放流個體遺傳質(zhì)量監(jiān)測與分子判別——以黑棘鯛和紅鰭笛鯛為例.pdf

1、由于捕撈壓力和環(huán)境污染的愈加嚴重，我國漁業(yè)資源普遍衰退。20世紀50年代末，我國開始啟動增殖放流以達到恢復漁業(yè)資源量的目的。多年實踐證明，增殖放流可直接有效地恢復漁業(yè)資源量。但從某種意義上講，我國增殖放流的快速發(fā)展是建立在擴大規(guī)模的粗放式基礎(chǔ)上，很大程度上缺乏科學指導。較為突出的兩個問題是放流苗種遺傳質(zhì)量監(jiān)測方法缺失和放流個體準確識別困難。本研究以南海區(qū)重要的增殖放流品種——黑棘鯛（Acanthopagrus schlegelii）和紅

2、鰭笛鯛（Lutjanus erythopterus）為例，開發(fā)微衛(wèi)星分子標記并精選組成“分子標記組”；從遺傳分歧度、遺傳多樣性水平、近交程度、遺傳信息保持能力四方面對比了放流苗種與自然群體，對苗種的遺傳質(zhì)量進行了分析；使用親緣分析技術(shù)，建立了黑棘鯛放流個體分子判別方法，并在放流實踐中對方法進行了應(yīng)用。
　　本研究分三個部分，一是黑棘鯛和紅鰭笛鯛“分子標記組”的建立；二是黑棘鯛和紅鰭笛鯛放流苗種群體遺傳質(zhì)量監(jiān)測方法的建立；三是黑棘鯛

3、放流個體分子判別方法的建立和應(yīng)用。
　?。ㄒ唬┓肿訕擞浗M的建立
　　使用“高通量測序法”共獲得黑棘鯛微衛(wèi)星序列9125條，設(shè)計 PCR引物180對。使用一個黑棘鯛野生群體（N=48）對引物進行篩選，最終獲黑棘鯛微衛(wèi)星標記46個。根據(jù)遺傳學屬性從上述46個微衛(wèi)星標記中精選出13個標記，組成“分子標記組”。此標記組等位基因數(shù)（A）均值為9.31，表觀雜合度（HO）均值為0.732，期望雜合度（HE）均值為0.747，全部符合“哈

4、迪-溫伯格”平衡預期，各標記間無連鎖不平衡現(xiàn)象。
　　從前期開發(fā)的紅鰭笛鯛微衛(wèi)星標記中精選出11個標記，組成“分子標記組”。此標記組A均值為8，HO均值為0.746，HE均值為0.789，全部符合“哈迪-溫伯格”平衡預期，各位點之間不存在連鎖不平衡現(xiàn)象。
　　上述結(jié)果表明，兩個標記組均表現(xiàn)出高度多態(tài)性，能夠為苗種遺傳質(zhì)量監(jiān)測和放流個體識別提供充足的遺傳統(tǒng)計力。
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　　分別使

5、用黑棘鯛、紅鰭笛鯛“分子標記組”對兩物種的自然群體與苗種群體進行等位基因分型，從遺傳分歧度、遺傳多樣性水平、近交程度、遺傳信息保持能力四方面對比了放流苗種與自然群體，對苗種群體的遺傳質(zhì)量進行了分析。結(jié)果，黑棘鯛和紅鰭笛鯛苗種群體和自然群體間均存在微弱遺傳分歧（黑棘鯛FST=0.0247，紅鰭笛鯛FST=0.0161）；黑棘鯛和紅鰭笛鯛放流苗種群體的遺傳多樣性水平和有效種群大小皆低于自然群體，其近交系數(shù)（F）均值與FIS均大于自然群體。<

6、br>　　綜上，本研究采集的黑棘鯛和紅鰭笛鯛苗種的遺傳素質(zhì)皆低于自然群體，不滿足增殖放流要求。有效種群大小偏差率（黑棘鯛偏差率-77.85％，紅鰭笛鯛偏差率-35.34%）最高，是黑棘鯛和紅鰭笛鯛苗種最突出的遺傳質(zhì)量缺陷。
　?。ㄈ┓帕鱾€體分子判別方法的建立與應(yīng)用
　　使用“分子標記組”對102尾黑棘鯛親本進行等位基因分型，將分型數(shù)據(jù)輸入Cervus軟件進行模擬識別，證明此標記組具有充足的判別能力，確定LOD決斷值為5.4