膜片鉗問題解答

1、膜片鉗常見問題解答膜片鉗常見問題解答1.什么是電壓鉗與膜片鉗，有什么區(qū)別？什么是電壓鉗與膜片鉗，有什么區(qū)別？答：電壓鉗技術(shù)是通過向細(xì)胞內(nèi)注射一定的電流（怎么注射），抵消離子通道開放時(shí)所產(chǎn)生的離子流，從而將細(xì)胞膜電位固定在某一數(shù)值。由于注射電流的大小與離子流的大小相等、方向相反，因此它可以反映離子流的大小和方向。膜片鉗技術(shù)鉗制的是“膜片”，是指采用尖端經(jīng)過處理的微電極與細(xì)胞膜發(fā)生緊密接觸，使尖端下的這片細(xì)胞膜在電學(xué)上與其它細(xì)胞膜分離(怎么

2、分離)，這大大降低了背景噪聲，使單通道微弱的電流得以分辨出來。采用電壓鉗技術(shù)將這片膜的電位鉗制在某一數(shù)值，可記錄到單通道電流。從這點(diǎn)上看，膜片鉗技術(shù)是特殊的電壓鉗技術(shù)。隨著膜片鉗技術(shù)的發(fā)展，它已經(jīng)不僅僅局限于“膜片”的概念，也不僅僅采用電壓鉗技術(shù)，還常采用電流鉗技術(shù)。2.離子通道電導(dǎo)的單位是什么？如何換算？離子通道電導(dǎo)的單位是什么？如何換算？答：離子通道電導(dǎo)的單位是西門子（SiemensS），舊稱姆歐，即安培伏特。常用皮西門子（pS），

3、1pS＝10E12S，1000pS＝1pAmV。3.MultiClamp700A中，在放大器和信號(hào)器的連接中，放大器的中，在放大器和信號(hào)器的連接中，放大器的rawoutput是否需要連接信號(hào)器的否需要連接信號(hào)器的ANALOGIN接口接口scaledoutput，rawoutput有什么區(qū)有什么區(qū)別答：Rawoutput為原始信號(hào)輸出，放大器輸出的信號(hào)沒有經(jīng)過處理（如濾波、放大等），scaledoutput為定標(biāo)輸出，輸出的信號(hào)經(jīng)過了處理

4、。后者的靈活度大，因此多采用。目前膜片鉗放大器多設(shè)有scaledoutput，你可將其與數(shù)模轉(zhuǎn)換器（你所說的信號(hào)器）的ANALOGIN連接，這樣放大器的輸出信號(hào)就能傳送給計(jì)算機(jī)了，此時(shí)已經(jīng)沒有必要再使用Rawoutput了。若你想記錄兩個(gè)輸出，則需要將Rawoutput與數(shù)模轉(zhuǎn)換器的另一個(gè)ANALOGIN連接。4.在Clampex的EditprotocolWave中，中，Step和ramp各有什么適用范圍？各有什么適用范圍？答：Ramp

5、多用于電流衰減緩慢的離子通道以及失敏不明顯的受體通道的IV曲線制作，如多用于鉀、鈣離子通道。而像鈉通道，其衰減非常迅速，在持續(xù)去極化的情況下，通道很快失活，無法使用ramp，另外諸如煙堿受體通道等具有明顯失敏特征的受體通道也不宜采用ramp。5.什么是什么是ramp？有什么作用？？有什么作用？答：與步階（step）不同，ramp在pClamp軟件中表示施加給細(xì)胞的一種逐漸變化的電壓或電流，稱為“斜坡電壓或電流”，可用于作通道IV曲線。6

6、.inputresistance是什么意思？如何測(cè)量？是什么意思？如何測(cè)量？答：在電生理學(xué)中，“inputresistance”指“輸入膜電阻（Rin）”。全細(xì)胞記錄時(shí)，給細(xì)胞膜施加一系列刺激方波（一般為超極化），在離子通道沒有開放的情況下測(cè)定跨膜電流，根據(jù)歐姆定律即可求出Rin。膜電阻（Rm）與膜輸入阻抗Rin的度。一般第一步拉制電極頸部，溫度要比第二步高（對(duì)于P97拉制儀，溫度的設(shè)定需要先測(cè)量Ramp值），拉力不要過大，以保證頸部較

7、短；第二步拉制尖端，一般要使溫度低些，拉力大些。一般都是通過顯微鏡查看電極尖端，這很簡(jiǎn)單，并不復(fù)雜！最好是拋光，這樣就在拋光儀顯微鏡下查看。注意拋光后的電極尖端開口會(huì)變小，故在拉制電極時(shí)，尖端開口要大些。檢查電極還有其它方法，如“氣泡數(shù)法”，也可用放大器通過測(cè)量電阻來查看。12.Rm＝4πr2Rin？似乎？似乎Rin是一個(gè)用細(xì)胞大小標(biāo)化的膜電阻，那為什么不用電是一個(gè)用細(xì)胞大小標(biāo)化的膜電阻，那為什么不用電容Cm來標(biāo)化而用這個(gè)什么來標(biāo)化而用

8、這個(gè)什么4πr2？細(xì)胞形狀各異，？細(xì)胞形狀各異，Cm是個(gè)公認(rèn)的膜面積的指是個(gè)公認(rèn)的膜面積的指標(biāo)，電流密度不就是用標(biāo)，電流密度不就是用Cm標(biāo)化的嗎？盼回答，同時(shí)希望能將標(biāo)化的嗎？盼回答，同時(shí)希望能將Rin的意義再多的意義再多講一點(diǎn)，謝謝講一點(diǎn)，謝謝答：（1）一定要注意不要拘泥于Rm和Rin這兩個(gè)符號(hào)，文獻(xiàn)中?；煊?，但實(shí)際上表示的大多是Rin。通常我們所說的“膜電阻”是指“膜輸入阻抗Rin”，但也有人用來指Rm。（2）你可以用Cm來計(jì)算膜面

9、積，實(shí)際上這也正是我們的做法，用來估算細(xì)胞大小，用于對(duì)通道電流幅度進(jìn)行標(biāo)化，但我們從來不用它計(jì)算膜電阻Rm（也稱為“固有膜電阻”）。Rm的計(jì)算公式是數(shù)學(xué)理論上的，并沒有多少應(yīng)用的價(jià)值，我們很少發(fā)現(xiàn)有使用Rm的（雖然符號(hào)用Rm）。（3）實(shí)際上，Rin反映的當(dāng)然就是膜電阻，它被稱為膜輸入阻抗（或膜輸入電阻），也時(shí)常被稱為“膜電阻”（這正是使人們產(chǎn)生混淆的原因?。?，是膜的被動(dòng)反應(yīng)參數(shù)之一。所謂被動(dòng)反應(yīng)是指膜上離子通道沒有開放時(shí)，膜所表現(xiàn)出的電

10、纜特性。膜的被動(dòng)反應(yīng)參數(shù)還包括膜電容、軸漿電阻等。全細(xì)胞記錄時(shí)，給細(xì)胞膜施加一系列刺激方波（多為超極化），在離子通道沒有開放的情況下測(cè)定跨膜電流，根據(jù)歐姆定律可求出Rin。當(dāng)大量離子通道開放時(shí)，膜對(duì)電流的阻力急劇降低，測(cè)試脈沖電壓與通道電流之間不滿足歐姆定律，無法測(cè)量Rin，也沒有了測(cè)量的意義。13.請(qǐng)教什么是請(qǐng)教什么是Channelavailability？答：Channelavailability指在排除失活情況下，能夠開放的某通道

11、的多少，通過全細(xì)胞電流幅度的大小來反映。例如，海馬神經(jīng)元Na通道的channelavailability可因乙酰膽堿M受體的激活而降低，表現(xiàn)為Na通道電流幅度的降低。14.什么是什么是windowcurrent，我知道是激活曲線和失活曲線的重疊。但是我有我知道是激活曲線和失活曲線的重疊。但是我有一個(gè)疑問，比如電壓依賴的一個(gè)疑問，比如電壓依賴的T型鈣通道，書上說在型鈣通道，書上說在windonwcurrent的時(shí)候有的時(shí)候有持續(xù)性的鈣內(nèi)流