毒死蜱降解菌的分離、鑒定及其降解特性.pdf

1、有機(jī)磷農(nóng)藥是目前世界上使用量最大的殺蟲(chóng)劑之一,其在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的廣泛應(yīng)用在提高作物產(chǎn)量的同時(shí)也給環(huán)境帶來(lái)了嚴(yán)重的污染,已對(duì)人類(lèi)健康構(gòu)成威脅。國(guó)內(nèi)外在毒死蜱農(nóng)藥的微生物降解方面進(jìn)行了一系列研究,主要集中在菌株的分離、鑒定和降解性能研究方面,部分菌株降解效率較低,還需繼續(xù)擴(kuò)大降解菌菌種資源,篩選出高效的降解菌株。
　　 本研究采用富集馴化方法分離到三株毒死蜱降解菌,它們能夠利用毒死蜱作為唯一碳源進(jìn)行生物降解；優(yōu)化了毒死蜱降解菌的生長(zhǎng)條

2、件,檢測(cè)了其降解能力和毒死蜱代謝產(chǎn)物,并對(duì)菌株內(nèi)的毒死蜱降解基因進(jìn)行了定位和克隆。主要研究?jī)?nèi)容如下:
　　 1從農(nóng)藥廠污水曝氣池的活性污泥中,篩選到三株能夠降解毒死蜱的細(xì)菌,分別命名為:CP1、CP6和CP7。通過(guò)形態(tài)學(xué)觀察、16S rDNA序列分析等方法,菌株CP1鑒定為人蒼白桿菌(Ochrobactrum anthropi)。菌CP6為假單胞菌屬(Pseudomonas sp.),菌株CP7為伯克霍爾德氏菌屬(Burkhol

3、deria sp.)。其16SrDNA基因序列在GenBank中的序列號(hào)分別為:HQ589348、JF280144和JF280145。
　　 2選擇了其中降解能力最好的一株菌CP1,利用正交實(shí)驗(yàn)和Box-Behnken響應(yīng)面法對(duì)影響CP1菌株降解毒死蜱的主要因素進(jìn)行優(yōu)化分析,得到菌株CP1對(duì)毒死蜱的最適降解條件為:農(nóng)藥濃度100 mg／L,pn值為7.0,溫度為28.5℃。優(yōu)化后,CP1對(duì)毒死蜱的降解率由最初的70.26％提高到

4、75.18％。毒死蜱降解優(yōu)化試驗(yàn)提高了CP1菌株對(duì)毒死蜱的生物降解性能。
　　 3運(yùn)用色譜法和質(zhì)譜法檢測(cè)了菌株CP1降解毒死蜱的代謝產(chǎn)物,結(jié)果發(fā)現(xiàn),菌株CP1對(duì)毒死蜱的代謝產(chǎn)物不同于通常的三氯吡啶酚,而是一種新的物質(zhì),推測(cè)該物質(zhì)是由毒死蜱結(jié)構(gòu)中P-S的斷裂而產(chǎn)生。這說(shuō)明,CP1菌株中含有的毒死蜱降解酶不同于已知的有機(jī)磷降解酶,從而可以推測(cè)菌株CP1中含有特異性的毒死蜱降解基因。
　　 4用質(zhì)粒擴(kuò)增的方式檢測(cè)野生型CP1菌