不同比例、不同種類的流動(dòng)相等色譜條件對(duì)MCs異構(gòu)體分離效果的影響,得到了微囊藻毒素異構(gòu)體的最佳色譜分離條件:流動(dòng)相:乙腈/水溶液(80％v/v);柱溫:室溫;檢測(cè)波長(zhǎng):238 nm;流速:0.5 mL/min;進(jìn)樣量:2μL。微囊藻毒素的三種主要異構(gòu)體在此條件下可以得到良好的分離。
　　 利用制備型高效液相色譜對(duì)微囊藻毒素主要異構(gòu)體進(jìn)行制備分離,通過探討不同比例的流動(dòng)相及進(jìn)樣量對(duì)制

5、備效果的影響,得到最佳制備色譜條件:流動(dòng)相:乙腈/水溶液(50％v/v);柱溫:室溫;檢測(cè)波長(zhǎng):238 nm;流速:2 mL/min;進(jìn)樣量:100μL。收集10組色譜峰對(duì)應(yīng)的組分,各組分在高效液相色譜上進(jìn)行色譜和光譜分析(DPD),微囊藻毒素的主要三種異構(gòu)體MC-LR、MC-RR以及MC-YR可以基本定性,其中MC-LR的純度超過90％。以HPLC-MS對(duì)制備得到的MC-LR進(jìn)行了表征,分子離子峰和相關(guān)的特征峰與MC-LR相符。