高效液相色譜法測定化學合成生物多肽的心得

1、多肽類化合物廣泛存在于自然界中，其中對具有一定生物活性的多肽的研究，一直是藥物開發(fā)的一個主要方向。80年代中期至今多肽化學合成技術(shù)有很大發(fā)展，合成的成品一般是以目標多肽為主的幾種結(jié)構(gòu)相似多肽的混合物，對多肽混合物的分離分析及純度鑒定一直是一個重要問題。本文主要介紹本人在分析多肽類化合物過程中的一些心得和經(jīng)驗.首先，在色譜柱選擇方面，因為多肽的分子量較大（一般在幾千到幾萬），分子量在10000左右的，常用的C18柱分離效果不太好，要選用碳

2、鏈比較短的色譜柱，如：C8或者C4；填料孔徑不能選普通的100埃，要選孔徑比較大的如300埃等。分子量在幾萬或者幾十萬的，可以選體積排阻色譜，用凝膠色譜柱。其次，在用反相色譜柱時，因為多肽是由氨基酸組成的，流動相選擇一般用含0.1%的三氟乙酸水和含0.1%的三氟乙酸乙腈的梯度洗脫。但因為多肽類化合物的紫外吸收較弱，檢測波長一般選在200~210nm左右，所以空白梯度的基線會往上漂移很多，特別是樣品濃度比較小的時候，分析誤差較大?？紤]乙腈

3、的本底吸收比水大，在梯度洗脫過程中，隨著乙腈比例的增大，基線會向上漂。因此把乙腈中的三氟乙酸濃度降為0.05%~0.07%（可以隨梯度不同選不同濃度），通過兩者紫外吸收的抵消，基線變得平穩(wěn)很多，同時能增加檢測的靈敏度，使分析更靈敏、更準確。第三，合成的多肽中的雜質(zhì)一般與產(chǎn)物結(jié)構(gòu)相似，極性相差無幾，分離難度較大，在選擇洗脫梯度時要細心一點，多做一些試驗，最好要做主峰的純度掃描，盡量把雜質(zhì)完全分開，對于難分離的多肽，可以選長一點的色譜柱或者