植物組織切片制作以及注意事項(xiàng)

1、植物組織石蠟切片的制作以及注意事項(xiàng)植物組織石蠟切片的制作以及注意事項(xiàng)1植物組織石蠟切片的制作方法植物組織石蠟切片的制作方法⑴固定：用50%或70%FAA固定液（50%或70%酒精：甲醛：冰乙酸=16:1:1幼嫩材料用50%FAA；老的材料用70%的FAA），置于4℃固定24h。⑵脫水：將固定液倒去，加入50%乙醇，室溫靜置30min；重復(fù)一次，室溫靜置20min。換成1%番紅O溶液(用70%酒精配制)，室溫脫水染色過(guò)夜。次日繼續(xù)脫水，酒

2、精濃度梯度和時(shí)間依次為：80%乙醇1h、95%乙醇1h、無(wú)水乙醇1h、40min（2次）。⑶透明：12無(wú)水乙醇二甲苯混合液1h，純二甲苯1h、40min（2次）。最后加入少量二甲苯（浸沒(méi)材料即可）和碎蠟，放入38℃溫箱中過(guò)夜。⑷浸蠟：將溫箱溫度調(diào)至56℃，計(jì)時(shí)1h；換成二級(jí)蠟1h；三級(jí)蠟（3次）各1h、1h、40min（從溫度上升到56℃開(kāi)始計(jì)時(shí)）。⑸包埋：將帶有材料的液體蠟倒入疊好的紙槽中，迅速放入冰水中使蠟?zāi)蹋乐箽馀莓a(chǎn)生，以及凝

3、蠟不勻。⑹切片：修整蠟塊，用LicaRM2126切片機(jī)切片，厚度510μm。⑺貼片:在載玻片上涂少許粘片劑，將切好的蠟帶放入溫水中，撈至載玻片上，最后置于37℃恒溫箱過(guò)夜烤片。⑻脫蠟及染色：①番紅固綠對(duì)染ⅰ脫蠟：二甲苯60min，二甲苯5min、12無(wú)水乙醇12二甲苯混合液5min、無(wú)水乙醇5min、無(wú)水乙醇5min、95%乙醇5min、80%乙醇5min、1%番紅室溫過(guò)夜。ⅱ染色：80%乙醇5min，1%固綠（用95%酒精配制）迅速蘸

4、一下，大約10s，直接放到95%乙醇5min、無(wú)水乙醇5min、無(wú)水乙醇5min、12無(wú)水乙醇12二甲苯混合液5min、二甲苯5min（2次）。假如擔(dān)心，最好底下放一個(gè)培養(yǎng)皿接著，如有倒出，則流在皿里面，容易觀察到，可以重新放在瓶中。如果不能順利的將瓶子里的脫水酒精倒干凈，則建議找一個(gè)橡膠洗頭，套上1ml槍頭，將里面的液體全部吸出。這樣也避免用槍吸，有機(jī)溶劑腐蝕槍而使得槍受到破壞。當(dāng)重新?lián)Q完下一梯度的脫水酒精時(shí)，一定要檢查是否有組織粘在

5、瓶壁上，而沒(méi)有浸泡在脫水液體里，使得脫水不干凈。當(dāng)脫水至純酒精和二甲苯時(shí)，一定不能讓組織在就酒精中停留的時(shí)間太長(zhǎng)，時(shí)間一長(zhǎng)容易使得組織變硬變脆，此時(shí)以及以后的操作的步驟中，動(dòng)作一定要輕緩，任何操作儀器一定不能碰到組織。第2次二甲苯透明結(jié)束時(shí)，倒掉瓶中的大部分二甲苯，留底部的液體在。然后給瓶子倒入事先準(zhǔn)備好的碎末固體蠟，在試驗(yàn)臺(tái)蹦實(shí)，使得組織完全包埋在碎蠟里。放在37度恒溫箱過(guò)夜。這樣做的目的是因?yàn)橹参锝M織有細(xì)胞壁，石蠟不容易浸入組織，因

6、此需要足夠長(zhǎng)時(shí)間的浸蠟。（3）浸蠟次日將恒溫箱調(diào)至56度后開(kāi)始計(jì)時(shí)，浸蠟。1h后倒掉瓶里的石蠟，換上新鮮的純石蠟，必須要過(guò)濾，并且溫度不能太高或者太低。換下的蠟里由于含有事先殘留瓶中的二甲苯，必須將其中的二甲苯揮發(fā)掉，才能使用，因?yàn)槭灷锛偃绾卸妆降脑?，?huì)使得石蠟?zāi)毯笞冘?。一旦包埋了組織，切片是由于蠟軟不易切片。消除石蠟里二甲苯的方法時(shí)，將蠟在電爐上煮，二甲苯將變成氣泡，而揮發(fā)掉，直到液體石蠟不再產(chǎn)生氣泡。還有一點(diǎn)值得提出的是，新