細菌生理生化試驗

1、實驗實驗一細菌的細菌的單孢分離單孢分離微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察微生物的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察主要是通過染色，在顯微鏡下對其形狀、大小、排列方式、細胞結(jié)構(gòu)（包括細胞壁、細胞膜、細胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性進行觀察，直觀地了解細菌在形態(tài)結(jié)構(gòu)上特性，根據(jù)不同微生物在形態(tài)結(jié)構(gòu)上的不同達到區(qū)別、鑒定微生物的目的。細菌細胞在固體培養(yǎng)基表面形成的細胞群體叫菌落（colony）。不同微生物在某種培養(yǎng)基中生長繁殖，所形成的菌落特征有很大差異，而同一種的細菌在一定條

2、件下，培養(yǎng)特征卻有一定穩(wěn)定性。，以此可以對不同微生物加以區(qū)別鑒定。因此，微生物培養(yǎng)特性的觀察也是微生物檢驗鑒別中的一項重要內(nèi)容。一：細菌的培養(yǎng)特征包括：在固體培養(yǎng)基上觀察菌落大小、形態(tài)、顏色（色素是水溶性還是脂溶性）、光澤度、透明度、質(zhì)地、隆起形狀、邊緣特征及遷移性等。在液體培養(yǎng)中的表面生長情況（菌膜、環(huán)）混濁度及沉淀等。半固體培養(yǎng)基穿刺接種觀察運動、擴散情況。1、瓊脂平皿上的生長表現(xiàn)觀察并記錄不同的菌落：大小、形狀、邊緣、表面性狀、隆

3、起度、顏色、透明度、硬度、溶血等。2、觀察瓊脂斜面上的生長表現(xiàn)：菌苔的顏色及茂盛情況。3、觀察半固體瓊脂的生長現(xiàn)象：絨毛狀、線狀等。二：細菌的培養(yǎng)特征1.點狀2.圓形3.絲狀4.不規(guī)則形5.假根狀6.紡錘狀7.扁平8.隆起9.凸起10.墊狀11.臍狀12.邊緣整齊13.波狀14.裂片狀15.嚙蝕狀16.絲狀17.卷發(fā)狀18.絲線狀19.刺毛狀20.串珠狀21.疏展狀22.樹根狀23.假根狀24.絲狀25.串珠狀26.乳頭狀27.絨毛狀2

4、8.樹根狀29.量杯狀30.蘿卜狀31.漏斗狀32.囊狀33.層狀34.絮狀35.環(huán)狀36.蹼狀37.膜狀實驗實驗二細菌的生理生化試驗細菌的生理生化試驗實驗九細菌的生理生化試驗1目的1.1了解細菌鑒定中常用的生理生化試驗反應原理1.2掌握測定細菌生理生化反應的技術(shù)和方法2原理各種微生物在代謝類型上表現(xiàn)了很大的差異。由于細菌特有的單細胞原核生物的特性，這種差異就表現(xiàn)的更加明顯。不同細菌分解、利用糖類、脂肪類和蛋白類物質(zhì)的能力不同，所以其發(fā)

5、酵的類型和產(chǎn)物也不相同，也就是說，不同微生物具有不同的酶系統(tǒng)。即使在分子生物學技術(shù)和手段不斷發(fā)展的今天，細菌的生理生化反應在菌株的分類鑒定中仍有很大作用。3材料3.1菌種大腸埃希氏菌（Escherichiacoli）、產(chǎn)氣腸桿菌（Enterobacteraerogenes）、普通變形桿菌（Proteusvulgaris）、枯草芽孢桿菌（Bacillussubtilis）的斜面菌種3.2培養(yǎng)基葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基、蛋白胨水培養(yǎng)基、糖發(fā)酵培

6、養(yǎng)基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）3.3試劑：40％NaOH溶液、肌酸、甲基紅試劑、吲哚試劑、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示劑。3.4器具：超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、高壓滅菌鍋、試管、移液管、杜氏小套管。4流程：糖發(fā)酵試驗→VP試驗→甲基紅試驗→吲哚試驗5步驟取5支裝有葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管，分別標記大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、普通變形菌、枯草芽孢桿菌和空白對照。5.2接種培養(yǎng)以無菌操作分別接種少量菌苔至以上相應試管中，空白對照管不接菌，置37℃恒溫箱

7、中，培養(yǎng)24～48h。5.3觀察記錄取出以上試管，振蕩2min。另取5支空試管相應標記菌名，分別加入3～5ml以上對應管中的培養(yǎng)液，再加入40％NaOH溶液10～20滴，并用牙簽挑入約0.5～1mg微量肌酸，振蕩試管，以使空氣中的氧溶入，置37℃恒溫箱中保溫15～30min后，若培養(yǎng)液呈紅色，記錄為V.P.試驗陽性反應（用“＋”表示）；若不呈紅色，記錄為V.P.試驗陰性反應（用“－”表示）。注意：原試管中留下的培養(yǎng)液用作甲基紅試驗。（三

8、）甲基紅試驗（M.R.試驗）1目的了解鑒別腸桿菌科各菌屬的甲基紅試驗原理，并掌握其操作方法2原理腸桿菌科各菌屬都能發(fā)酵葡萄糖，在分解葡萄糖過程中產(chǎn)生丙酮酸，進一步分解中，由于糖代謝的途徑不同，可產(chǎn)生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產(chǎn)物，可使培養(yǎng)基PH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅。3材料3.1菌種同VP試驗3.2培養(yǎng)基同VP試驗4流程培養(yǎng)液→指示劑→觀察→記錄結(jié)果5步驟于V.P.試驗留下的培養(yǎng)液中，各加入2～3滴甲基紅指示

9、劑，注意沿管壁加入，仔細觀察培養(yǎng)液上層，若培養(yǎng)液上層變成紅色，即為陽性反應；若仍呈黃色，則為陰性反應，分別用“＋”或“－”表示。（四）吲哚試驗1目的掌握吲哚試驗(Ehrlich法)的原理和方法2原理有些細菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基質(zhì))。吲哚本身沒有顏色，不能直接看見，但當加入對二甲基氨基苯甲醛試劑時，該試劑與吲哚作用，形成紅色的玫瑰吲哚。3材料3.1菌種測試菌株3.2培養(yǎng)基蛋白胨水培養(yǎng)基3.3試劑二甲基氨基苯甲