分子生物學練習題及答案

1、1分子生物學試題一、名詞解釋一、名詞解釋1cDNAcDNA與cccDNAcccDNA：cDNA是由mRNA通過反轉錄酶合成的雙鏈DNA；cccDNA是游離于染色體之外的質粒雙鏈閉合環(huán)形DNA。2標準折疊單位標準折疊單位：蛋白質二級結構單元α－螺旋與β－折疊通過各種連接多肽可以組成特殊幾何排列的結構塊，此種確定的折疊類型通常稱為超二級結構。幾乎所有的三級結構都可以用這些折疊類型，乃至他們的組合型來予以描述，因此又將其稱為標準折疊單位。3C

2、APCAP：環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMPreceptprotein），cAMP與CRP結合后所形成的復合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）4回文序列回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互補序列，常是限制性酶切位點。5micRNAmicRNA：互補干擾RNA或稱反義RNA，與mRNA序列互補，可抑制mRNA的翻譯。6核酶核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工過程中起到自我催化的作用。

3、7模體模體：蛋白質分子空間結構中存在著某些立體形狀和拓撲結構頗為類似的局部區(qū)域8信號肽信號肽：在蛋白質合成過程中N端有15~36個氨基酸殘基的肽段，引導蛋白質的跨膜。9弱化子弱化子：在操縱區(qū)與結構基因之間的一段可以終止轉錄作用的核苷酸序列。10魔斑魔斑：當細菌生長過程中，遇到氨基酸全面缺乏時，細菌將會產生一個應急反應，停止全部基因的表達。產生這一應急反應的信號是鳥苷四磷酸(ppGpp)和鳥苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp與pppGp

4、p的作用不只是一個或幾個操縱子，而是影響一大批，所以稱他們是超級調控子或稱為魔斑。11上游啟動子元件上游啟動子元件：是指對啟動子的活性起到一種調節(jié)作用的DNA序列，10區(qū)的TATA、35區(qū)的TGACA及增強子，弱化子等。12DNADNA探針探針：是帶有標記的一段已知序列DNA，用以檢測未知序列、篩選目的基因等方面廣泛應用。13SDSD序列序列：是核糖體與mRNA結合序列，對翻譯起到調控作用。14單克隆抗體單克隆抗體：只針對單一抗原決定簇

5、起作用的抗體。15考斯質粒考斯質粒：是經過人工構建的一種外源DNA載體，保留噬菌體兩端的COS區(qū)，與質粒連接構成。16藍白斑篩選白斑篩選：含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能分解生色底物Xgal(5溴4氯3吲哚βD半乳糖苷)產生藍色，從而使菌株變藍。當外源DNA插入后，LacZ基因不能表達，菌株呈白色，以此來篩選重組細菌。稱之為藍白斑篩選。17順式作用元件順式作用元件：在DNA中一段特殊的堿基序列，對基因的表達起到調控作用的基因元件

6、。18KlenowKlenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是從DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性19錨定錨定PCRPCR：用于擴增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分別用多聚dC和已知的序列作為引物進行PCR擴增。20融合蛋白融合蛋白：真核蛋白的基因與外源基因連接，同時表達翻譯出的原基因蛋白與外源蛋白結合在一起所組成的蛋白質。二、填二、填空1DNA的物理圖譜是DNA分子的（限制性內切酶酶解限

7、制性內切酶酶解）片段的排列順序。2RNA酶的剪切分為（自體催化自體催化）、（異體催化異體催化）兩種類型。3原核生物中有三種起始因子分別是（IF1IF1）、（IF2IF2）和（IF3IF3）。4蛋白質的跨膜需要（信號肽信號肽）的引導，蛋白伴侶的作用是（輔助肽鏈折疊成天然構象的蛋白質）。5啟動子中的元件通常可以分為兩種：（核心啟動子元件核心啟動子元件）和（上游啟動子元件上游啟動子元件）。6分子生物學的研究內容主要包含（結構分子生物學結構分子

8、生物學）、（基因表達與調控基因表達與調控）、（DNADNA重組技術重組技術）三部分。7證明DNA是遺傳物質的兩個關鍵性實驗是（肺炎球菌感染小鼠肺炎球菌感染小鼠）、（T2T2噬菌體感染大腸桿菌噬菌體感染大腸桿菌）這兩個實驗中主要的論點證據(jù)是：（生物體吸收的外源生物體吸收的外源DNADNA改變了其遺傳潛能改變了其遺傳潛能）。8hnRNA與mRNA之間的差別主要有兩點：（hnRNAhnRNA在轉變?yōu)樵谵D變?yōu)閙RNAmRNA的過程中經過剪接的過

9、程中經過剪接，）、（mRNAmRNA的5′5′末端被加上一個末端被加上一個m7pGpppm7pGppp帽子，在帽子，在mRNA3′mRNA3′末端多了一個多聚腺苷酸末端多了一個多聚腺苷酸(polyA)(polyA)尾巴尾巴）。9蛋白質多亞基形式的優(yōu)點是（亞基對亞基對DNADNA的利用來說是一種經濟的方法的利用來說是一種經濟的方法）、（可以減少蛋白質合成過程中隨機可以減少蛋白質合成過程中隨機的錯誤對蛋白質活性的影響的錯誤對蛋白質活性的影響

10、）、（活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關閉活性能夠非常有效和迅速地被打開和被關閉）。10蛋白質折疊機制首先成核理論的主要內容包括（成核成核）、（結構充實結構充實）、（最后重排最后重排）。11半乳糖對細菌有雙重作用；一方面（可以作為碳源供細胞生長可以作為碳源供細胞生長）；另一方面（它又是細胞壁的成分它又是細胞壁的成分）。所以3增強子GCCAATTATAA—5mGpp—起始位點11070253對天然質粒的人工構建主要表現(xiàn)在哪些方面？對天然

11、質粒的人工構建主要表現(xiàn)在哪些方面？天然質粒往往存在著缺陷，因而不適合用作基因工程的載體，必須對之進行改造構建：a、加入合適的選擇標記基因，如兩個以上，易于用作選擇通常是抗生素基因。b、增加或減少合適的酶切位點，便于重組。c、縮短長度，切去不必要的片段，提高導入效率，增加裝載量。d、改變復制子，變嚴緊為松弛，變少拷貝為多拷貝。e、根據(jù)基因工程的特殊要求加裝特殊的基因元件4舉例說明差示篩選組織特異舉例說明差示篩選組織特異cDNAcDNA的方

12、法？的方法？制備兩種細胞群體，目的基因在其中一種細胞中表達或高表達，在另一種細胞中不表達或低表達，然后通過雜交對比找到目的基因。例如：在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中，腫瘤細胞會呈現(xiàn)與正常細胞表達水平不同的mRNA，因此，可以通過差示雜交篩選出與腫瘤相關的基因。也可利用誘導的方法，篩選出誘導表達的基因。5雜交瘤細胞系的產生與篩選？雜交瘤細胞系的產生與篩選？脾B細胞骨髓瘤細胞，加聚乙二醇（PEG）促進細胞融合，HAT培養(yǎng)基中培養(yǎng)（內含次黃嘌呤、氨基

13、蝶呤、T）生長出來的脾B骨髓瘤融合細胞繼續(xù)擴大培養(yǎng)。細胞融合物中包含：脾脾融合細胞：不能生長，脾細胞不能體外培養(yǎng)。骨骨融合細胞：不能利用次黃嘌呤，但可通過第二途徑利用葉酸還原酶合成嘌呤。氨基蝶呤對葉酸還原酶有抑制作用，因此不能生長。骨脾融合細胞：在HAT中能生長，脾細胞可以利用次黃嘌呤，骨細胞提供細胞分裂功能。6、利用雙脫氧末端終止法（、利用雙脫氧末端終止法（SangerSanger法）測定法）測定DNADNA一級結構的原理與方法？一級

14、結構的原理與方法？原理是采用核苷酸鏈終止劑—2，，3，雙脫氧核苷酸終止DNA的延長。由于它缺少形成35磷酸二脂鍵所需要的3OH，一旦參入到DNA鏈中，此DNA鏈就不能進一步延長。根據(jù)堿基配對原則，每當DNA聚合酶需要dNMP參入到正常延長的DNA鏈中時，就有兩種可能性，一是參入ddNTP結果導致脫氧核苷酸鏈延長的終止；二是參入dNTP使DNA鏈仍可繼續(xù)延長，直至參入下一個ddNTP。根據(jù)這一方法，就可得到一組以ddNTP結尾的長短不一的

15、DNA片段。方法是分成四組分別為ddAMP、ddGMP、ddCMP、ddTMP反應后，聚丙烯酰胺凝膠電泳按泳帶可讀出DNA序列。7、激活蛋白（、激活蛋白（CAPCAP）對轉錄的正調控作用？）對轉錄的正調控作用？環(huán)腺苷酸（cAMP）受體蛋白CRP（cAMPreceptprotein），cAMP與CRP結合后所形成的復合物稱激活蛋白CAP（cAMPactivatedprotein）。當大腸桿菌生長在缺乏葡萄糖的培養(yǎng)基中時，CAP合成量增加，

16、CAP具有激活乳糖（Lac）等啟動子的功能。一些依賴于CRP的啟動子缺乏一般啟動子所具有的典型的35區(qū)序列特征（TTGACA）。因此RNA聚合酶難以與其結合。CAP的存在（功能）：能顯著提高酶與啟動子結合常數(shù)。主要表現(xiàn)以下二方面：①CAP通過改變啟動子的構象以及與酶的相互作用幫助酶分子正確定向以便與10區(qū)結合，起到取代35區(qū)功能的作用。②CAP還能抑制RNA聚合酶與DNA中其它位點的結合，從而提高與其特定啟動子結合的概率。8、典型的、典

17、型的DNADNA重組實驗通常包括哪些步驟？重組實驗通常包括哪些步驟？a、提取供體生物的目的基因（或稱外源基因），酶接連接到另一DNA分子上（克隆載體），形成一個新的重組DNA分子。b、將這個重組DNA分子轉入受體細胞并在受體細胞中復制保存，這個過程稱為轉化。c、對那些吸收了重組DNA的受體細胞進行篩選和鑒定。d、對含有重組DNA的細胞進行大量培養(yǎng)，檢測外援基因是否表達。9、基因文庫的構建對重組子的篩選舉出、基因文庫的構建對重組子的篩選舉

18、出3種方法并簡述過程。種方法并簡述過程?？股乜剐院Y選、抗性的插入失活、蘭白斑篩選或PCR篩選、差式篩選、DNA探針多數(shù)克隆載體均帶有抗生素抗性基因（抗氨芐青霉素、四環(huán)素）。當質粒轉入大腸桿菌中后，該菌便獲得抗性，沒有轉入的不具有抗性。但不能區(qū)分是否已重組。在含有兩個抗性基因的載體中，如果外源DNA片段插入其中一個基因并導致該基因失活，就可用兩個分別含不同藥物的平板對照篩選陽性重組子。如pUC質粒含LacZ基因（編碼β半乳糖苷酶）該酶能