臨床生化課件-血漿脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)

1、第五章血漿脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn),廣東醫(yī)學(xué)院臨床生物化學(xué)教研室Department of clinical biochemistryOf Guangdong medical college,Major Objectives,了解脂蛋白代謝紊亂和動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系。熟悉脂蛋白的特征、脂代謝有關(guān)酶類的特點(diǎn)和生理功能。掌握血漿脂類組成及脂蛋白的分類、主要載脂蛋白和脂蛋白受體的特征與功能、高脂蛋白血癥分型及其特征,血漿脂蛋白

2、代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)。 重點(diǎn)血漿脂蛋白的分類和特征、高脂蛋白血癥分型及其特征血漿脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn)。 難點(diǎn)血漿載脂蛋白和脂蛋白受體的特征與功能。,Brief Contents,第一節(jié) 血漿脂蛋白及其代謝第二節(jié) 脂蛋白代謝紊亂第三節(jié) 脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn),第一節(jié) 血漿脂蛋白及其代謝,一、血漿脂蛋白的分類 二、血漿脂蛋白的組成和特征 三、載脂蛋白的組成和特征 四、脂蛋白受體和脂蛋白結(jié)合蛋白

3、 五、血漿脂蛋白的代謝,前言,血漿脂質(zhì)總量為4.0g/L～7.0g/L。 ★包括： 1. 膽固醇(total cholesterol，TC) 游離膽固醇 (free cholesterol，F(xiàn)C) 膽固醇酯 (cholesterol ester，CE) 2. 磷脂 (Phospholipid，PL) 3. 甘油三酯 (triacylglycerol/triglyceride，TG)

4、 4. 游離脂肪酸 (free fatty acid，F(xiàn)FA),★脂蛋白(lipoprotein，LP)的概念 血漿中脂質(zhì)和蛋白質(zhì)相結(jié)合形成的一類大分子復(fù)合物，是血漿脂類的主要存在形式與運(yùn)輸形式。?絕大多數(shù)脂蛋白是在肝臟和小腸合成，并主要經(jīng)肝臟進(jìn)行分解代謝。,（一）超速離心法(ultra centrifugation method) 依據(jù)LP在一定密度的介質(zhì)中離心時(shí)，因漂浮速率差異進(jìn)行分離的方法。蛋白質(zhì)含

5、量較高，脂類含量較低者，密度較大。（二）電泳法(electrophoresis method) 電泳技術(shù)是基于脂蛋白分子所帶的電荷和分子量大小不同進(jìn)行分離。,★一、血漿脂蛋白的分類,★超速離心法與電泳法分離血漿脂蛋白的相應(yīng)關(guān)系,,（－）,（＋）,※中間密度脂蛋白(intermediate density lipoprotein, IDL),離心法和電泳法結(jié)合，可將各種脂蛋白分成多種亞組分：,將LDL分為L(zhǎng)DL1~4 ，將HDL分為H

6、DL1~3。LDLA：大而輕，相當(dāng)于LDL1～2；★L(fēng)DLB：小而重，相當(dāng)于LDL3～4；又稱小而密LDL（small dense LDL,SLDL/SD-LDL),二、血漿脂蛋白的組成與特征 1. 化學(xué)組成相同點(diǎn)： 蛋白質(zhì)+脂類(TG、PL、FC、CE)★不同點(diǎn)： (1)蛋白質(zhì)和脂類的含量不同 依蛋白質(zhì)含量：HDL>LDL>VLDL>CM 依脂類含量：CM>VLDL>L

7、DL>HDL (2)蛋白質(zhì)(Apo)的種類不同,2. 結(jié)構(gòu)特征相同點(diǎn)：球形 表層：Apo、PL的極性部分 核心區(qū)：TG、CE和 PL的非極性部分 不同點(diǎn)：Apo在表層的覆蓋程度不同,表5-1血漿脂蛋白的組成和特征,,★富含甘油三酯的脂蛋白：CM、VLDL、CM殘粒和VLDL殘粒（IDL),★富含膽固醇的脂蛋白：LDL，HDL,三、載脂蛋白的組成和特征,★載脂蛋白(apolipoprotein，Apo)定義：脂蛋白中的

8、蛋白部分。生理功能： （1）結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)脂質(zhì)、穩(wěn)定脂蛋白的結(jié)構(gòu)。 （2）修飾脂蛋白代謝有關(guān)的酶并影響其活性。 （3）作為脂蛋白受體的配體，參與脂蛋白與 受體的結(jié)合及代謝過(guò)程。,各種載脂蛋白的特征、分布及生理功能,載脂蛋白 脂蛋白中分布 生 理 功 能 AI HDL、CM LCAT輔因子，

9、 識(shí)別HDL受體 B100 VLDL、IDL、LDL 參與VLDL合成與分解； 識(shí)別LDL受體 B48 CM 參與CM合成與分解；

10、 運(yùn)輸外源性TG CI CM、VLDL、HDL 激活LCAT及LPL CII CM、VLDL、HDL LPL輔因子 E CM、 VLDL、IDL 、HDL 識(shí)別LDL受體

11、 及肝ApoE受體 (a) LDL、HDL 抑制纖溶酶原活性,,,,脂蛋白受體（Lipoprotein Receptor）★定義：一類位于細(xì)胞膜的糖蛋白，特異性結(jié)合脂蛋白并介導(dǎo)其進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)代謝。 作用：參與脂類代謝,調(diào)節(jié)血脂和脂蛋白水平。主要有LDL受體、清道夫受體、VLDL受

12、體。,四、脂蛋白受體和脂蛋白結(jié)合蛋白,（1）LDLR結(jié)構(gòu),單鏈，由836個(gè)氨基酸殘基組成36面體結(jié)構(gòu)蛋白，分子量約115kD，由五種不同的區(qū)域構(gòu)成。,識(shí)別并結(jié)合ApoB100和/或ApoE,,（一） LDL受體(LDLR) 又稱ApoB-E受體,Goldstein和Brown于1973年發(fā)現(xiàn)，獲1985年諾貝爾生理醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。,（3）LDLR受體的分布與性質(zhì)1.分布：廣泛分布于肝、動(dòng)脈壁平滑肌細(xì)胞、 血管內(nèi)皮細(xì)胞、 單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。

13、★2．性質(zhì)(1) 配體為ApoB100和ApoE。 (2) LDLR與LDL親和力最高，也可結(jié)合VLDL，IDL，CM殘粒。,LDL受體途徑（LDL receptor pathway）,★ 1．定義：由LDLR介導(dǎo)的、通過(guò)細(xì)胞膜吞飲作用而攝入LDL等含ApoB100、ApoE的脂蛋白的過(guò)程。,LDLR胞吞作用示意圖,2.基本步驟（以攝入LDL為例）： 血漿LDL+細(xì)胞膜上LDLR LDL-LDL受體復(fù)合物，并相繼形成“被膜

14、小窩”、被膜小泡 LDLR與LDL解離，參加下一次循環(huán)；而被膜小泡與溶酶體融合后，LDL被降解:,,,LDL入細(xì)胞被降解： Apo 氨基酸 CE FFA+FC（代謝、利用） TG 甘油一酯+FFA,蛋白酶酸性酯酶 LPL,,,,,3．LDLR途徑的調(diào)節(jié),主要受細(xì)胞內(nèi)FC濃度負(fù)反饋調(diào)

15、節(jié)。若胞內(nèi)FC濃度升高 ，則 ：（1）減少細(xì)胞自身的膽固醇合成。（2）促進(jìn)FC變成CE儲(chǔ)存。（3）下調(diào)LDLR基因的表達(dá)，減少LDL 的攝取。,4.LDLR途徑的生理意義：,①反饋抑制內(nèi)源性膽固醇和LDLR合成，避 免細(xì)胞CE過(guò)量堆積。,②受體對(duì)LDL具有高度親和力，使細(xì)胞 在血漿膽固醇濃度極低條件下也能得到 所需的膽固醇。③是肝清除VLDL殘粒和CM殘粒的途徑 之

16、一。,（二）VLDL受體（1）結(jié)構(gòu)與LDLR相似， 含5個(gè)結(jié)構(gòu)域；（2）分布于肝外組織（如心肌、骨骼肌）； （3）配體為ApoE；結(jié)合含ApoE的脂蛋白， 如CM殘粒、VLDL，IDL。 （4）不受細(xì)胞內(nèi)FC濃度負(fù)反饋調(diào)節(jié)，脂蛋白的 攝取不受限制，利于巨噬細(xì)胞泡沫化，可 能促進(jìn)早期As斑塊的形成?？赡芘c肥胖形 成有關(guān)。,1.結(jié)構(gòu) （1）糖蛋白，

17、220KD， 三聚體。 （2）與LDLR相反，其N-末端在膜內(nèi)側(cè)，而C-末端在膜外側(cè)。已知的Ⅰ、Ⅱ型均含6個(gè)結(jié)構(gòu)域。,（三）清道夫受體(scavenger receptor, SR ),2.清道夫受體的配體 （1） 主要配體：修飾的LDL，如乙酰化LDL、氧化LDL（ox-LDL）; VLDL, LDL , HDL等。 （2）其它配體 多聚鳥苷酸、多糖、 某些磷脂、細(xì)菌脂多糖（內(nèi)毒素）3.清道

18、夫受體的功能 1. 清除細(xì)胞外液中的修飾LDL，尤其是ox-LDL，清除血管過(guò)多脂質(zhì)和病菌毒素等。,（四）LDL受體相關(guān)蛋白（LRP）,分布廣泛，如肝細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞。功能： 特異性結(jié)合CM殘粒、VLDL殘粒。能識(shí)別多種配體（蛋白酶一蛋白酶抑制劑、毒素的受體、某些病毒、乳鐵蛋白、ApoE等）。LRP與AS的形成有密切關(guān)系： ①LRP參與 LDL的氧化過(guò)程，與血管損傷有關(guān)。 ②LRP與泡沫細(xì)胞的生成

19、有關(guān)。,（五）HDL受體和HDL結(jié)合蛋白,HDL受體（HDLR）：可特異性識(shí)別并以高親和力與HDL結(jié)合，引發(fā)下游的生物學(xué)效應(yīng)。HDL結(jié)合蛋白（HBP）：可與HDL結(jié)合，但不產(chǎn)生或只產(chǎn)生較弱的效應(yīng)。,★功 能：1. 參與HDL中的CE和VLDL、CM及殘粒中TG、PL的轉(zhuǎn)移。 2. 參與HDL的形成。,脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（lipid transfer protein，LTP）,（六）膽固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（CETP）(Chol

20、esteryl Ester Transferase Protein),CETP對(duì)膽固醇的逆轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程,,五、血漿脂蛋白的代謝,（一）脂蛋白代謝相關(guān)酶,脂蛋白脂肪酶 (lipoprotein lipase, LPL)肝脂酶（hepatic lipase, HL） 或肝甘油三酯脂肪酶（HTGL）卵磷脂膽固醇脂酰轉(zhuǎn)移酶： (lecithin-Cholesterol acyl transferase, LCAT),來(lái)源：由脂肪細(xì)胞

21、、心肌、骨骼肌和乳腺細(xì)胞以及巨噬細(xì)胞等合成和分泌的一種糖蛋白?！锷砉δ埽?(1) 催化TG分解為FFA和甘油一酯，供組織氧 化供能和儲(chǔ)存（主）。 (2) 分解PL，如卵磷脂、磷脂酰乙醇胺。 (3) 促進(jìn)脂蛋白之間PL、Apo和Ch的轉(zhuǎn)換。 (4) 促進(jìn)CM殘粒的攝取?！镙o助因子：ApoCⅡ,1.脂蛋白脂肪酶 (lipoprotein lipase，LPL),2.肝脂酶（HL / HTGL）

22、來(lái)源：肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，糖蛋白，53kD★ ApoAⅡ?yàn)镠L的激活劑；被雄性激素 (+)和雌性激素、腎上腺素等 (–)★HL的生理功能 (1) 水解VLDL及其殘粒、CM殘粒中的TG（主） (2) 調(diào)節(jié)Ch逆轉(zhuǎn)運(yùn)； (3) 使肝內(nèi)VLDL→ LDL。,3.卵磷脂-膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(LCAT) (1) 肝合成，糖蛋白，含416個(gè)aa殘基，6.3kD?！?(2) 功能：催化HDL中的FC→CE，CE進(jìn)入

23、 HDL核心儲(chǔ)存(主要) ，參與Ch逆向轉(zhuǎn)運(yùn)。 ★(3) 輔助因子：ApoAⅠ；,（二） 血漿脂蛋白代謝,1.外源性代謝途徑：指食物中攝入的膽固醇和甘油三酯在小腸中合成CM及CM代謝的過(guò)程 。,2.內(nèi)源性代謝途徑：指肝臟合成VLDL，然后轉(zhuǎn)變?yōu)镮DL和LDL，并被肝臟或其它器官代謝的過(guò)程,3.HDL的代謝 ：膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn),HDL參與將膽固醇從外周組織運(yùn)輸?shù)礁闻K的過(guò)程。,CM代謝,,VLDL、I

24、DL、LDL代謝,,,,HL,3．HDL代謝,肝和小腸合成未成形HDL, 繼而獲取CM、VLDL表層的PL和ApoAⅠ而變成圓盤狀的新生HDL(nascent HDL, HDLn)HDLn從末梢組織細(xì)胞膜獲得FC，經(jīng)LCAT作用生成CE進(jìn)入HDL內(nèi)部，形成成熟型HDL3。HDL3在CETP介導(dǎo)下，與VLDL、LDL交換CE/TG形成球型HDL2。HDL2中的TG經(jīng)肝臟的HL水解作用后， HDL2再變成HDL3。,,★參與脂蛋白代謝

25、的主要生化因素,1.脂蛋白受體等： HDLR、VLDLR、 LDLR、SR、LRP,2. 酶：LPL、HL、LCAT,3.脂質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白：CETP,脂蛋白代謝紊亂：高脂血癥低脂血癥低HDL血癥高HDL血癥,第二節(jié) 脂蛋白代謝紊亂,一、高脂血癥,★高脂血癥（hyperlipidemia)： 指血漿中Ch和（或）TG水平升高，是血漿中某一類或某幾類脂蛋白水平

26、升高的表現(xiàn)。 ★高脂蛋白血癥(hyperlipoproteinemia)： 指血漿中CM、VLDL、LDL、HDL等脂蛋白有一種或幾種濃度過(guò)高的現(xiàn)象。,黃色瘤:含有脂類的細(xì)胞在真皮或皮下組織內(nèi)聚集，常在皮膚表面形成黃色的瘤狀損害，因其顏色多為黃色、桔黃或棕紅色而得名。,高脂血癥的主要臨床表現(xiàn)：　1.黃色瘤（脂質(zhì)在真皮內(nèi)沉積）。　2.動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis,AS),原發(fā)性高脂血癥 指原因不

27、明的高脂血癥?！±^發(fā)性高脂血癥 繼發(fā)于全身系統(tǒng)性疾病，高糖或高脂、嗜酒、服用某種藥物等也可誘發(fā)高脂血癥。,1.基于是否繼發(fā)于全身系統(tǒng)性疾病,（一）高脂血癥的分型,遺傳缺陷分類：,1. 脂蛋白合成，組成或分泌缺陷  2. 載脂蛋白結(jié)構(gòu)缺陷  3. 酶類缺陷： 如LPL和LCAT缺陷    4. 細(xì)胞識(shí)別、內(nèi)吞和降解脂蛋白缺陷。,★2. WH

28、O分型，1970,類型 脂 蛋 白 變 化 血脂變化 I CM增加 TG??? TC正?；?? IIa LDL增加 TG正常 TC?? IIb LDL及VLDL增加 TG?? TC?? III IDL增加（ 寬?帶 ） TG?? T

29、C?? IV VLDL增加 TG?? TC 正?；?? V VLDL及CM增加 TG?? TC?,,,,低高密度脂蛋白血癥：血清HDL-C水平減低,3.簡(jiǎn)易分型,高膽固醇血癥：血清TC水平增高。,混合型高脂血癥：血清TC與TG水平均增高。,高甘油三酯血癥：血清TG水平增高。,★高脂血癥分型的生化檢驗(yàn)依據(jù)為： (1) 血清(血漿)外觀：在4℃冰箱

30、放置16hr 后的血清外觀。 (2) 血脂濃度：血清TG、TC含量 (3) 血清LP電泳圖譜：某種(些)LP含量(%) 是否升高(相應(yīng)區(qū)帶是否深染、加寬?),★血清（漿）靜置試驗(yàn),將患者空腹12h后采集靜脈血分離出血清置4℃冰箱中過(guò)夜(16-24h)，然后觀察其分層現(xiàn)象及混濁程度。,正常空腹血清應(yīng)清澈透明。,,,高HDL血癥,定義：血漿HDL-膽固醇（HDL-C）含量超過(guò)2.6mmo

31、l/L。主要病因：CETP及HL活性降低。CETP缺陷，HDL的CE蓄積，HDL增多；HTGL活性降低，HDL2→HDL3轉(zhuǎn)換過(guò)程減慢，HDL被肝細(xì)胞攝取減少，濃度增加。分兩類：原發(fā)性、繼發(fā)性,二、低脂蛋白血癥(自學(xué)）,診斷（滿足下面三項(xiàng)之一） 血清TC<3.3mmol/L TG<0.45mmol/L LDL-C<2.1mmol/L病因原發(fā)性：ApoAⅠ缺乏

32、或變異、LCAT缺乏 癥、無(wú)α-脂蛋白血癥（Tangier?。?、無(wú)β-脂蛋白血癥、低β-脂蛋白血癥等。 繼發(fā)性：內(nèi)分泌疾病,三、脂代謝紊亂與動(dòng)脈粥樣硬化,動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）： 指動(dòng)脈內(nèi)膜的脂質(zhì)、血液成分的沉積，平滑肌細(xì)胞及膠原纖維增生，伴有壞死及鈣化等不同程度病變的一類慢性進(jìn)行性病理過(guò)程。AS主要損傷動(dòng)脈壁的內(nèi)膜，嚴(yán)重時(shí)累及中膜。引發(fā)冠心病、缺血性腦卒中.,冠心病的主要危險(xiǎn)因素,高血壓,

33、年齡,冠心病家族史,血脂紊亂,吸煙,糖尿病,不可改變的,可改變的,NCEP. Circulation 1994;89:1329–1445. Eur Heart J 1994;15:1300–1331.Wood D et al. Eur Heart J 1998;19:1434–1503.,冠心病,,,(一) 脂蛋白殘粒,CM殘粒與VLDL殘粒（IDL）,凡能增加動(dòng)脈壁Ch內(nèi)流和沉積的脂蛋白如LDL、β-VLDL、ox-LDL等，都是導(dǎo)

34、致AS的因素。,一、致動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白,(二) 變性的LDL,定義：LDL的蛋白組分經(jīng)化學(xué)修飾，其正常的立體構(gòu)像發(fā)生改變，生物學(xué)活性也有相應(yīng)的變化，這種經(jīng)化學(xué)修飾的LDL稱為變性LDL或修飾LDL .主要包括乙酰LDL、氧化LDL（ox-LDL）和糖化LDL。通過(guò)SR途徑清除，使巨噬細(xì)胞內(nèi)Ch大量堆積形成泡沫細(xì)胞。ox-LDL對(duì)單核細(xì)胞有趨化作用；促使凝血酶形成，引起血小板聚集，血栓形成。,(三) B型LDL（小而密LDL ，s

35、LDL ）,LDL中TG被水解，LDL便轉(zhuǎn)化為sLDL。富含TG的sLDL顆粒較小，與LDLR親和力較低，在血漿中停留時(shí)間較長(zhǎng)，有更多機(jī)會(huì)進(jìn)入動(dòng)脈內(nèi)膜下。內(nèi)膜下的sLDL比大而輕的LDL更易被氧化而促進(jìn)泡沫細(xì)胞形成。,(四) Lp(a)與AS,Lp(a)是AS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。apo(a)與纖溶酶原競(jìng)爭(zhēng)性抑制與內(nèi)皮細(xì)胞表面結(jié)合，有助于血栓形成。早期病損中，與纖溶酶原競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合纖維蛋白并聚集陷入病損區(qū)栓子中；絕大部分與病損部位緊

36、密結(jié)合，增加局部膽固醇的沉積；與動(dòng)脈壁平滑肌細(xì)胞糖胺聚糖結(jié)合，促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬膽固醇。,二、抗動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白,血漿HDL水平與AS性心腦血管疾病的發(fā)病率呈明顯負(fù)相關(guān)：血漿HDL-C每下降0.03mmol/L，冠心病事件的相對(duì)危險(xiǎn)性增加2%~3%。抗氧化，抑制內(nèi)膜下ox-LDL生成；抑制單核細(xì)胞粘附；誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞NO的合成，減輕AS早期不正常的血管收縮；,第三節(jié) 脂蛋白代謝紊亂的生物化學(xué)檢驗(yàn),一、血漿脂質(zhì)測(cè)定二、血漿脂

37、蛋白測(cè)定三、血漿載脂蛋白測(cè)定四、血漿脂代謝相關(guān)酶的測(cè)定五、脂質(zhì)相關(guān)蛋白基因突變分析六、血脂和脂蛋白檢測(cè)的臨床應(yīng)用,一、血漿脂質(zhì)測(cè)定,（一）TG測(cè)定 1．化學(xué)法 2．酶法測(cè)定 （二）TC測(cè)定 1．化學(xué)法 2．酶法測(cè)定 （三）FFA測(cè)定（四）磷脂測(cè)定,標(biāo)本采集,空腹12hr后采血，72hr不飲酒，否則檢測(cè)結(jié)果升高；及時(shí)分離出血漿（清）標(biāo)本，以免紅細(xì)

38、胞膜PL分解產(chǎn)生FG，或者抗凝劑存在導(dǎo)致血漿稀釋而影響檢測(cè)結(jié)果；,（一） 血清（漿）甘油三酯測(cè)定,基本操作：,1.化學(xué)測(cè)定法,①TG的抽提分離（有機(jī)溶劑）：提取和純化TG；②皂化：TG水解生成甘油；多采用KOH作皂化劑。?氧化：過(guò)碘酸在酸性溶液中將甘油氧化成甲醛和甲酸。④顯色定量甲醛。,4、顯色：甲醛的定量主要有兩種方法：,①甲醛與變色酸在硫酸溶液中加熱生成紫色化合物，570nm測(cè)定吸光度。靈敏度高，顏色穩(wěn)定。,②甲醛與乙酰丙酮反

39、應(yīng)生成黃色的二乙酰二氫二甲基吡啶，412nm測(cè)定吸光度。,2．酶 法 測(cè) 定 （1）磷酸甘油氧化酶法（GPO-PAP法）,評(píng)價(jià)：操作簡(jiǎn)便，快速準(zhǔn)確，適合自動(dòng)化分析，線性范圍較寬。 所測(cè)結(jié)果包括了血清中FG，如何解決？,去除FG干擾可用下列方法：1.外空白法：同時(shí)用不含LPL的酶試劑測(cè)定FG作空白。需做雙份檢測(cè)，成本加倍。2.內(nèi)空白法：又稱兩步法或雙試劑法 將LPL和4-AAP組成試劑2，其余部分為試劑1，為中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分

40、會(huì)推薦方法。,血清TG一般隨年齡增加而升高，體重超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)者往往偏高。 血清TG參考范圍： 成人0.45mmol/L ~1.69mmol/L 合適范圍：≤1.69mmol/L； 升高：＞1.69mmol/L。,【參考值】,【臨床意義】,原發(fā)性高TG血癥:多有遺傳因素,如家族性高TG血癥； 繼發(fā)性

41、高TG血癥:DM、糖原累積病、甲減、腎綜、妊娠、口服避孕藥、酗酒等。富含TG脂蛋白是CHD的獨(dú)立的危險(xiǎn)因子。TG增加表明患者存在MS，需治療。TG降低較少見，見于甲亢、腎上腺皮質(zhì)功能減退和肝功能嚴(yán)重?fù)p傷。,（二）血清（漿）總膽固醇測(cè)定,化學(xué)法,酶法,血清中膽固醇：CE占70％；FC占30％,1．化學(xué)比色法,四個(gè)階段：①抽提；②皂化；②毛地黃皂苷沉淀純化；④顯色比色。,代表性的方法： （1）硫磷鐵法（Bowman法）：用無(wú)水

42、乙醇沉淀蛋白質(zhì)，提取Ch，提取液中加硫磷鐵試劑顯色。 （2）Abell法：血清中加入氫氧化鈉乙醇溶液，使CE皂化為FC；加入正己烷-水提取后，F(xiàn)C進(jìn)入正己烷相，以醋酐-硫酸試劑顯色定量。國(guó)際公認(rèn)的參考方法。,2.酶法測(cè)定,特點(diǎn)：,常規(guī)方法；特異性好，精密度和靈敏度達(dá)臨床實(shí)驗(yàn)室的要求；適合手工操作和自動(dòng)分析；出現(xiàn)了不同程度的基質(zhì)效應(yīng)。,測(cè)定血清TC的常規(guī)方法：膽固醇氧化酶－過(guò)氧化物酶－4－氨基安替比林－酚法（COD-PAP法

43、）,CHER：膽固醇酯酶，COD: 膽固醇氧化酶原理： CE＋H2O FC＋FFA FC＋O2 △4-膽甾烯酮＋H2O2 H2O2＋4-AAP＋酚 醌亞胺＋H2O,方法學(xué)評(píng)價(jià)：,主要缺點(diǎn)是：,優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高、準(zhǔn)確度高、精密度好，線性范圍寬。,①某些CHER對(duì)CE的水解不完全，不能用純膽固醇結(jié)晶配制的溶液作為TC分析的校準(zhǔn)液，而應(yīng)以準(zhǔn)確定值的血清作為標(biāo)準(zhǔn)。,②表面活性

44、劑，吐溫-40可以干擾CHER的作用，而聚乙烯醇6000可使結(jié)果提高1％～2％。表面活性劑的作用：促進(jìn)Ch從脂蛋白中釋放出來(lái)。,③本法具有氧化酶反應(yīng)途徑的共同缺陷，易受到一些還原性物質(zhì)如尿酸、膽紅素、維生素C和谷胱甘肽等的干擾。,【參考值】,血清TC參考范圍： 成人2.85mmol/L~5.69mmol/L （110mg/dl~220mg/d

45、l）合適范圍：≤5.17mmol/L邊緣升高：5.20mmol/L～5.66mmol/L升高：≥5.69mmol/L,影響TC水平的因素,①年齡與性別；②長(zhǎng)期的高膽固醇、高飽和脂肪酸和高熱量飲食可使TC增高；③遺傳因素； ④其它：缺少運(yùn)動(dòng)、腦力勞動(dòng)、精神緊張等可能使TC升高。,TC除了作為高膽固醇血癥的診斷指標(biāo)之外，不能作為其它任何疾病的診斷指標(biāo)。 TC與冠心病的發(fā)病率呈正相關(guān). TC升高：各種高脂蛋白血癥、梗阻性黃

46、疸、腎病綜合征、甲低、慢性腎衰、糖尿病等。此外，吸煙、飲酒、緊張、血液濃縮等也可使TC升高。 TC降低：各種脂蛋白缺陷狀態(tài)、肝硬化、惡性腫瘤、營(yíng)養(yǎng)不良、巨細(xì)胞性貧血等。,【臨床意義】,（三）FFA測(cè)定 (自學(xué)),血濃度很低，成人0.4mmol/L～0.9mmol/L；兒童和肥胖成人稍高。受脂代謝、糖代謝和內(nèi)分泌功能等因素影響。半壽期為1min～2min。血清中的FFA是與清蛋白結(jié)合進(jìn)行運(yùn)輸。 FFA測(cè)定標(biāo)本：4℃分離和測(cè)定血

47、清。貯存的標(biāo)本僅限于24hr內(nèi)。因血中各種脂肪酶易使血中TG和PL分解成FFA，使血中FFA上升。,血清FFA測(cè)定方法： 1．非酶法測(cè)定 包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高效液相層析法。前三種方法準(zhǔn)確性差，高效液相層析法儀器太昂貴，不便于批量操作。 2．酶測(cè)定法 主要用脂肪酶測(cè)定?？煞謩e定量測(cè)定產(chǎn)物乙酰CoA、AMP或輔酶A。結(jié)果準(zhǔn)確可靠快速，易于批量檢測(cè)。,（四）磷脂測(cè)定(自學(xué)),血清中PL包括： ①卵磷脂(60

48、％)和溶血卵磷脂(2％～10％)； ②磷脂酰乙醇胺 (2％)； ?鞘磷脂(20％)。,血清PL定量方法: 1．化學(xué)測(cè)定法 ①抽提分離；②灰化； ?顯色定量。 2．酶測(cè)定法 利用磷脂酶分解測(cè)定其產(chǎn)物進(jìn)行定量，多采用磷脂酶D(PL-D)。該法快速準(zhǔn)確，便于自動(dòng)化批量檢測(cè)。,二、血漿脂蛋白測(cè)定,（一）電泳法（二）超速離心法（三）脂蛋白膽固醇測(cè)定 1．沉淀分離法

49、2．均相測(cè)定法 3．間接法 （四）Lp(a)測(cè)定,（一）電泳法,原理：不同脂蛋白因蛋白質(zhì)含量不同、其電荷量不同，故可用電泳方法進(jìn)行分離，并根據(jù)血漿脂蛋白電泳遷移率不同予以判斷確認(rèn)。方法：分為預(yù)染法和電泳后染色法兩大類。 預(yù)染法：操作較簡(jiǎn)單，分離效果直觀。 將待測(cè)血清和蘇丹黑染料按一定比例混合進(jìn)行預(yù)染處理，離心后取上清液進(jìn)行電泳分析。 電泳后染色法：用電泳方法先將血漿脂蛋白各成份分開，再用蘇丹黑或油紅O進(jìn)行染

50、色。,預(yù)染法： （1）預(yù)染、電泳: 親脂染料如蘇丹黑B等進(jìn)行預(yù)染再電泳； （2）掃描、計(jì)算：置于光密度計(jì)內(nèi)進(jìn)行掃描，計(jì)算出各種脂蛋白的百分比，該數(shù)值乘以血漿總脂量，即可求出α-脂蛋白、β-脂蛋白和前β-脂蛋白含量。電泳支持物 ： 醋酸纖維薄膜、瓊脂糖凝膠或聚丙烯酰胺凝膠。,血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳：正常參考值(百分比)：α-脂蛋白 25.7%±4.1%前β-脂蛋白 21.0%±4.4%β-脂蛋

51、白 53.3%±5.3%乳糜微粒：陰性。,【參考值】,（三）血漿脂蛋白膽固醇測(cè)定,★脂蛋白中膽固醇含量較為穩(wěn)定，因此目前以測(cè)定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據(jù)。高密度脂蛋白-膽固醇(HDL-C)低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)極低密度脂蛋白-膽固醇(VLDL-C),1. 沉淀分離法,原理：在不同pH值條件下，脂蛋白與聚陰離子、2價(jià)金屬離子(Mn2+，Mg2+、Ca2+、Ni2+、Co2+)結(jié)合形成復(fù)合物

52、沉淀，以達(dá)到分離定量各種脂蛋白的目的。,方法： （1）肝素-錳 沉淀血清中VLDL和LDL，離心沉淀，HDL則留在上清液，再定量HDL-C量。 （2）聚乙烯硫酸鹽 沉淀LDL，離心去上清液留沉淀。再定量沉淀其中的LDL-C，即血漿的LDL量。 （3） 磷鎢酸-鎂法 常規(guī)方法 評(píng)價(jià)：操作簡(jiǎn)單，無(wú)需昂貴的儀器，是臨床應(yīng)用的檢測(cè)方法。,2．均相測(cè)定法（1）HDL-C測(cè)定,原理：利用脂蛋白與表面活性劑的親和

53、性差異進(jìn)行測(cè)定。CM、VLDL、LDL在多聚陰離子存在下與試劑Ⅰ發(fā)生凝集形成遮蔽圈，抑制其表面的FC反應(yīng)或試劑Ⅰ與CM、VLDL、LDL中的Ch反應(yīng)生成H2O2，并將H2O2清除；試劑Ⅱ與HDL形成可溶性復(fù)合體，使HDL中的膽固醇直接與酶試劑反應(yīng)。,血清HDL-C參考范圍： 成年男性 1.16mmol/L~1.42mmol/L （ 45mg/dl ~55 mg/dl）

54、 女性 1.29mmol/L ~1.55 mmol/L （50mg/dl~60mg/dl） 危險(xiǎn)閾值＜0.90mmol/L,【參考值】,【臨床意義】,HDL-C與冠心病發(fā)病呈負(fù)相關(guān)， HDL-C>1.55mmol/L是冠心病的“負(fù)”危險(xiǎn)因素。HDL-C<0.9mmol/L是冠心病危險(xiǎn)因素。HDL-C下降多見于腦血管病、DM、肝炎、肝硬化病人。也見于吸煙、肥胖者及高TG血

55、癥。適量飲酒、長(zhǎng)期體力勞動(dòng)和運(yùn)動(dòng)HDL-C升高。,（2） 血漿LDL-C測(cè)定——SUR法,SUR法檢測(cè)原理：試劑Ⅰ中的表面活性劑1能改變LDL以外的脂蛋白結(jié)構(gòu)并解離，所釋放出來(lái)的膽固醇與酶試劑反應(yīng)，產(chǎn)生的H2O2在缺乏偶聯(lián)劑時(shí)被消耗而不顯色；試劑Ⅱ中的表面活性劑2使LDL解離釋放膽固醇，參與Trinder反應(yīng)而顯色，色澤深淺與LDL-C量呈比例。,血清LDL-C參考范圍： 成人 2.07mmol/L~3.11

56、 mmol/L （80~120 mg/dl）LDL-C合適范圍：≤3.10mmol/L； 邊緣升高：3.13 mmol/L ～3.59mmol/L； 升高：≥3.62mmol/L。,【參考值】,【臨床意義】,LDL-C增高是AS發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險(xiǎn)因素。因TC水平也受HDL-C水平的影響，所以以LDL-C代替TC作為冠心病危險(xiǎn)因素指標(biāo)。美國(guó)全民膽固醇教育計(jì)劃(NCEP) 的成人治療專家組

57、Ⅲ(ATP Ⅲ) 均以降低LDL-C 為首要治療目標(biāo)值。,3．間接法,指利用血清中TC、TG和HDL-C含量，按公式推算出LDL-C的量。Friedewald于1972年發(fā)明的一個(gè)經(jīng)驗(yàn)式： LDL-C=TC?HDL-C?TG/2.2（以mmol/L計(jì)）或 LDL-C=TC?HDL-C?TG/5（以mg/dl計(jì)）。應(yīng)注意運(yùn)用這一公式有如下條件： ①空腹血清不含CM ②TG濃度在4.60mmol/L以下

58、 ③Ⅲ型高脂血癥除外,（四）Lp(a)測(cè)定,Lp(a)測(cè)定可有兩類方法,1.測(cè)定Apo(a)2.測(cè)定Lp(a)-C 目前大都用免疫學(xué)方法測(cè)定。避免或減少因?yàn)榭乖瑼po(a)多態(tài)性不同所造成的Lp(a)定量的準(zhǔn)確性。,正常人群的Lp(a)水平呈明顯的偏態(tài)分布，Lp(a)水平高于醫(yī)學(xué)決定水平（300mg/L），冠心病危險(xiǎn)性明顯增高。,【參考值】,【臨床意義】,血清Lp(a)水平是AS的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。,三、血清載脂蛋白測(cè)定,免疫

59、化學(xué)法：,單向免疫擴(kuò)散（RID）電免疫分析（如火箭電泳法）放射免疫分析（RIA）酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）等,早期,目前：,目前較適合臨床實(shí)驗(yàn)室的是免疫濁度法，包括免疫散射比濁法（INA）和免疫透射比濁法（ITA）。,【參考值】：,Apo AI：1.20g/L～1.60g/L，Apo B：0.80g/L～1.20g/L。,【臨床意義】,★ApoAI和ApoB可直接反映HDL和LDL的含量。同時(shí)測(cè)定載脂蛋白及脂蛋白HDL和L

60、DL對(duì)病理發(fā)生狀態(tài)進(jìn)行分析。冠心病、腎綜和DM等有ApoAI下降和ApoB升高。臨床上常將ApoAI/ApoB比值作為冠心病的危險(xiǎn)指標(biāo)。,四、血漿脂代謝相關(guān)酶的測(cè)定(自學(xué)),LPL測(cè)定方法：①酶法 ②LPL單克隆抗體的酶免疫分析法。參考值： 成人在150mg/L以上； 低于40mg/L，屬LPL純合子缺乏者； 40mg/L～150mg/L，屬雜合子缺乏者。LCAT,五、脂質(zhì)相關(guān)蛋白基因突變分析(自學(xué)),A

61、poE多態(tài)性分析ApoCⅡ微衛(wèi)星DNA多態(tài)性分析Apo(a)基因多態(tài)性分析,（一）檢測(cè)項(xiàng)目的合理選擇1.臨床血脂分析項(xiàng)目,總膽固醇（TC）甘油三酯（TG）高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）載脂蛋白AI（Apo AI）載脂蛋白B（Apo B）Lp（a）,六、血脂和脂蛋白檢測(cè)的臨床應(yīng)用,2.血漿靜置實(shí)驗(yàn)可作為高脂血癥的一種初篩實(shí)驗(yàn)。3. 特殊檢查項(xiàng)目，如Apo（AⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ和E

62、）、FFA、CETP、LPL、LCAT測(cè)定等，多用于科研或臨床特殊病例研究。,（二）血脂測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化：,1.分析前的準(zhǔn)備: 包括受試者的準(zhǔn)備，標(biāo)本采集，合格的試劑、校準(zhǔn)物的選用，檢測(cè)方法選擇。,血脂分析前變異來(lái)源于：①生物因素，如年齡、性別、種族等因素 的個(gè)體差異。②行為因素：飲食、吸煙、運(yùn)動(dòng)，鍛煉等。③臨床因素：疾病或藥物 ④ 標(biāo)本收集與處理：,1．抽血前2周保持平時(shí)的飲食習(xí)慣和體重。2．抽血前3d避免高脂

63、飲食，24hr內(nèi)不飲酒和不作劇烈運(yùn)動(dòng)。3．禁食12hr～14hr后空腹抽血。4．除臥床的患者外，一般應(yīng)坐位休息5min 后抽血。5．抽血前最好停用影響血脂的藥物數(shù)天或數(shù)周，否則應(yīng)記錄用藥情況。6.如血脂檢測(cè)異常,在進(jìn)一步處理前,應(yīng)在2 個(gè)月內(nèi)進(jìn)行再次或多次測(cè)定,但至少要相隔1 周。,標(biāo)本收集和處理上應(yīng)該采用美國(guó)疾控中心或中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)推薦的操作方法。,2.合格的試劑、校準(zhǔn)物的選用，檢測(cè)方法的選擇： 血脂和脂蛋白檢測(cè)的標(biāo)

64、準(zhǔn)化要求實(shí)驗(yàn)室之間對(duì)血脂項(xiàng)目的測(cè)定結(jié)果具有可比性；建立一個(gè)可靠的參考系統(tǒng)作為準(zhǔn)確性基礎(chǔ)。,（三）試劑選擇原則與血脂測(cè)定技術(shù)指標(biāo),1．不精密度與不準(zhǔn)確度 2．靈敏度 3．可檢測(cè)上限 4．特異性 5．干擾因素6．試劑穩(wěn)定性 7．反應(yīng)速度,,復(fù)習(xí)題,名詞：,1. Trinder反應(yīng) 2. LB反應(yīng) 3.三聯(lián)酶法,思考題：,1.血脂及血漿脂蛋白的測(cè)定對(duì)標(biāo)本采集和 處理有什么要求？2.試舉3個(gè)利用Trinder反應(yīng)