鄰二氯苯優(yōu)勢(shì)降解菌的分離鑒定及降解特性研究.pdf

1、近年來,微生物降解環(huán)境污染物已成為最有前景的治理環(huán)境污染的方法,微生物法處理污染物具有成本低、效果好、無二次污染,且操作簡(jiǎn)單,能夠?qū)崿F(xiàn)真正意義上的再循環(huán),越來越被人們關(guān)注。因此,從環(huán)境中篩選高效的降解菌,研究其降解特性及其相關(guān)的酶,并且應(yīng)用到環(huán)境中去,具有重要的理論和實(shí)際意義。
　　 本文以培養(yǎng)高效優(yōu)勢(shì)降解菌為主要研究?jī)?nèi)容,采用逐步提高鄰二氯苯濃度的方法馴化菌株,使菌株對(duì)鄰二氯苯的降解能力從40 mg/L提高到200 mg/L,

2、從模擬人工濕地盆栽蘆葦根際土壤中篩選分離到三株鄰二氯苯高效降解菌,命名為DXL-1、DXL-2、DXL-3。選擇對(duì)降解鄰二氯苯降解性能最好的菌株DXL-1進(jìn)行研究,對(duì)其進(jìn)行了菌種的形態(tài)特征和生理生化鑒定、生長(zhǎng)曲線測(cè)定、抗性及最佳降解條件測(cè)定,同時(shí)對(duì)菌株DXL-1降解鄰二氯苯降解粗酶性質(zhì)進(jìn)行初步研究。
　　 試驗(yàn)表明,菌株DXL-1在無機(jī)鹽培養(yǎng)基上能夠以鄰二氯苯為唯一碳源進(jìn)行生長(zhǎng),其耐受鄰二氯苯最高濃度為200 mg/L。運(yùn)用掃描

3、電鏡、生理生化檢測(cè)及16S rDNA序列分析,鑒定該菌株為交替單胞菌(Alishewanella aestuarii),該菌株菌落呈乳白色,表面光滑；光學(xué)顯微鏡觀察菌體呈桿狀,周生鞭毛；革蘭氏染色陽性；接觸酶陽性,為兼性厭氧菌。其對(duì)鏈霉素不敏感,具有抗性,而對(duì)實(shí)驗(yàn)中所選用的其他抗生素都比較敏感,不具有抗性。
　　 通過測(cè)定各因素包括不同碳源、不通氮源、溫度、pH值、裝液量對(duì)降解菌生長(zhǎng)的影響,了解菌株的生物學(xué)特征。研究表明,菌株D

4、XL-1的最適碳源為葡萄糖,最適氮源為酵母膏,利用有機(jī)氮明顯優(yōu)于無機(jī)氮。菌株在25℃～35℃,pH7.0～7.5條件下都能較好的生長(zhǎng)。影響鄰二氯苯降解率的因素主要有溫度、pH值、鄰二氯苯初始濃度、接種量。通過對(duì)單因素分析降解率的影響試驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)的方法對(duì)降解條件進(jìn)行優(yōu)化,菌株DXL-1降解鄰二氯苯的最佳條件為:鄰二氯苯初始質(zhì)量濃度為120 mg/L,溫度為32℃,pH值為7.0,接種量為10％。培養(yǎng)4 d后,菌株DXL-1降解鄰二氯苯的

5、降解率達(dá)到85.52％。
　　 對(duì)菌株DXL-1粗酶液的性質(zhì)進(jìn)行初步研究表明,菌株DXL-1是通過鄰苯二酚1,2-雙加氧酶催化開環(huán)途徑降解鄰二氯苯。鄰苯二酚1,2-雙加氧酶的最適反應(yīng)溫度為30℃,最適pH值為8.0。該酶在pH7.0～8.5的范圍內(nèi)比較穩(wěn)定,能保持一定的活力；隨著溫度的升高,降解酶活力逐漸降低,該酶對(duì)高溫敏感。重金屬離子的存在對(duì)酶活性有不同程度的影響,Fe3+、Ba2+、Mn2+等對(duì)酶活有促進(jìn)作用,Cu2+、Zn