重點分子

1、論述題論述題1.試述試述PCR技術(shù)的技術(shù)的原理、步驟及其應(yīng)用原理、步驟及其應(yīng)用(1)PCR技術(shù)實際上是在模板DNA，引物和4種脫氧核糖核苷三磷酸存在的條件下依賴于耐熱DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)。其原理主要有幾個方面1)DNA合成需要引物，兩條互補鏈上都需要引物；2)DNA的復(fù)性與變性的原理；3)PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板DNA結(jié)合的特異性。4)耐高溫的DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)和運用。(2)PCR全過程包括三個基本步驟，即1)雙鏈DNA

2、模板加熱變性成單鏈（變性）；2)在低溫下引物與單鏈DNA互補配對（退火）；3)在適宜溫度下TaqDNA聚合酶催化引物3’OH端加入脫氧核苷酸（延伸）。這三個基本步驟構(gòu)成的循環(huán)重復(fù)進(jìn)行，可以使特異性DNA的擴增率達(dá)到數(shù)百萬倍。(3)PCR技術(shù)的應(yīng)用1)分子生物學(xué)領(lǐng)域基因克??；DNA序列測定；突變分析；基因重組；基因定量；鑒定轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列；轉(zhuǎn)座子插入位點的確定；檢測基因的修飾；2)臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域病原體診斷；遺傳病的基因診斷；器官移植；腫瘤診斷

3、；法醫(yī)學(xué)；3)動植物學(xué)的研究；4)其他領(lǐng)域如組織和群體生物學(xué)、古生物學(xué)等。2試述基因診斷的特點及基本技術(shù)。試述基因診斷的特點及基本技術(shù)。(1)基因診斷的特點為特異性高；靈敏度高；穩(wěn)定性高；診斷范圍廣，適用性強；臨床應(yīng)用前景好。(2)常用技術(shù)包括1)核酸分子雜交技術(shù)，其方法主要有斑點印跡、Southern印跡、Nthern印跡、原位雜交、等位基因特異寡核苷酸探針雜交；2)限制性內(nèi)切酶酶譜分析法；3)DNA限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分

4、析；4)PCR技術(shù)；5)DNA芯片；6)基因測序。3..舉例說明原癌基因和抑癌基因是如何調(diào)控細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的。舉例說明原癌基因和抑癌基因是如何調(diào)控細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的。(1)原癌基因的編碼產(chǎn)物是生長因子、生長因子受體、胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子、轉(zhuǎn)錄因子、cyclin及CDK等。(2)正常情況下，原癌基因的編碼產(chǎn)物為細(xì)胞生長所必需。如ras編碼Ras蛋白，是一種小G蛋白，參與細(xì)胞內(nèi)生長信號的傳導(dǎo)，從而促進(jìn)細(xì)胞的生長。(3)特定條件下，原癌基因

5、通過點突變、DNA重排、基因擴增、染色體易位、病毒啟動子及增強子的插入等機制活化，過度轉(zhuǎn)導(dǎo)生長信號，導(dǎo)致細(xì)胞惡性增殖。(4)抑癌基因的編碼產(chǎn)物起著抑制細(xì)胞增殖信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、負(fù)性調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的作用，從而抑制細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。如p53蛋白可以抑制細(xì)胞的生長，同時它也可以促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。(5)細(xì)胞增殖與凋亡是癌基因和抑癌基因的相互作用的結(jié)果。正常細(xì)胞向惡性細(xì)胞轉(zhuǎn)化涉及原癌基因活化、抑癌基因失活等因素的綜合作用。(6)癌基因和抑癌基因在某些條

6、件下可以相互轉(zhuǎn)變，如野生型的p53基因?qū)儆谝职┗颍蛔兊膒53基因卻發(fā)揮癌基因的作用。4試述原核生物和真核生物基因表達(dá)調(diào)控特點的異同。試述原核生物和真核生物基因表達(dá)調(diào)控特點的異同。(1)相同點轉(zhuǎn)錄起始是基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。(2)不同點1)原核基因表達(dá)調(diào)控主要包括轉(zhuǎn)錄和翻譯水平；真核基因表達(dá)調(diào)控包括染色質(zhì)活化、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后加工、翻譯、翻譯后加工多個層次。2)原核基因表達(dá)調(diào)控主要為負(fù)調(diào)節(jié)；真核基因表達(dá)調(diào)控主要為正調(diào)節(jié)。3)原核轉(zhuǎn)錄起

7、始不需要轉(zhuǎn)錄因子，RNA聚合酶直接結(jié)合啟動子，由σ因子決定基因表達(dá)的特異性；真核轉(zhuǎn)錄起始需要基礎(chǔ)、特異兩類轉(zhuǎn)錄因子，依賴DNA－蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用，調(diào)控轉(zhuǎn)錄激活。4)原核基因表達(dá)調(diào)控主要采用操縱子模型，轉(zhuǎn)錄出多順反子RNA，實現(xiàn)協(xié)調(diào)調(diào)節(jié)；真核基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順反子RNA，功能相關(guān)蛋白質(zhì)的協(xié)調(diào)表達(dá)機制更為復(fù)雜簡答題簡答題1請簡述基因診斷的基本流程。請簡述基因診斷的基本流程。基因診斷的基本流程包括(1)樣品的核酸抽提。(2)目的

8、序列的擴增。(3)核酸分子雜交。(4)信號檢測。進(jìn)細(xì)胞凋亡。13.簡述血管生成的主要過程和主要分子簡述血管生成的主要過程和主要分子血管生成的主要過程和主要分子如下所述(1)血管基底膜降解，由VEGF等促血管生成因子上調(diào)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌PA系統(tǒng)及MMPs系統(tǒng)的成員完成。(2)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移并且分裂增殖，構(gòu)成原始血管。主要由VEGF和促血管生成素Ang2和Ang1及其受體介導(dǎo)的信號途徑調(diào)節(jié)。血管內(nèi)皮細(xì)胞表面粘附分子也參與這一過程。(3)足

9、夠的、有功能的新血管形成后，促血管生成因子表達(dá)下調(diào)，血管生成抑制物增加，血管內(nèi)皮細(xì)胞恢復(fù)到靜息狀態(tài)，新血管穩(wěn)定。14.簡述簡述Rb的作用機制的作用機制(1)Rb基因是發(fā)現(xiàn)的第一個抑癌基因，編碼產(chǎn)物定位于細(xì)胞核，含有病毒蛋白和細(xì)胞蛋白的結(jié)合位點及磷酸化位點。(2)低磷酸化的pRb結(jié)合并滅活E2F1，細(xì)胞不能通過G1S檢驗點。(3)高磷酸化的pRb不結(jié)合E2F1，相關(guān)基因表達(dá)，細(xì)胞進(jìn)入S期。(4)CyclinD1CDK4復(fù)合體使pRb磷酸化

10、程度增加。15.簡述順式作用元件與反式作用因子對基因表達(dá)調(diào)控的影響。簡述順式作用元件與反式作用因子對基因表達(dá)調(diào)控的影響。(1)真核基因的轉(zhuǎn)錄激活受順式作用元件和反式作用因子相互作用的調(diào)節(jié)。(2)順式作用元件是指起轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的DNA序列，包括啟動子、增強子、沉默子等。(3)反式作用因子是指起轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的蛋白質(zhì)，又稱為轉(zhuǎn)錄因子，包括基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄因子和特異轉(zhuǎn)錄因子。(4)順式作用元件與反式作用因子之間的作用形式包括DNA－蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)－蛋白

11、質(zhì)相互作用。(5)DNA－蛋白質(zhì)相互作用體現(xiàn)在：啟動子核心序列與基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，是RNA聚合酶結(jié)合所必需的；轉(zhuǎn)錄非核心序列與特異轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合，調(diào)控基因的特異性表達(dá)。(6)蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用體現(xiàn)在：轉(zhuǎn)錄因子之間排列組合產(chǎn)生協(xié)同、競爭或者拮抗，決定基因轉(zhuǎn)錄的特異性。16說明真核轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控的復(fù)雜性。說明真核轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控的復(fù)雜性。(1)轉(zhuǎn)錄起始是真核基因表達(dá)調(diào)控的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，多種因素影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成，如順式作用元件（起轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用

12、的DNA序列）、轉(zhuǎn)錄因子（起轉(zhuǎn)錄調(diào)控作用的蛋白質(zhì)）等。(2)真核基因的轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控具有復(fù)雜性，主要體現(xiàn)在順式作用元件與轉(zhuǎn)錄因子相互作用的復(fù)雜性，包括DNA－蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)兩種作用形式。(3)DNA－蛋白質(zhì)相互作用的復(fù)雜性：順式作用元件的不同排列組合可以產(chǎn)生多種類型的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)方式；多種轉(zhuǎn)錄因子可結(jié)合相同或者不同的順式作用元件。(4)蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)相互作用的復(fù)雜性：不同細(xì)胞內(nèi)存在的轉(zhuǎn)錄因子種類和濃度不同，存在不同的排列組合方式，產(chǎn)生

13、協(xié)同、競爭或者拮抗效應(yīng)，精確調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄激活。17簡述乳糖操縱子的正負(fù)調(diào)控機制。簡述乳糖操縱子的正負(fù)調(diào)控機制。(1)乳糖操縱子包含3個結(jié)構(gòu)基因（編碼β－半乳糖苷酶、β－半乳糖苷通透酶和轉(zhuǎn)乙酰基酶）、3個調(diào)控元件（啟動子、操縱基因和CAP結(jié)合位點）和1個調(diào)節(jié)基因（編碼阻遏蛋白）。(2)阻遏蛋白的負(fù)調(diào)控：無乳糖時，阻遏蛋白結(jié)合操縱基因，妨礙RNA聚合酶結(jié)合啟動子，抑制結(jié)構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄。有乳糖時，生成別位乳糖（誘導(dǎo)劑）結(jié)合阻遏蛋白，不能封閉操縱基因，