生物化學(xué)課件---蛋白質(zhì)

1、第二章 蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能,一、概述 二、蛋白質(zhì)的基本組成單位–氨基酸解)三、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)四、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系五、蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)、分離純化與鑒定,了解蛋白質(zhì)的元素組成；掌握蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位—氨基酸的基本結(jié)構(gòu)；了解氨基酸的分類；了解稀有氨基酸和非蛋白質(zhì)氨基酸；掌握氨基酸的各種理化性質(zhì)；掌握肽鍵、肽鏈和蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的概念，同時(shí)了解蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的表示方法；掌握二肽及多肽的形成過(guò)程；了解蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的測(cè)定方法。。,

2、思考題,1. 蛋白質(zhì)分為哪些類型？各行使何種功能？ 2. 自然界存在的氨基酸種類、結(jié)構(gòu)、性質(zhì)？ 3. 肽鍵有何特點(diǎn)？對(duì)蛋白質(zhì)構(gòu)象的形成有何影響？ 4. 何謂蛋白質(zhì)的一、二、三、四級(jí)結(jié)構(gòu)？維系蛋白質(zhì)構(gòu)象的作用力有哪些？ 5. 何謂蛋白質(zhì)的超二級(jí)結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域？ 6. 試述蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)和高級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。 7. 何謂蛋白質(zhì)的變性作用與復(fù)性作用？,一

3、、概述,（一）蛋白質(zhì)的生物學(xué)意義和元素組成（二）蛋白質(zhì)的分類,（一）蛋白質(zhì)的生物學(xué)意義和元素組成,1. 蛋白質(zhì)的生物學(xué)意義 （1）蛋白質(zhì)生物學(xué)功能的多樣性 酶的催化功能、控制生長(zhǎng)和分化、代謝調(diào)節(jié)功能、運(yùn)動(dòng)功能、運(yùn)輸作用、免疫保護(hù)作用、接受和傳遞信息、貯存營(yíng)養(yǎng)功能、結(jié)構(gòu)支持作用。 （2）蛋白質(zhì)生物學(xué)功能的復(fù)雜性 某一功能的發(fā)揮往往受到多種因素的影響與調(diào)節(jié)。,2. 蛋白質(zhì)的元素組成,一般含

4、有：碳（50％~55％） 、氮（15％~18％）、氧（20％~23％）、氫（6％~8％）、硫（0％~4％）。 在某些蛋白質(zhì)中，還含有一些微量元素如：磷、鐵、銅、鉬、碘、鋅等。 蛋白質(zhì)元素組成的一個(gè)特點(diǎn)：各種蛋白質(zhì)的氮含量比較恒定，平均值為16％左右。 用凱氏定氮法測(cè)定氮的含量，計(jì)算蛋白質(zhì)的含量（由氮的含量乘以6.25）出來(lái)。,（二）蛋白質(zhì)的分類,1.按蛋白質(zhì)的構(gòu)象分類 2.按蛋白質(zhì)的功能

5、分類 3.按蛋白質(zhì)的組成和溶解性分類,1. 按蛋白質(zhì)的構(gòu)象分類,分為球狀蛋白質(zhì) 和纖維狀蛋白質(zhì)。,球狀蛋白質(zhì) （globular protein） 血紅蛋白、肌紅 蛋白等。,纖維狀蛋白質(zhì)（fibroue protein） 膠原蛋白、彈性 蛋白、角蛋白、絲心蛋白等。,催化蛋白（酶）調(diào)節(jié)蛋白結(jié)構(gòu)蛋白運(yùn)輸?shù)鞍踪A藏蛋白運(yùn)動(dòng)蛋白防御蛋白電子傳遞蛋白,2.按蛋白質(zhì)的功能分類,3

6、.按蛋白質(zhì)的組成和溶解性分類,單純蛋白質(zhì)（simple protein）結(jié)合蛋白質(zhì)（complex protein）,二、蛋白質(zhì)的基本組成單位–氨基酸,（一）氨基酸的結(jié)構(gòu)（二）氨基酸的分類（三）氨基酸的性質(zhì),（一） 氨基酸的結(jié)構(gòu),,蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位α-氨基酸的結(jié)構(gòu)通式,側(cè)鏈,脯氨酸,亞氨基,（二）氨基酸的分類,1.編碼氨基酸 2.非編碼氨基酸 3.非蛋白質(zhì)氨基酸,,,1. 編碼氨基酸,,,第21種氨基酸—硒代半胱氨酸,

7、2. 非編碼氨基酸,沒有相應(yīng)的三聯(lián)體遺傳密碼。由編碼氨基酸經(jīng)羥基化、甲基化、磷酸化等修飾形成的衍生物。 例如：膠原蛋白和彈性蛋白中的 4-羥脯氨酸 、5-羥賴氨酸等。,3.非蛋白質(zhì)氨基酸,在生物體內(nèi)，還發(fā)現(xiàn)150多種不參與蛋白質(zhì)組成的氨基酸。 這些非蛋白質(zhì)氨基酸多是重要的代謝物前體或代謝中間產(chǎn)物。,,1.氨基酸的兩性解離及等電點(diǎn) 氨基酸是兩性電解質(zhì)（ampholyte）,（三）氨基酸的性質(zhì),氨基酸兩

8、性解離,,,,,,R,COOH,,C,H,,,NH,2,R,COO,,C,H,,,NH,3,+,-,中性分子形式,兩性離子形式,,,,,R,COOH,,C,H,,,NH,3,R,COO-,,C,H,,,NH,3,+,,,,,R,COO-,,C,H,,,NH,2,+,OH-,H+,,對(duì)某種氨基酸來(lái)講，當(dāng)溶液在某一特定的 pH 時(shí)，氨基酸所帶凈電荷為零（即正電荷數(shù)與負(fù)電荷數(shù)相等） ，在電場(chǎng)中，既不向正極移動(dòng)，也不向負(fù)極移動(dòng)。這時(shí)，溶液的pH

9、 稱為該氨基酸的等電點(diǎn)(isoelectric point)，用pI表示。 ★ 兩性解離物質(zhì)所帶靜電荷為零時(shí)溶液的pH。,氨基酸的等電點(diǎn),,（1）不同氨基酸，由于R 基團(tuán)結(jié)構(gòu)的不同，有不同的等電點(diǎn)。在一定實(shí)驗(yàn)條件下，等電點(diǎn)是氨基酸的特征常數(shù)。 （2）當(dāng)氨基酸處于等電點(diǎn)狀態(tài)時(shí)，其溶解度最小，容易發(fā)生沉淀。 利用這一特性，可以從各種氨基酸的混合物溶液中，分離制取某種氨基酸。,氨基酸等電點(diǎn)的作用,（1）氨基酸的構(gòu)型

10、 除甘氨酸以外，其余 20 種氨基酸的 Cα都是不對(duì)稱碳原子（手性）。,2.氨基酸的光學(xué)活性與吸收光譜,甘氨酸的結(jié)構(gòu)式,,參與蛋白質(zhì)組成的氨基酸在可見光區(qū)都沒有光吸收；在紫外光區(qū)只有色氨酸、酪氨酸和苯丙氨酸有吸收光的能力。其最大吸收波長(zhǎng)(λ)分別為280nm、275nm、257nm；是利用紫外分光光度計(jì)，在280nm波長(zhǎng)處，測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的基礎(chǔ)。,（2）吸收光譜,三、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu),（一）蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)（二）蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)

11、,,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)層次,一級(jí)結(jié)構(gòu)（primary structure）；二級(jí)結(jié)構(gòu)（secondary structure）；超二級(jí)結(jié)構(gòu)（supersecondary structure）；結(jié)構(gòu)域（structural domain）；三級(jí)結(jié)構(gòu)（tertiary structure）；四級(jí)結(jié)構(gòu)（quarternary structure）,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)層次,,（一）蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu),概念：多肽鏈上各種氨基酸殘

12、基的排列順序，即氨基酸序列稱為蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)（primary structure）。,（51Aa，5733 u）,1.肽和肽鍵,肽 由氨基酸構(gòu)成的線形聚合物稱為肽（peptide）。二個(gè)氨基酸分子縮合而成的肽，稱為二肽（dipeptide）。,,,,,肽鍵（peptide bone）多肽鏈（polypeptide chain）,,,肽鍵氮氧原子共振產(chǎn)生：（1）部分雙鍵性質(zhì)；（2）多肽主鏈酰胺平面；（3）Cα處于順式或反式

13、構(gòu)型；（4）二面角；（5）偶極性（N末端，C末端）。,氨基酸殘基（amino acid residue）,,H,OH,蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的表示法,中文氨基酸殘基命名法：酪氨酰甘氨酰甘氨酰苯丙 氨酰甲硫氨酸三字母符號(hào)表示法：Tyr·Gly·Gly·Phe·Met單字母符號(hào)表示法：Y·G·G·F·M,⑴ 谷胱甘肽⑵

14、腦啡肽（5肽）⑶ 短桿菌肽S（10肽）⑷ 肽類激素,3.天然活性肽,（二）蛋白質(zhì)的三維結(jié)構(gòu),蛋白 質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)指的是蛋白質(zhì)分子中全部原子和基團(tuán)相互間的立體關(guān)系，包括全部原子和基團(tuán)的排列、分布及肽鏈的走向。又稱為蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu)、空間結(jié)構(gòu)或構(gòu)象，可分為二級(jí)、超二級(jí)、結(jié)構(gòu)域、三級(jí)和四級(jí)結(jié)構(gòu)。,1.蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)2.蛋白質(zhì)的超二級(jí)結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域3.蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)4.蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)5.穩(wěn)定蛋白質(zhì)構(gòu)象的作用力,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)層次,1.

15、基本知識(shí),（1）構(gòu)型與構(gòu)象 構(gòu)型（configuration） 構(gòu)象（conformation）1969年，IUPAC （2）蛋白質(zhì)的立體結(jié)構(gòu)原理 ①肽單位與二面角 將多肽鏈的基本結(jié)構(gòu)中，-Cα-CO-NH-Cα-這一主鏈骨架的重復(fù)單位叫肽單位（Pauling和Corey在1951年根據(jù)X-射線衍射結(jié)果，提出蛋白質(zhì)肽單位平面原則 3）。,肽單位平面結(jié)構(gòu),,,,,肽單位立體結(jié)構(gòu),二

16、面角（dihedral angle）,肽平面1 圍繞 Cα2—N1 單鍵旋轉(zhuǎn)，其旋轉(zhuǎn)的角度用Φ表示； 肽平面2 也可以圍繞 Cα2—C2 單鍵旋轉(zhuǎn)，其旋轉(zhuǎn)的角度用Ψ表示。 (右為正,左為負(fù)),N1,C α 2,C2,多肽鏈主鏈骨架的構(gòu)象是由每個(gè)Cα的成對(duì)二面角（Φ，Ψ）所決定的。 ②非鍵合原子間的最小接觸距離 在相鄰的兩個(gè)肽單位的構(gòu)象中，非鍵合原子間的接近有無(wú)障礙，是否符合標(biāo)準(zhǔn)接觸距離，即能量是否達(dá)到最

17、低，也是肽鏈構(gòu)象能否穩(wěn)定存在的重要立體化學(xué)原則。,2. 二級(jí)結(jié)構(gòu),概 念 指多肽鏈主鏈在一級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，某些肽段借助氫鍵進(jìn)一步盤旋或折疊，從而形成有規(guī)律的構(gòu)象。 主要類型 α-螺旋、β-折疊片、β-轉(zhuǎn)角、無(wú)規(guī)卷曲。,（1）α-螺旋,即每個(gè)氨基酸殘基（n）的＞C＝O 與另一個(gè)氨基酸殘基（n+4）的＞N－H 形成氫鍵。,,,Pauling 和Corey于1951 年提出蛋白質(zhì)的α-螺旋（α-h

18、elix）結(jié)構(gòu)模型。,羊毛等纖維狀蛋白質(zhì)中，球狀蛋白中也廣泛存在。它是蛋白質(zhì)主鏈的一種典型結(jié)構(gòu)形式 .,每隔3.6個(gè)氨基酸殘基，螺旋上升一圈，每圈間距0.54nm.氫鍵環(huán)內(nèi)包括13個(gè)主鏈原子，因此稱這種螺旋為3.613螺旋。,電子顯微鏡下的人體頭發(fā),（2）β-折疊,（a）Antiparallel,β-折疊：伸展的多肽鏈靠氫鍵聯(lián)結(jié)而成的鋸齒狀片層結(jié)構(gòu)，存在于纖維蛋白，球狀蛋白也有。 又稱為β-折疊片（β-pleated sheet）。,

19、反平行式較為穩(wěn)定，例如在絲心蛋白中存在穩(wěn)定的反平行β–折疊。,（3）β-轉(zhuǎn)角,蛋白質(zhì)分子中連接不同結(jié)構(gòu)單位的180o轉(zhuǎn)彎結(jié)構(gòu)稱為β-轉(zhuǎn)角（ β-turn）。由氨基酸殘基（n）的＞C＝O 與另一個(gè)氨基酸殘基（n+3）的＞N－H 形成氫鍵。,（4）無(wú)規(guī)卷曲,沒有規(guī)律性的多肽主鏈骨架的構(gòu)象，就是無(wú)規(guī)卷曲（random coil， Φ、Ψ角度 不定）；球蛋白分子中，往往含有較多的無(wú)規(guī)卷曲；無(wú)規(guī)卷曲往往有利于多肽鏈形成靈活的、具有特異生物活性的構(gòu)

20、象。,（1）超二級(jí)結(jié)構(gòu) 相鄰的二級(jí)結(jié)構(gòu)單元（主要是α–螺旋和β–折疊）組合在一起，形成有規(guī)則的、空間上能夠辨認(rèn)的二級(jí)結(jié)構(gòu)的組合體，充當(dāng)三級(jí)結(jié)構(gòu)的構(gòu)件，稱為超二級(jí)結(jié)構(gòu)（supersecondary structure）。,3. 超二級(jí)結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域,,常見的組合形式：αα、ββ、βαβ,（2）結(jié)構(gòu)域,多肽鏈在二級(jí)結(jié)構(gòu)或超二級(jí)結(jié)構(gòu)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步卷曲折疊成為相對(duì)獨(dú)立、近似球形的三維實(shí)體稱為結(jié)構(gòu)域（structure domain），

21、是三級(jí)結(jié)構(gòu)的局部折疊區(qū)。,結(jié)構(gòu)域之間常常只有一段肽鏈相連，形成所謂“鉸鏈區(qū)”（hinge region），使結(jié)構(gòu)域容易發(fā)生相對(duì)運(yùn)動(dòng)。結(jié)構(gòu)域之間的這種柔性（flexibility）有利于如酶和抗體活性的發(fā)揮。,4.三級(jí)結(jié)構(gòu),多肽鏈在二級(jí)結(jié)構(gòu)、超二級(jí)結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域的基礎(chǔ)上，主鏈構(gòu)象和側(cè)鏈構(gòu)象相互作用，進(jìn)一步盤曲折疊形成特定的球狀分子結(jié)構(gòu)，稱作三級(jí)結(jié)構(gòu)（tertiary structure） 。 三級(jí)結(jié)構(gòu)是指多肽鏈中所

22、有原子的空間排布。,肌紅蛋白 myoglobin,5. 四級(jí)結(jié)構(gòu),由兩條或兩條以上具有三級(jí)結(jié)構(gòu)的多肽鏈聚合而成的特定三維結(jié)構(gòu)（構(gòu)象）稱為蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)（quarter-nary struc-ture）。涉及亞基的種類、數(shù)目和亞基的空間排布，包括亞基間的接觸位點(diǎn)和相互作用關(guān)系，但不包括亞基本身的構(gòu)象。,α-亞基（subunit）,血紅蛋白 hemoglobin,,β -亞基,血紅素 （ haem）,煙草花葉病毒（TMV）示意圖,

23、由2 130個(gè)相同亞基構(gòu)成的螺旋對(duì)稱性柱形蛋白質(zhì)外殼，緊密排列于一含有6 390個(gè)核苷酸的單鏈RNA分子周圍。解離的TMV外殼亞基和RNA，在合適的條件下能自裝配成完整的TMV。,蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)層次,,5. 穩(wěn)定蛋白質(zhì)構(gòu)象的作用力,四、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,（一）蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系（二）蛋白質(zhì)構(gòu)象與功能的關(guān)系,1. 一級(jí)結(jié)構(gòu)變異與生物進(jìn)化 在不同生物體中行使相同或相似功能的蛋白質(zhì)，稱為同功能蛋白質(zhì)。

24、 它們的氨基酸序列具有明顯的相似性，這種現(xiàn)象稱為序列同源，有明顯序列同源的蛋白質(zhì)，也稱同源蛋白質(zhì)。,（一）蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系,（1）同源蛋白質(zhì)完全相同的氨基酸殘基，稱不變殘基，它們決定了蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)與功能。 （2）有相當(dāng)大變化的氨基酸殘基，稱為可變殘基，它們的差異體現(xiàn)了種屬特異性。 因此，對(duì)不同生物來(lái)源的同功能蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)進(jìn)行比較研究：可以幫助我們了解哪些氨基酸對(duì)其活性是重要的，哪些是不重要

25、的；可為生物進(jìn)化提供新的可靠依據(jù)。,,同源蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的種屬差異與保守性,2.一級(jí)結(jié)構(gòu)變異與分子病,（1）分子病 基因突變 Aa變異 蛋白結(jié)構(gòu)和功能改變引起的遺傳病。 （2）鐮刀型紅細(xì)胞貧血病 由Hb分子β亞基N末端序列的一級(jí)結(jié)構(gòu)改變引起Hb表面電荷和等電點(diǎn)變化，溶解度降低并出現(xiàn)不正常線形締合。,,,,,正常紅細(xì)胞和鐮刀狀紅細(xì)胞的掃描電鏡圖譜,,？,一級(jí)結(jié)構(gòu)相似，可能會(huì)有相同的功能；一級(jí)結(jié)構(gòu)有差異，功能會(huì)不同。

26、如OX與ADH:,3. 多肽激素的一級(jí)結(jié)構(gòu)與功能,（ADH）,（OX）,不同生物（哺乳動(dòng)物、鳥類、魚類）來(lái)源胰島素分子一級(jí)結(jié)構(gòu)，發(fā)現(xiàn)組成的 51 個(gè)氨基酸殘基中，只有 24 個(gè)氨基酸殘基始終保持不變，為不同生物所共有，為維持高級(jí)結(jié)構(gòu)和生物活性所必需。,4.不同生物來(lái)源的胰島素一級(jí)結(jié)構(gòu)比較,5.一級(jí)結(jié)構(gòu)斷裂與功能激活,有些蛋白質(zhì)常以無(wú)活性的前體形式產(chǎn)生和貯存。在機(jī)體需要時(shí)，切去部分肽段之后，才變成有活性的蛋白質(zhì)。如參與蛋白質(zhì)消化的各種蛋白

27、酶、參與血液凝固的凝血酶、凝血因子等。 激活（activation）：使前體蛋白質(zhì)變成活性蛋白質(zhì)的過(guò)程，稱為激活。,（二）蛋白質(zhì)構(gòu)象與功能的關(guān)系,1.變構(gòu)調(diào)節(jié)活性2.變性喪失活性,血紅蛋白,,β -亞基,α-亞基（ α- subunit）,,血紅素 （ haem）,血紅蛋白的變構(gòu)現(xiàn)象（變構(gòu)時(shí)的亞基移動(dòng)）,,,,血紅蛋白和肌紅蛋白的氧合曲線不同，前者是 S 形曲線，后者是雙曲線。 α-亞基可與氧結(jié)合，而β-亞基由于存在空間

28、位阻，幾乎不與氧結(jié)合。當(dāng)α-亞基與氧結(jié)合后，發(fā)生三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化，此變化使相鄰的β-亞基發(fā)生三級(jí)結(jié)構(gòu)的變化，與氧結(jié)合使血紅蛋白結(jié)合氧的能力在短時(shí)間內(nèi)迅速上升，從，而使曲線程S 形。,氧飽和度（%）,（一）蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)（二）蛋白質(zhì)分離純化的原則與方法,五、蛋白質(zhì)的重要性質(zhì)、分離純化與鑒定,1.蛋白質(zhì)的兩性解離與等電點(diǎn)2.蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性3.蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng),（一）蛋白質(zhì)的重要性質(zhì),蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)（isoelectric poin

29、t） 當(dāng)溶液在某個(gè)pH時(shí)，使蛋白質(zhì)分子所帶正電荷數(shù)與負(fù)電荷數(shù)恰好相等，即凈電荷為零，在直流電場(chǎng)中，既不向陽(yáng)極移動(dòng)，也不向陰極移動(dòng)，此時(shí)溶液的pH 就是該蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)，用pI表示。 ★ 兩性解離物質(zhì)所帶靜電荷為零時(shí)溶液的pH。,1.蛋白質(zhì)的兩性解離與等電點(diǎn),（1）蛋白質(zhì)變性 天然蛋白質(zhì)在變性因素作用之下，其一級(jí)結(jié)構(gòu)保持不變，但其高級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生了異常的變化，即由天然態(tài)（折疊態(tài)）變成了變性態(tài)（伸展態(tài)），

30、從而引起生物功能的喪失，物理、化學(xué)性質(zhì)也發(fā)生改變，這種現(xiàn)象被稱為變性（denaturation）。,,2. 蛋白質(zhì)的變性與復(fù)性,引起變性因素： 物理因素和化學(xué)因素。1.熱（60～100℃ ）；2.pH；3.鹽；4.有機(jī)溶劑；5.尿素與鹽酸胍；6.去垢劑等,,變性表現(xiàn)：（1）物理性質(zhì)的改變：溶解度下降；（2）化學(xué)性質(zhì)的改變：易被蛋白酶消化；（3）生物功能的改變：酶喪失活性、激素蛋白喪失生理調(diào)節(jié)作用、抗體失去與抗原專一性結(jié)合能力。

31、 變性機(jī)理：破壞了蛋白質(zhì)分子構(gòu)象中的次級(jí)鍵。使原來(lái)埋藏在分子內(nèi)部的疏水集團(tuán)大量暴露出來(lái)，使分子表面水化膜破壞，分子結(jié)合沉淀。,以天然蛋白質(zhì)作對(duì)照，測(cè)定蛋白質(zhì)的物理變化，觀察蛋白質(zhì)的溶解度是否下降，是否凝集、沉淀等； 測(cè)定蛋白質(zhì)化學(xué)性質(zhì)的變化； 測(cè)定蛋白質(zhì)的比活性。,蛋白質(zhì)變性的鑒定方法,蛋白質(zhì)的變性有可逆變性和不可逆變性之分。可逆變性在除去變性因素之后，在適宜的條件下，變性的蛋白質(zhì)可以從伸展態(tài)恢復(fù)到折疊態(tài)，并恢復(fù)全部的生物活

32、性的現(xiàn)象，稱之為復(fù)性（renaturation）。,（2）復(fù)性,3. 蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng),蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中的自由 一NH2 、 一COOH 和肽鍵，以及某些氨基酸的側(cè)鏈基團(tuán)，能夠與某種化學(xué)試劑發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生有色物質(zhì) 。,,蛋白質(zhì)的主要呈色反應(yīng),1.原則 2.方法 （1）前處理 （2）沉淀分離 （3）分離純化 （4）質(zhì)量鑒定,（二）蛋白質(zhì)分離純化的原則與方法,思考題,1. 蛋白質(zhì)分為哪些類型？各行使何種功