分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)-感受態(tài)的制備和轉(zhuǎn)化

1、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)三感受感受態(tài)的制的制備及轉(zhuǎn)化一、一、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康哪康?了解了解質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化原理化原理2熟悉感受熟悉感受態(tài)細(xì)態(tài)細(xì)菌的制菌的制備和轉(zhuǎn)化步化步驟二、二、實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)原理原理1感受感受態(tài)細(xì)態(tài)細(xì)胞與胞與轉(zhuǎn)化感受感受態(tài)指受體（或者宿主）最易接受外源指受體（或者宿主）最易接受外源DNA片段并片段并實(shí)現(xiàn)實(shí)現(xiàn)其轉(zhuǎn)化的一種生理狀化的一種生理狀態(tài)，它是由受體菌的，它是由受體菌的遺傳遺傳性狀所決定的，同性狀所決定的，同時(shí)也受菌也受菌齡、外界、外界環(huán)境因子

2、的影響。境因子的影響。cAMP可以使感受可以使感受態(tài)水平提高一萬倍，而水平提高一萬倍，而Ca2也可大大促也可大大促進(jìn)轉(zhuǎn)進(jìn)轉(zhuǎn)化的作用?；淖饔?。細(xì)胞的感受胞的感受態(tài)一般出一般出現(xiàn)在對(duì)數(shù)生數(shù)生長期，期，新鮮幼嫩的幼嫩的細(xì)胞是制胞是制備感受感受態(tài)細(xì)態(tài)細(xì)胞和胞和進(jìn)行成功行成功轉(zhuǎn)化的關(guān)化的關(guān)鍵。制。制備出的出的感受感受態(tài)細(xì)態(tài)細(xì)胞暫時(shí)暫時(shí)不用不用時(shí)，可加入占，可加入占總體積15%的無菌甘油或的無菌甘油或70℃保存（有效期存（有效期6個(gè)月）。個(gè)月）。

3、轉(zhuǎn)化特指將化特指將質(zhì)粒DNA或以其或以其為載為載體構(gòu)建的重體構(gòu)建的重組DNA導(dǎo)入細(xì)菌體內(nèi)，使之體內(nèi)，使之獲得新的得新的遺傳遺傳特性的一種方法。受體特性的一種方法。受體細(xì)胞經(jīng)過經(jīng)過一些特殊方一些特殊方法（如：法（如：電擊電擊法，法，CaCl2等化學(xué)等化學(xué)試劑試劑法）法）處理后，使理后，使細(xì)胞膜的通透性胞膜的通透性發(fā)生變化，成化，成為能容能容許外源外源DNA分子通分子通過的感受的感受態(tài)細(xì)態(tài)細(xì)胞。胞。進(jìn)入細(xì)胞的胞的DNA分子通分子通過復(fù)制、表

4、達(dá)復(fù)制、表達(dá)實(shí)現(xiàn)遺傳實(shí)現(xiàn)遺傳信息的信息的轉(zhuǎn)移，使受體移，使受體細(xì)胞出胞出現(xiàn)新的遺傳遺傳性狀。性狀。大腸桿菌的桿菌的轉(zhuǎn)化常用化學(xué)法（化常用化學(xué)法（CaCl2法），法），該法最先是由法最先是由Cohen于1972年發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)的。其原理是的。其原理是細(xì)菌處于0℃，CaCl2的低滲溶液中，菌的低滲溶液中，菌細(xì)胞中，是外源性中，是外源性DNA的插入位點(diǎn)。的插入位點(diǎn)。雖然使用然使用藍(lán)白篩選篩選的工程菌因的工程菌因?yàn)槿笔Я巳笔Я薔端得端得146個(gè)氨基酸