阿特拉津?qū)Ψ侵拮负椭腥A大蟾蜍發(fā)育毒性作用的研究.pdf

1、目的：
　　 本文以?xún)蓷?lèi)動(dòng)物非洲爪蟾、中華大蟾蜍為模型動(dòng)物,暴露不同濃度的阿特拉津,在其變態(tài)發(fā)育的不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣,分析和探討阿特拉津?qū)蓷?lèi)生存和性腺發(fā)育的毒性。運(yùn)用Real time RT-PCR,對(duì)性別分化和性腺發(fā)育相關(guān)基因進(jìn)行篩選和驗(yàn)證,闡明阿特拉津?qū)蓷?lèi)發(fā)育毒性作用的分子機(jī)制。
　　 方法：
　　 以非洲爪蟾、中華大蟾蜍為模型動(dòng)物,進(jìn)行暴露分組實(shí)驗(yàn)。設(shè)定0.05％DMSO陰性對(duì)照組、雌二醇(E2)

2、陽(yáng)性對(duì)照組,阿特拉津?qū)嶒?yàn)組設(shè)0.1、1、10、100μg/L四個(gè)濃度。在非洲爪蟾、中華大蟾蜍性別分化和性腺發(fā)育關(guān)鍵時(shí)期進(jìn)行取樣,一部分性腺進(jìn)行組織病理學(xué)檢測(cè),觀察阿特拉津?qū)煞N動(dòng)物性腺的發(fā)育毒性,包括形態(tài)發(fā)育、性腺組織中卵母細(xì)胞、卵泡、精母細(xì)胞、精子細(xì)胞和輸精導(dǎo)管等各類(lèi)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的毒性作用。另一部分性腺和肝臟快速置于液氮中,運(yùn)用Real timeRT-PCR,對(duì)性別分化和性腺發(fā)育相關(guān)基因進(jìn)行篩選和驗(yàn)證,闡明阿特拉津?qū)蓷?lèi)發(fā)育毒性作用

3、的分子機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1.阿特拉津?qū)Ψ侵拮干L(zhǎng)發(fā)育和性腺發(fā)育的影響
　　 阿特拉津?qū)Ψ侵拮傅囊话闵L(zhǎng)情況無(wú)顯著性影響。阿特拉津引起非洲爪蟾肝臟系數(shù)的相對(duì)升高0.1、100μg/L阿特拉津暴露組中,幼蛙的脂肪體出現(xiàn)黃色小斑點(diǎn)、體積小、粘連甚至退化的現(xiàn)象,一定程度上延緩了性腺發(fā)育O.1和100μg/L暴露組蝌蚪完成變態(tài)所用時(shí)間長(zhǎng)于對(duì)照組,同時(shí)長(zhǎng)于1、10μg/L暴露組,變態(tài)完成時(shí)間呈現(xiàn)“U”字型,阿特

4、拉津在一定程度上抑制了蝌蚪的變態(tài)。阿特拉津并沒(méi)有引起非洲爪蟾性別比的明顯變化。1μg/L阿特拉津暴露組中雄性性腺出現(xiàn)異常節(jié)段。
　　 2.阿拉津?qū)Ψ侵拮感韵賰?nèi)基因表達(dá)變化和肝臟內(nèi)卵黃蛋白原表達(dá)變化的影響
　　 非洲爪蟾性腺發(fā)育相關(guān)基因ER、ARO,暴露組與對(duì)照組相比差異不顯著；雄性肝臟VTG均有微量表達(dá),但各組之間并無(wú)顯著性差異。
　　 3.阿特拉津?qū)χ腥A大蟾蜍生長(zhǎng)發(fā)育和性腺發(fā)育的影響
　　 阿特拉津中

5、華大蟾蜍的一般生長(zhǎng)情況無(wú)顯著性影響。100μg/L暴露組死亡率與對(duì)照組有顯著性差異(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),阿特拉津暴露組中仍有未完成變態(tài)的蝌蚪,實(shí)驗(yàn)組按濃度梯度由小到大,未完成變態(tài)的個(gè)數(shù)分別為2只,2只,3只,2只,E2同樣剩余2只,表明阿特拉津在一定程度上延長(zhǎng)了蝌蚪變態(tài)時(shí)間,抑制了其變態(tài)發(fā)育；阿特拉津沒(méi)有引起中華大蟾蜍性別比和性腺形態(tài)的變化。
　　 4.阿特拉津?qū)煞N動(dòng)物模型性腺組織學(xué)的影響
　　 阿特拉津?qū)е虏G

6、丸組織結(jié)構(gòu)變得疏松,組織內(nèi)出現(xiàn)類(lèi)似于卵巢組織的空隙；睪丸發(fā)育遲緩,組織內(nèi)充滿(mǎn)初級(jí)精原細(xì)胞和次級(jí)精原細(xì)胞,缺少精子；睪丸組織內(nèi)生殖細(xì)胞數(shù)量明顯減少,甚至出現(xiàn)萎縮,引起雄性性腺組織學(xué)發(fā)生雌性化改變和退行性變化。
　　 結(jié)論：
　　 1.阿特拉津?qū)Ψ侵拮傅囊话闵L(zhǎng)情況無(wú)顯著性影響；阿特拉津在一定程度上抑制了非洲爪蟾蝌蚪的變態(tài)；幼蛙脂肪體出現(xiàn)病變,影響了性腺發(fā)育；性別比沒(méi)有變化；雄性性腺出現(xiàn)異常節(jié)段。
　　 2.阿特拉

7、津?qū)Ψ侵拮感韵侔l(fā)育相關(guān)基因和肝臟卵黃蛋白原基因表達(dá)水平無(wú)顯著性影響。
　　 3.阿特拉津?qū)χ腥A大蟾蜍的一般生長(zhǎng)情況無(wú)顯著性影響；高劑量阿特拉津?qū)е轮腥A大蟾蜍蝌蚪出現(xiàn)較高的死亡；阿特拉津?qū)е虏糠烛蝌轿赐瓿勺儜B(tài),在一定程度上抑制了蝌蚪的變態(tài)；性別比沒(méi)有變化,沒(méi)有引起性腺形態(tài)的變化。
　　 4.阿特拉津?qū)煞N動(dòng)物模型性腺組織學(xué)影響主要表現(xiàn)為:睪丸組織結(jié)構(gòu)變疏松,組織出現(xiàn)類(lèi)似于卵巢組織的空隙；睪丸發(fā)育遲緩,組織內(nèi)充滿(mǎn)初級(jí)精原細(xì)