微囊藻毒素-LR對(duì)雄性小鼠肝、腎和睪丸細(xì)胞的毒作用研究.pdf

1、淡水中許多藻類,特別是藍(lán)綠藻能產(chǎn)生對(duì)健康有潛在威脅的毒素,其中分布最廣、危害最大的是微囊藻毒素(Microcystins,MC)。它通常存在于藻類細(xì)胞內(nèi),當(dāng)藻類死亡時(shí),就釋放出來,對(duì)水體造成污染。MC有70多種不同的異構(gòu)體,MC-LR是MC的一系列異構(gòu)體中毒性最大的一種。研究發(fā)現(xiàn),肝臟是MC主要的靶器官,急性中毒主要表現(xiàn)為肝臟腫脹、淤血,肝體比重增加,肝臟細(xì)胞骨架破壞、出血壞死。腎臟是MC的第二大靶器官。MC還有心毒性、神經(jīng)毒性、胃腸毒

2、性。關(guān)于MC遺傳毒性的研究目前仍有爭議。最近有研究發(fā)現(xiàn),MC在無脊椎動(dòng)物性腺中大量累積、性腺是僅次于肝臟(肝胰腺)的第二個(gè)靶器官、且藻毒素可傳遞到后代(卵中有大量存在)等重要現(xiàn)象。還有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明,MC嚴(yán)重影響了小鼠的生殖結(jié)構(gòu)和生殖功能。到目前為止,微囊藻毒素對(duì)哺乳動(dòng)物生殖系統(tǒng)的毒性作用在國內(nèi)外研究的還比較少,且尚未有人做過純MC-LR對(duì)小鼠生殖細(xì)胞的遺傳毒性研究。目前的研究可見,微囊藻毒素的氧化損傷主要體現(xiàn)在對(duì)抗氧化系統(tǒng)的抑制作用,僅

3、用這些指標(biāo)來評(píng)價(jià)機(jī)體的受損程度是不夠全面的,因?yàn)樗麄儧]有反映微囊藻毒素的直接氧化損傷作用,而蛋白質(zhì)在生命活動(dòng)中擔(dān)負(fù)著重要的生理功能。截止目前,尚未見有關(guān)于MC對(duì)蛋白質(zhì)的直接氧化損傷作用的報(bào)道。
　　本課題擬用純MC-LR染毒雄性小鼠,觀察其引起的毒性反應(yīng),探討MC-LR對(duì)雄性小鼠肝、腎、睪丸細(xì)胞可能的遺傳毒性和氧化損傷作用,以進(jìn)一步了解微囊藻毒素的毒作用及其機(jī)制,為微囊藻毒素危害的有效防治提供理論依據(jù)。材料和方法1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及劑量

4、分組:選用6~7周齡雄性昆明小鼠45只,體重30g左右,隨機(jī)分成9組,即對(duì)照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組各兩組,環(huán)磷酰胺組。每組5只動(dòng)物。MC-LR染毒劑量分別為0、3、6、12μg/kg·bw,染毒7天。環(huán)磷酰胺為30mg/kg·bw。2.染毒方法及檢測(cè)指標(biāo):按上述染毒劑量和染毒時(shí)間,各染毒組分別每日腹腔注射MC-LR純毒素,對(duì)照組每日腹腔注射生理鹽水,環(huán)磷酰胺為一次性腹腔注射,制作染毒動(dòng)物模型。染毒結(jié)束后,處死動(dòng)物,解剖取肝、腎

5、、睪丸,稱重并分別計(jì)算臟器系數(shù);采用KCl-SDS沉淀法檢測(cè)小鼠肝、腎、睪丸細(xì)胞中DPC(DNA-Protein crosslinks)的水平;早期精細(xì)胞微核試驗(yàn)檢測(cè)MC-LR對(duì)小鼠睪丸細(xì)胞微核率的影響;用2、4-二硝基苯肼比色法進(jìn)行肝、腎、睪丸蛋白質(zhì)羰基含量的測(cè)定。3.各項(xiàng)指標(biāo)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行資料處理,分別采用單因素方差分析和Dunnett-t檢驗(yàn),α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。結(jié)果1.小鼠體重,肝、腎、睪丸重量

6、及其臟器系數(shù)分析結(jié)果:3μg/kg·bw劑量組,小鼠體重,肝、睪丸重與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),腎重與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);6、12μg/kg·bw劑量組,小鼠體重,肝、腎、睪丸重與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。3μg/kg·bw劑量組,小鼠肝、腎、睪丸臟器系數(shù)與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),6、12μg/kg·bw劑量組,小鼠肝、腎、睪丸臟器系數(shù)與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。2.小鼠肝、腎、睪丸細(xì)胞中DPC水平測(cè)定結(jié)果:3、6、12μg/kg·bw劑量組,小鼠肝細(xì)胞的DPC系數(shù)與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),6μg/kg·bw劑量組,DPC系數(shù)均值最大。3、6μg/kg·bw劑量組,小鼠腎細(xì)胞的DPC系數(shù)與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),12μg/kg·bw劑量組,小鼠腎細(xì)胞的DPC系數(shù)與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。3μg/k

8、g·bw劑量組,小鼠睪丸細(xì)胞的DPC系數(shù)與對(duì)照組相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),6、12μg/kg·bw劑量組,小鼠睪丸細(xì)胞的DPC系數(shù)與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),6μg/kg·bw劑量組,DPC系數(shù)均值最大。3.小鼠早期精細(xì)胞微核率檢測(cè)結(jié)果:MC-LR各劑量組小鼠睪丸早期精細(xì)胞平均微核率均高于陰性對(duì)照組,3μg/kg·bw組早期精細(xì)胞平均微核率與陰性對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);6、12μg/kg

9、·bw組早期精細(xì)胞平均微核率與陰性對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05、P<0.01)。4.小鼠蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)結(jié)果:3、6、12μg/kg·bw劑量組,小鼠肝蛋白質(zhì)羰基含量與對(duì)照組相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。3μg/kg·bw劑量組,小鼠腎蛋白質(zhì)羰基含量與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),6、12μg/kg·bw劑量組,小鼠腎蛋白質(zhì)羰基含量與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。3μg/kg·bw劑量