一步脫蠟法在ffpe樣本dna提取中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)

1、一步脫蠟法在一步脫蠟法在FFPE樣本樣本DNA提取中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)提取中的應(yīng)用優(yōu)勢(shì)什么是什么是FFPE福爾馬林固定石蠟包埋技術(shù)（FmalinFixedParrffinEmbeddedFFPE）是一種組織保存技術(shù)。這種技術(shù)為了維持細(xì)胞核蛋白結(jié)構(gòu)，先用福爾馬林固定然后將組織用固體石蠟包埋，以供切片后作組織學(xué)診斷或研究使用。FFPE技術(shù)的應(yīng)用技術(shù)的應(yīng)用福爾馬林由于可以與蛋白氨基發(fā)生不可逆交聯(lián)，所以對(duì)保持組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)的完整性、抗原可測(cè)定性、組織滲透

2、性方面均優(yōu)于其他固定液。因此，F(xiàn)FPE技術(shù)長(zhǎng)期以來在臨床檢驗(yàn)、醫(yī)學(xué)科學(xué)研究中得到廣泛應(yīng)用，尤其是細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究和腫瘤病理學(xué)研究。隨著這幾年分子診斷領(lǐng)域的不斷發(fā)展，F(xiàn)FPE技術(shù)也越來越多的被應(yīng)用在對(duì)腫瘤疾病進(jìn)行分子診斷。為什么要脫蠟為什么要脫蠟如果要對(duì)FFPE組織進(jìn)行分子生物學(xué)研究，最首先的就是要進(jìn)行DNA的提取。但是固定劑的交聯(lián)作用對(duì)核酸是有害的，福爾馬林石蠟和交聯(lián)作用會(huì)妨礙核酸的提取，抑制DNA聚合酶的活性從而影響PCR擴(kuò)增。除此之外

3、，石蠟阻礙消化液對(duì)組織的滲透，從而抑制蛋白酶K和組織內(nèi)蛋白的接觸，影響組織消化和DNA釋放。所以為了消除石蠟對(duì)DNA提取和PCR擴(kuò)增的不良影響，必須在保證不增加外源性PCR抑制因子，并盡量減少DNA額外損傷的前提下對(duì)組織進(jìn)行徹底脫蠟。常用的二甲苯法脫蠟法的過程和問題常用的二甲苯法脫蠟法的過程和問題目前應(yīng)用在成熟試劑盒中的脫蠟方法主要是有機(jī)溶劑脫蠟法，其中二甲苯脫蠟法由于其脫蠟徹底的特性，被最廣泛的應(yīng)用在腫瘤研究中。在二甲苯脫蠟法中，需要

4、將石蠟包埋組織浸泡在二甲苯溶液中進(jìn)行脫蠟，后面經(jīng)過兩次高溫處理，每次各一個(gè)小時(shí)，分別在56℃和90℃。在此期間結(jié)合消化緩沖液和蛋白酶K來消化組織，同時(shí)利用梯度乙醇來疏松組織結(jié)構(gòu)、促進(jìn)消化液滲入并去除組織中痕量的二甲苯和甲醛。個(gè)方面：表1傳統(tǒng)二甲苯脫蠟法與一步脫蠟法的區(qū)別傳統(tǒng)二甲苯脫蠟法與一步脫蠟法的區(qū)別項(xiàng)目傳統(tǒng)二甲苯脫蠟法一步法脫蠟法石蠟溶解液類型有毒物質(zhì)二甲苯使用無毒溶解液分離方式需要離心機(jī)離心去除上清液油水分層，無需額外操作脫蠟裂解

5、連接方式脫蠟風(fēng)干加入裂解液裂解組織脫蠟和裂解同步加熱進(jìn)行，節(jié)省步驟自動(dòng)化兼容性無法兼容自動(dòng)化由于其一步法的特性，無需額外手動(dòng)操作，非常適合整合到自動(dòng)化儀器耗費(fèi)時(shí)間3小時(shí)2小時(shí)在DNA的提取效果上，下面的實(shí)驗(yàn)對(duì)比了傳統(tǒng)脫蠟法和一步脫蠟法對(duì)于大型、中型、和小型樣本的提取得率。大型樣本大型樣本：切片后面積介于2.54mm2、厚度介于520um、體積介于0.01250.08mm3之間的樣本。中型樣本中型樣本：切片后面積介于1.52.5mm2、厚

6、度介于520um、體積介于0.00750.05mm3之間的樣本。小型樣本小型樣本：切片后面積介于0.21.5mm2、厚度介于520um、體積介于0.0010.03mm3之間的樣本。圖3傳統(tǒng)脫蠟法與一步脫蠟法在提取得率上的區(qū)別傳統(tǒng)脫蠟法與一步脫蠟法在提取得率上的區(qū)別結(jié)果表明，在大量樣本時(shí)，兩種方法提取得率相當(dāng)；中量和小量樣本時(shí)，一步脫蠟法的得率均大于傳統(tǒng)脫蠟法。所以一步脫蠟法不僅簡(jiǎn)化了操作、降低了風(fēng)險(xiǎn)，而且提高了提取效率。一步脫蠟法如何整