嗜群血蜱共生菌的研究.pdf

1、嗜群血蜱（Haemaphysalis concinna）是專性吸血的外寄生節(jié)肢動物，隸屬于硬蜱科血蜱屬，是多種病原菌的重要傳播媒介。該蜱主要分布在前蘇聯(lián)、日本、歐洲等國家和地區(qū)，在我國的多省區(qū)如吉林、內(nèi)蒙古、新疆、甘肅、黑龍江和四川等地均有發(fā)現(xiàn)。自上世紀(jì)90年代末以來，四川地區(qū)陸續(xù)暴發(fā)了多次嗜群血蜱蟲害，對農(nóng)業(yè)和人畜造成了極大的危害。該蜱一年至少可繁殖2代，與長角血蜱相似。蜱的共生菌與蜱的發(fā)育和繁殖等生物學(xué)過程密切相關(guān)，但尚未對這一類群

2、的共生菌進(jìn)行研究。
　　首先，本文通過構(gòu)建細(xì)菌16SrRNA基因文庫和PCR-RFLP技術(shù)分析嗜群血蜱體內(nèi)的微生物多樣性。發(fā)現(xiàn)Coxiella-like(CLS-Hc)共生菌，其與進(jìn)化關(guān)系最近的物種16SrRNA基因序列相似度為97％。在嗜群血蜱中未檢測到Rickettsia-like、Arsenophonus-like、Francisella-like和Wolbachia等其他已報道的蜱類共生菌。運(yùn)用透射電子顯微鏡技術(shù)對CLS-

3、Hc的結(jié)構(gòu)形態(tài)進(jìn)行了初步觀察，結(jié)果與已報道的Coxiella-like共生菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)一致。
　　其次，設(shè)計嗜群血蜱共生菌CLS-Hc的特異性引物，通過診斷PCR檢測CLS-Hc的感染率、垂直傳遞性和感染位點(diǎn)。感染率檢測結(jié)果:CLS-Hc在實(shí)驗(yàn)室種群的雌蜱和雄蜱中的感染率均為100％;垂直傳遞性檢測結(jié)果:CLS-Hc在卵、幼蜱、若蜱、成蜱（雌蜱、雄蜱）及F1代卵中均有存在，說明CLS-Hc在嗜群血蜱中可垂直傳遞。感染位點(diǎn)檢測結(jié)果表

4、明CLS-Hc特異性感染嗜群血蜱的卵巢和馬氏管，說明CLS-Hc在嗜群血蜱中的感染具有組織特異性。
　　最后，運(yùn)用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)分析了共生菌CLS-Hc的數(shù)量動態(tài)，探究共生菌與嗜群血蜱發(fā)育的關(guān)系。結(jié)果顯示:CLS-Hc在卵中密度最大，若蜱中密度最小，在成蜱中密度又有小幅增加;CLS-Hc在若蜱飽血前后變化明顯，飽血期密度顯著高于饑餓期;在卵巢中，CLS-Hc密度在飽血后1天密度最低，2天時密度達(dá)到最高，此后保持在較低水平;