植物檢疫學(xué)植物檢疫性細(xì)菌病害

1、第六章檢疫性細(xì)菌病害,植物檢疫性病原細(xì)菌的檢驗(yàn)方法 梨火疫病 Fire Blight 玉米細(xì)菌性枯萎病 Stewart’s bacterial wilt of corn 柑橘黃龍病 Citrus Yellow shoot 椰子致死黃化病 Coconut Lethal Yellowing,復(fù)習(xí)思考題

2、,植物病原細(xì)菌檢疫檢驗(yàn)技術(shù),直接檢測(cè)：直觀檢驗(yàn)和生長(zhǎng)檢驗(yàn)間接檢測(cè) 活菌檢測(cè) 免疫吸附分離法 噬菌體檢驗(yàn) 非活菌檢測(cè) 血清學(xué)檢測(cè),1、活菌檢測(cè),分離培養(yǎng)法：營養(yǎng)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基或鑒別培養(yǎng)基分離純化得到的細(xì)菌濃縮接種及離體葉檢測(cè)：提取液濃縮接種感病植物，觀測(cè)發(fā)病情況。 例如：浙江大學(xué)等在1％滅菌水瓊脂中加75×10－6的

3、苯并咪唑，做平板，加感病植物葉片，針刺＋摩擦接種，培養(yǎng)（光、溫、濕度），短期獲得癥狀。主要應(yīng)用于水稻細(xì)菌性條斑病菌和小麥細(xì)菌性黑穎病菌的檢測(cè)。,2.免疫吸附分離法,原理：接合血清學(xué)與平板分離技術(shù)，利用與抗原高度親和性的抗體，來捕獲目標(biāo)細(xì)菌，樣本中其他細(xì)菌均被沖洗掉，再將目標(biāo)細(xì)菌轉(zhuǎn)移或釋放到培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。方法：平皿免疫吸附評(píng)價(jià)測(cè)定法和免疫吸附稀釋培養(yǎng)法 平皿免疫吸附評(píng)價(jià)測(cè)定法簡(jiǎn)略流程如下：,常用溶入丙酮的硝酸纖維素或指甲油作包被,

4、洗滌液使用包被緩沖液,3.噬菌體檢驗(yàn),原理：噬菌體侵染細(xì)菌，裂解寄主細(xì)胞，在液體培養(yǎng)時(shí)，會(huì)使渾濁的細(xì)菌懸浮液變清，在固體平板上培養(yǎng)，則出現(xiàn)許多邊緣整齊、透明光亮的噬菌斑。噬菌體具有?；?，利用此特點(diǎn)，可鑒別細(xì)菌的種類。,4.非活菌檢測(cè),非活菌檢測(cè)的方法很多，下表是檢測(cè)病原細(xì)菌常用的一些方法，前9種血清學(xué)方法，均屬非活菌檢測(cè)。它們既能用于病原鑒定，又能直接用于病種或病株，甚至是無癥感染組織的檢測(cè)。,5.血清學(xué)檢驗(yàn),原理：方法：酶聯(lián)免疫吸

5、附實(shí)驗(yàn)（ELISA）、免疫熒光抗體法免疫熒光抗體法：將熒光染料（異硫氫酸熒光黃或羅丹明）與抗體以化學(xué)方法接合，再與抗體反應(yīng)，形成有熒光標(biāo)記的抗體—抗原復(fù)合物，在熒光顯微鏡下，可觀察到黃綠色熒光。,,梨火疫病Fire blight of pear,分布：,1878年首先由burrill描述，在紐約發(fā)生，后由Erwin命名，是第一個(gè)被確定的植物細(xì)菌病害。主要分布于北美洲于西北歐，中歐、地中海、東南歐及大洋州和亞洲也有分布。大約40多個(gè)國

6、家。,梨火疫病的地理分布,,寄主： 梨火疫病菌寄主范圍很廣，能為害梨、蘋果、山楂、木旬子、李等４０多個(gè)屬220多種植物，大部分屬薔薇科Pomoideae亞科。危害性： 仁果類果樹的一種毀滅性病害。一棵多年生的梨和蘋果樹發(fā)病后可在幾星期內(nèi)死亡,癥狀：侵害花、果實(shí)、枝條和葉片?；?侵染后變深褐色，枯萎。葉片:從葉緣沿葉脈擴(kuò)展，先呈水浸狀，后黑褐色。嫩稍:先水浸狀，后褐色至黑色，向下彎曲，呈魚鉤狀。果實(shí)：病部褐色凹陷，擴(kuò)

7、展到全果，潮濕時(shí)病部生粘稠的細(xì)菌溢，初乳白色，后紅褐色。病枝:葉片凋萎，幼果僵化，但病葉病果不脫落，遠(yuǎn)望似火燒狀，故稱火疫病。傷口：初期水浸狀，后下陷，呈潰瘍斑，病健交界處產(chǎn)生龜裂紋，韌皮部紅褐色，有黏液狀菌膿。嚴(yán)重時(shí)，病害從嫩稍很快擴(kuò)展到枝條、主干，直至根部，全株死亡。,,,,,,,,,,,Advanced fire blight on fruit - note bacterial ooze on fruit.,,,Firebl

8、ight in nursery stock,,,主要鑒定特征： 梨火疫病最典型的癥狀是花、果實(shí)和葉片受火疫病菌侵害后，很快變黑褐色枯萎，猶如火燒一般，但仍掛在樹上不落，故此得名。目前國際上將其癥狀據(jù)受侵害的部位，分成５個(gè)階段。,（1）花枯萎：侵染開放的花引起花枯萎。一般發(fā)生于早春，病菌直接從花器侵入，初為水漬狀斑，花基部或花柄暗色，不久萎蔫。病菌可擴(kuò)展至花梗及花簇中其它的花；在溫曖潮濕條件下，花梗上有菌膿滲出。隨著枯

9、萎發(fā)展，花梗、花等變褐至黑褐色，條件適宜時(shí)可繼續(xù)侵染殺死小枝并形成小潰瘍斑。,（2）潰瘍枯萎：是指前一季越冬潰瘍邊緣的病菌重新復(fù)活的結(jié)果。初癥是在復(fù)活的潰瘍附近的健康樹皮組織上出現(xiàn)窄的水漬狀區(qū)，幾天后，樹皮內(nèi)部組織出現(xiàn)褐色條斑，隨后病菌侵入附近繁殖枝內(nèi)部并引起萎蔫死亡。這些枝條特別是嫩枝與下面談及的枝枯萎有明顯區(qū)別，即在萎蔫之前枝尖芽褪色（黃至桔黃色）。,（3）枝枯萎：細(xì)菌直接侵入前 1～3葉的枝尖，然后殺死整個(gè)枝條及支持枝。初癥是枝尖

10、萎蔫，但萎蔫前不褪色，象拐杖狀。條件適宜時(shí)，幾天內(nèi)可移動(dòng)15～30cm，造成整枝死亡，病枝、枝皮、葉通常變黑。潮濕時(shí)，枝條上出現(xiàn)菌膿。后期，終芽前出現(xiàn)的枝枯萎一般不會(huì)萎蔫，且僅在枝最上部出現(xiàn)壞死。隨著病菌不斷深入，并侵染主干，皮層收縮，下陷，形成潰瘍斑。,（4）病菌亦可直接從氣孔、水孔等自然孔口或蕾苞，或由風(fēng)引起的傷口侵入葉片，初葉邊壞死，并向中脈、中柄、莖擴(kuò)展，后變黑，通常有菌膿。（5）損傷枯萎和砧木枯萎：這二種比較特殊，前者主要是

11、由于晚霜、冰雹或大風(fēng)損傷引起，如果實(shí) 很容易引起果實(shí)枯萎。后者僅限于高感品種EMAL-26、 EMLA-9和MARK-39砧木。通常是由感病的接穗在這些砧木上發(fā)病后引起，最終成潰瘍帶而殺死樹體。,病原菌： 學(xué)名：Erwinia amylovora（Burrill）Winslow 異名： Micrococcus amylovorus Burril Bacillus amylovor

12、us (Burrill) Trevisan Bacterium amylovorus (Burrill) Chester 分類地位：原核生物界(Procaryotes),薄壁菌門(Gracilicutes),腸桿菌科(Enterobacteriaceae)歐文氏菌屬(Erwinia)解淀粉歐文氏菌,形態(tài)特征：直桿菌，有莢膜，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)，大小為0.9-

13、1.8× 0.6-1.5µm，多數(shù)單生，有時(shí)成雙或短時(shí)間內(nèi)3-4個(gè)呈鏈狀。革蘭氏染色陰性。在蔗糖培養(yǎng)基上27℃下培養(yǎng)3d，菌落直徑3～4mm，白色至奶油色，半球形隆起，有黏性，表面光滑，邊緣整齊，中心絨環(huán)狀。,生物學(xué)特性：兼性厭氧，過氧化物酶陽性，氧化酶陰性，好氣條件下利用葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，厭氧條件產(chǎn)酸緩慢。明膠碟形液化緩慢。不產(chǎn)生硫化氫，不利用丙二酸鹽。葡萄糖酸鹽氧化和七葉苷水解不穩(wěn)定。氯化鈉濃度高于2％以上時(shí)生長(zhǎng)

14、延緩，至6％－7%時(shí)則完全抑制。 抗青霉素，對(duì)氯霉素、鏈霉素和土霉素敏感。 細(xì)菌生長(zhǎng)的溫度范圍6～37 ℃，最適溫度25～27.5℃，致死溫度45～50℃，10 min，最適酸堿度為PH6.0。,梨火疫病菌以簡(jiǎn)單的細(xì)胞分裂繁殖，一個(gè)細(xì)胞在條件適宜時(shí)，３天內(nèi)在寄主植物組織中能達(dá)到109細(xì)胞，每個(gè)細(xì)胞都是一個(gè)侵染源，感染寄主而引起病害的發(fā)展。除蛋白酶外，病菌不產(chǎn)任何有助于侵入寄主的酶，主要是在環(huán)境條件適宜時(shí)，通過胞間

15、組織侵入薄壁組織的病菌產(chǎn)生胞外多糖。胞外多糖在病害發(fā)展過程中起重要的作用，其是菌膿的重要成份。菌膿的理化性質(zhì)隨濕度變化而變化，干時(shí)皺、硬，大時(shí)膨脹易被雨水?dāng)U散，中等濕度的菌膿粘易被昆蟲、風(fēng)傳播。,發(fā)病規(guī)律： 病菌在病株病疤邊緣組織處越冬，掛在樹上的病果也是越冬場(chǎng)所，如果冬季溫和，病菌還能在病株樹皮上度過，來年早春病菌在上年的潰瘍處迅速繁殖，遇到潮濕、溫和的天氣，從病部滲出大量乳白色粘稠狀的細(xì)菌分泌物，即為當(dāng)年的初侵染源，通過昆蟲、

16、雨滴、風(fēng)、鳥類以及人的田間操作將病菌傳給健株。病菌亦通過傷口、自然孔口（氣孔、蜜腺、水孔）、花侵入寄主組織，有一定損傷的花、葉、幼果和茂盛的嫩枝最易感病。,傳播途徑　近距離傳播：雨水是果園短距離傳播的主要因子，其次風(fēng)亦是中短距離傳播的重要因子，往往在沿著盛行風(fēng)的方向，病原菌以單個(gè)菌絲、菌膿或菌絲束被風(fēng)攜帶到較遠(yuǎn)距離。除次之外，昆蟲對(duì)病菌的傳播擴(kuò)散起一定的作用。傳病昆蟲包括蜜蜂在內(nèi)有77個(gè)屬的100多種昆蟲，其中密蜂的傳病距離約為200

17、 ~ 400 m 。遠(yuǎn)距離傳播：主要是感病寄主繁殖材料，包括種苗、接穗、砧木、水果、被污染的運(yùn)輸工具、候鳥等。,梨火疫病的遠(yuǎn)距離傳播,,發(fā)生條件： 受傷的花朵、幼果和嫩稍最易受病菌侵染。經(jīng)冰雹襲擊，病害蔓延更加迅速。較高氣溫（18～24℃）和較高的濕度（70％以上）有利于病菌侵染。,檢驗(yàn)方法： 1.產(chǎn)地檢驗(yàn)： 2.癥狀觀察：梨火疫病的癥狀很典型，是鑒定的重要方法，但必須與其他癥狀相似的梨梢枯病區(qū)分開。梨梢枯病僅限于危

18、害花器、葉片和嫩梢，不危害枝條和莖干，病部無細(xì)菌溢膿，葉片上最初為深褐色斑點(diǎn)，周圍有紅色暈圈，枯死的病葉不會(huì)長(zhǎng)期掛在樹上,3.分離培養(yǎng)　可采用選擇性培養(yǎng)基和鑒別性培養(yǎng)基進(jìn)行。 MS培養(yǎng)基　菌落為紅橙色，背景為蘭綠色。配方：瓊脂20g，甘露醇10g， L-天門冬酰胺3g，牛膽酸鈉2.5g，磷酸氫二鉀2.0g，煙酸0.5g，MgSO4·7H2O0.2g，次氮基三乙酸0.2g，硫酸十七烷基鈉0.1ml，0.5%

19、溴麝香草酚蘭水溶液9ml，0.5%中性紅2.5ml，蒸餾水970ml，pH7.3滅菌后加1%放線菌酮5ml，1%硝酸銫水溶液1.75ml。 CG培養(yǎng)基　在29℃培養(yǎng)48小時(shí)后形成典型的火山口狀菌落。配方：水380ml，蔗糖160g，營養(yǎng)瓊脂12g，結(jié)晶紫0.8ml（1%乙醇溶液），0.1%放線菌酮20ml。,4.致病性實(shí)驗(yàn)　梨火疫病菌致病性試驗(yàn)可用梨片或梨嫩枝測(cè)定，亦可用煙草過敏反映檢查。NA上培養(yǎng)48小時(shí)的細(xì)菌

20、配成108 cells /ml的懸液，注入煙草葉片或接種于1cm厚梨片、或針刺接種于１丈長(zhǎng)的巴黎枝條，28℃下培養(yǎng)，一般10~12小時(shí)后，煙草注射區(qū)出現(xiàn)白色壞死斑。1~3天后，梨片或枝條上出現(xiàn)白色菌膿，則可確診。5.血清學(xué)檢驗(yàn)：免疫熒光、ELISA、ODD和凝集實(shí)驗(yàn)6.分子生物學(xué)方法：核酸探針和PCR技術(shù),檢疫和防治 1.嚴(yán)格檢疫，禁止從疫區(qū)引入薔薇科仁果類果樹樹苗。 2.剪除病梢病枝。

21、 3.藥劑防治：120mg/kg鏈霉素噴霧，或花期用波爾多液噴霧防治，效果很好。 4.種植抗病品種： 5.避免在低洼易澇地定植。芽前刮除發(fā)病樹皮，在生長(zhǎng)季節(jié)每隔7天檢查1次各種發(fā)病新梢和組織，發(fā)現(xiàn)后及時(shí)剪除。對(duì)因各種農(nóng)事操作造成的傷口都要進(jìn)行涂藥保護(hù)等。,,玉米細(xì)菌性枯萎病Stewart’s bacterial wilt of corn,分布：1889年紐約首先報(bào)道，現(xiàn)已20多個(gè)國

22、家。分布于美國、加拿大、墨西哥、越南、泰國、馬來西亞、前蘇聯(lián)、波蘭、瑞士、意大利、前南斯拉夫、羅馬尼亞、希臘、、哥斯達(dá)黎加、波多黎各、圭亞那、秘魯、巴西。,寄主植物 主要是甜玉米，也侵染馬齒玉米、粉質(zhì)玉米、硬粒玉米和爆裂玉米。危害： 維管束病害、毀滅性病害。,癥狀：整個(gè)生育期都可危害，以開花期癥狀最明顯。早期癥狀表現(xiàn)為植株矮化，萎蔫，雄穗退色早枯，葉片邊緣產(chǎn)生波紋狀不規(guī)則病斑，初期水浸狀，黃色，與葉脈平行，貫穿全葉，寬1～

23、10mm，嚴(yán)重時(shí)病葉萎蔫死亡。生長(zhǎng)后期，葉片產(chǎn)生許多小病斑，結(jié)合成大塊，火燒狀干枯死亡。髓部有空腔，導(dǎo)管被黃色黏液阻塞，萎蔫植株的下部切口有黃色細(xì)菌溢膿。果穗的菌膿可通過內(nèi)層包葉的氣孔滲出，籽粒表面沾滿細(xì)菌菌膿，病籽粒變形、皺縮和變色。,Necrotic lesions on mature leaves; second phase of Stewart's wilt disease.,病原菌：玉米細(xì)菌性枯萎病菌 學(xué)名 &

24、#160;Pantoea stewartii (Smith) Mertaert et al. 異名  Erwinia stewartii (Smith) Dye；Pseudomonas stewartii Smith; Apalnobacter stewartii (Smith) McCulloch; Bacillus stewartii (Smith) Holland; Bacterium stewartii( Smith

25、) Smith; Phytomonas stewartii (Smith) Bergye et al; Pseudobacterium stewartii (Smith) Hrasil’nikov,1949; Xanthomomas stewartii (Smith) Dowson英文名  Stewart’s bacterial wilt of corn 分類地位  原核生物界(Procaryoces)，薄壁菌門

26、(Gracilicutes)，腸桿菌科(Enterobacteri-aceae)，泛菌屬(Pantoea),形態(tài)特征：好氣性短桿菌，兩端鈍圓，無鞭毛，有莢膜，G－，單生或雙生，0.4~0.8×0.9~2.2?。在牛肉膏培養(yǎng)基上形成黃色圓形菌落，全緣，表面扁平光滑，能利用葡萄糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、甘露糖、木糖、甘油鶴甘露糖、醇等產(chǎn)酸，但不產(chǎn)生氣體。在肉湯培養(yǎng)液中生長(zhǎng)微弱，形成灰色環(huán)和黃色沉淀物。細(xì)菌生長(zhǎng)溫度最低溫度8～9℃，

27、最適溫度30℃，最高溫度39℃，致死溫度53℃ 10min，適宜PH4.5～8.5，最適6.0～8.0。,發(fā)病規(guī)律：初侵染來源——帶菌的種子和昆蟲。土壤和病原殘?bào)w不能越冬，昆蟲是病原細(xì)菌的傳播介體和重要的越冬場(chǎng)所。最重要的傳病昆蟲是玉米葉甲，它以成蟲帶菌越冬，細(xì)菌存在于消化道中。越冬后現(xiàn)在早播玉米苗上取食，引起初侵染，并產(chǎn)卵發(fā)育成新一代成蟲，繼續(xù)向其它植株傳病。,Corn flea beetle (Chatocnema pulicari

28、a) vector of the Stewart's wilt bacterium (Pantoea stewartii).,流行條件：發(fā)病與流行主要決定于冬季氣溫（12、1、2月）的高低，若平均氣溫總和在37℃以上，有利蟲媒越冬，帶菌昆蟲成活率高，有可能引起發(fā)病。低于32℃則很少流行。此外有利于發(fā)病的條件包括土壤氮肥水平偏高，鉀肥水平偏低，高溫高濕等。,檢驗(yàn)方法：產(chǎn)地檢驗(yàn)：種植檢驗(yàn)：種子長(zhǎng)出的植株有明顯的癥狀。分離培養(yǎng)基

29、：采用伊凡諾夫選擇培養(yǎng)基，其成分如下：甘油30ml 檸檬酸鐵銨10g 磷酸氫二鉀2 . 5g, 氯化鈉15g硫酸鎂0.1g, 瓊脂17g 氯化鈣0.1g, 蒸餾水1000ml,PH7.0 為了抑制雜菌的污染,還可采用選擇性黑色素培養(yǎng)基,其成分如下:酵母浸膏 1g 甘油 30ml 制霉菌素 200mg/ml牛膽酸鈉 3g 氯化鈉 15g

30、 1%水溶性黑色素20ml瓊脂 17g 蒸餾水 1000ml PH6.730℃下培養(yǎng)7d，對(duì)光觀察，菌落中心呈黑色，邊緣透明，菌落圓形，表面光滑，呈粘狀。將分離的細(xì)菌接種在玉米苗上，驗(yàn)證是否發(fā)病。,4.噬菌體檢驗(yàn)法：用專化性噬菌體，如ZP6、ZP82等檢驗(yàn)。5 .血清學(xué)檢驗(yàn)：用酶聯(lián)免疫法等檢驗(yàn)。檢疫和防治1.禁止從國外疫區(qū)進(jìn)口玉米種子2.種子處理：（1）微波爐70℃處理10min，效果很好。（2）環(huán)氧

31、乙烷熏蒸：（3）恒溫處理：50℃下處理4d，消滅種子內(nèi)部細(xì)菌效果顯著，不影響發(fā)芽。（4）抗菌素溫浸法：3.防治傳播媒介昆蟲：4.種植抗病品種：,柑橘黃龍病Citrus Yellow shoot,分布：1939年在中國廣東發(fā)現(xiàn)該病，現(xiàn)已擴(kuò)展到亞洲和非洲37個(gè)國家和地區(qū)，中國主要發(fā)生在廣東、廣西、福建、臺(tái)灣、海南、云南、貴州、四川、浙江、湖南、江西等省。寄主：主要是柑橘屬、金柑屬和枳屬。草本植物有長(zhǎng)春花 。,危害：是柑橘的毀滅性

32、病害，感病的柑桔品種得病后可在3－5年內(nèi)喪失結(jié)果能力，甚至枯死。 癥狀：典型癥狀是在濃綠的樹冠中出現(xiàn)1－2條或多條的發(fā)黃枝梢，有兩種類型：一種是整張葉片均勻黃化 ，另一種是葉片呈黃綠相間的斑駁狀 。共同特點(diǎn)是葉質(zhì)硬化、無光澤，但在黃梢下部的老葉仍呈正常綠色。病果小，果皮光滑，畸形，無光澤，味酸，果皮著色時(shí)黃綠不均勻或在果蒂附近變橙紅色，而其余部份仍為青綠色的青果,,病原Liberobacter asiaticum （亞洲）、

33、Liberobacter africanum（非洲） 分類地位：原核生物界(Procaryoces)，薄壁菌門(Gracilicutes)，韌皮部桿菌屬 Liberobacter英文名稱：Citrus Huanglongbing；Citrus Yellow shoot；Citrus greening,未能在人工培養(yǎng)基上分離獲得純培養(yǎng)，在電鏡下為橢圓形或短桿狀的細(xì)菌，大小為30－600×500－1400?m，細(xì)胞壁厚度為

34、25－30 ?m。革蘭氏染色陰性，對(duì)四環(huán)素及青霉素敏感。根據(jù)其對(duì)熱的反應(yīng)和傳病木虱的不同，分為兩個(gè)株系：在亞洲，其發(fā)病的最適溫度為27－32℃，傳播介體為亞洲木虱（Diaphorina citri），病原為柑桔黃龍病原亞洲株系（L. asiaticum）；在非洲，其發(fā)病的最適溫度為20－24℃,傳播介體為非洲木虱 （Trioza aryteae） 病原為柑橘黃龍病非洲株系（L. africanum）?？梢酝ㄟ^嫁接及菟絲子傳播，但不

35、能通過汁液和土壤傳播。,傳播：遠(yuǎn)距離傳播主要是來自病區(qū)調(diào)運(yùn)的苗木、接穗；大田主要依靠柑橘木虱進(jìn)行傳播，在亞洲是亞洲木虱，在非洲是非洲木虱 。發(fā)生條件：亞洲多發(fā)生在熱帶亞熱帶地區(qū)，喜高溫；在非洲多在冷涼氣候下發(fā)生，30℃以上高溫病害受抑制。,檢驗(yàn)與檢測(cè)：1.產(chǎn)地檢驗(yàn)：每年10～12月癥狀表現(xiàn)最明顯2.生物學(xué)診斷：鑒別寄主法3.電鏡檢查：4.熒光顯微鏡檢查：黃色熒光5.化學(xué)診斷：染色法6.血清學(xué)檢測(cè)：,檢疫與防治：1、實(shí)行檢

36、疫  禁止病區(qū)苗木及一切帶病材料進(jìn)入新區(qū)和無病區(qū)，新開辟的果園要種植無病苗。 2、建立無病苗圃，培育無病苗木 要切實(shí)做到①對(duì)優(yōu)良單株進(jìn)行脫毒（莖尖嫁接脫毒或熱力脫毒）并經(jīng)鑒定證明不帶菌；②在網(wǎng)室內(nèi)建立種質(zhì)圃；③在隔離地方或在網(wǎng)室內(nèi)建立無病母本園；④在隔離地方或在網(wǎng)室內(nèi)建立無病苗圃。3、挖除病株  發(fā)現(xiàn)病株或可疑病株，應(yīng)立即挖除，用無病苗進(jìn)行補(bǔ)植。4、防治柑桔木虱  通過水肥管理控梢以減少木虱繁殖和傳播

37、。新梢期噴布1－2次殺蟲劑。果園四周栽種防護(hù)林帶，對(duì)木虱的遷飛也有阻礙作用。,,椰子致死黃化病 Coconut Lethal Yellowing,分布 椰子致死黃化病的名稱來源于Nutman and Roberts (1955)。他們首次用致死黃化（lethal yellowing）命名在加勒比海、牙買加西部地區(qū)發(fā)生的一種椰子致死黃化型的毀滅性病害。該病害在加勒比海地區(qū)至少已有100年的歷史，在西非也有50年的歷史。目

38、前分布在拉丁美洲開曼群島、巴哈馬群島、古巴、多半尼加、海地，非洲和西印度群島，亞洲的印度尼西亞、辛都、馬來西亞、美國佛羅里達(dá)洲南部地區(qū)等地也有報(bào)道。,寄主范圍：除為害椰子樹(Cocos nucifera L.)外，還可以為害油棕、棗椰子、扇棕、馬尼拉棕、海棕等30多種棕櫚科植物。大部分椰子品種抗病性差，在棕櫚科的15個(gè)主要類群中，至少有7個(gè)是感病的。感病寄主屬包括：Allagoptera，桄榔屬 Arenga，Arikuryroba，

39、Boraxxus，魚尾屬Caryota，散尾屬Chrysalidocarpus，椰子屬Cocos，Corypha，Dictyosperma，Gaussia，Hyophorbe，Latania，薄葵屬Livistona，Mascarena，Nannorrhops，刺葵屬Phoenix，Pritchardia，棕櫚屬Trachycrpus，Veitchia。,危害情況: 是椰子和棕櫚科植物的毀滅性病害。在牙買加，據(jù)統(tǒng)計(jì)1961年

40、的600萬株感病的Jamaica Tall椰子中的90％在1981年因感染黃化植原體而死亡。在加納，在過去的30年中，已有約100萬株椰子因感病而死亡；在多哥，截至1964年，約60000株或50％的椰子樹因感病而死亡；在Florida，到1973年，至少20000株(約6％)的椰子樹感病。在墨西哥和坦桑尼亞，成千上萬公頃的椰子已被病害侵襲而死亡。,癥狀：各齡椰子樹均可感病。病害早期的典型癥狀是花序干枯。開始時(shí)頂部復(fù)葉有褐色枯死斑，可深

41、入到裹在里邊的羽狀葉，再向深處擴(kuò)展，最后致死生長(zhǎng)點(diǎn)，未成熟的果實(shí)脫落。開花的花序軸從頂端開始?jí)乃馈⒆兒?，佛焰苞未成熟就提前開放，然后凋萎、落花、落果。以后葉片開始黃化，下層的葉片迅速發(fā)展到主株葉片，直至脫落。芽片感染后表現(xiàn)有不規(guī)則的褐色水浸狀條斑，逐漸發(fā)展到芽腐，并有惡臭味。此時(shí)新葉很容易被剝離掉。在葉部呈現(xiàn)黃化癥狀時(shí)，根系出現(xiàn)壞死，不久腐爛，根系受害死亡。,總之,葉片黃化癥狀是植原體侵入根系后導(dǎo)致生理學(xué)、生物化學(xué)變化的結(jié)果。一般椰子黃

42、化植原體病癥狀發(fā)展過程如下：大多數(shù)感病植株在果實(shí)成熟前提前落果新開的花序黑化從下部葉片到上部葉片逐漸黃化針形葉死亡和脫落，可能僅保留少量綠葉整個(gè)樹冠脫落，僅留赤裸的呈線桿狀枝干,病原：椰子致死黃化植原體 學(xué)名  Coconut lethal yellowing Phytoplasma英文名   Coconut lethal yellowing 分類地位  原核生物界，無壁菌門，軟球

43、菌綱，植原體屬（MLO）,形態(tài)特征 電鏡下，典型的植原體顆粒存在于病株的篩管中。顆粒是卵形、橢圓形、及絲狀，由三層結(jié)構(gòu)組成即：兩層電子密集層，中間隔一層透明層。在感病椰子樹韌皮部篩管細(xì)胞內(nèi)可見植原體的存在，形狀包括絲狀、念珠狀及近球狀，大小為400-2000 nm。在新近成熟的韌皮部篩管細(xì)胞中常見有植原體，而在薄壁組織中未見植原體存在。,傳播途徑在自然條件下，椰子致死黃化病的介體為麥蠟蟬（Myndus crudus）。葉蟬

44、（Gypona sp）也有可能是潛在介體。葉蟬介體在美洲的地理分布與病害植原體的分布相吻合。在非洲西部，葉蟬Myndus adiopodoumeensis被懷疑也是一種傳播介體。有報(bào)道表明化學(xué)防治昆蟲介體可明顯降低病害的傳播速度。在國際貿(mào)易中帶病的植物材料，包括觀賞樹種，能傳帶病菌。,檢驗(yàn)與檢測(cè) 1． 產(chǎn)地檢疫 根據(jù)植物受侵染后的癥狀，鑒定是否感病。2．生物學(xué)方法 利用介體昆蟲麥蠟蟬在可疑的植物上取食后，接種到長(zhǎng)春花上，誘

45、發(fā)長(zhǎng)春花產(chǎn)生植原體病害的典型癥狀，但潛伏期較長(zhǎng)。3．電鏡觀察 用電鏡觀察植物韌皮部組織中是否有植原體存在。4． 核酸雜交和PCR檢測(cè)技術(shù) Harrison等1992年報(bào)道用5種DNA探針可用于椰子和其他棕櫚科植物上的椰子致死黃化植原體的檢測(cè)；Rohde 等1993年報(bào)道應(yīng)用PCR技術(shù)成功的檢測(cè)椰子致死黃化植原體。檢疫措施1、 嚴(yán)禁從疫區(qū)進(jìn)口椰子果和苗木。2、 嚴(yán)格把關(guān)，加強(qiáng)檢疫。3、 科研單位特殊需要進(jìn)口，應(yīng)由檢疫機(jī)關(guān)審批

46、隔離試種一年以上，證明種苗是健康的，方能進(jìn)口。,防治方法1、 種植抗病品種。2、 防治昆蟲介體。用殺蟲劑防治介體葉蟬能限制或降低病害的傳播速度。3、 注射抗生素：可注射四環(huán)素(500ppm)，每株椰子樹注射的最大劑量為8克，加水1000毫升。每株病樹進(jìn)行保護(hù)性注射抗生素1－3克可降低病害蔓延速度3－5倍。也有報(bào)道用土霉素－鹽酸注射液對(duì)病株的樹干進(jìn)行注射處理，能抑制植原體病的癥狀，處理過的植株又能重新健康生長(zhǎng)，每4個(gè)月處理一次能保持

47、植株不表現(xiàn)癥狀。4、衛(wèi)生措施：及早清除病枝、病枝，重病樹應(yīng)砍伐燒毀,,復(fù)習(xí)思考題,1．試述玉米細(xì)菌性萎蔫病在國外的分布狀況、癥狀表現(xiàn)特點(diǎn)、病原分類地位、檢驗(yàn)方法和防治措施。2．試述梨火疫病在國外的分布狀況、癥狀表現(xiàn)特點(diǎn)、病原分類地位、檢驗(yàn)方法和防治措施。3．試述柑橘黃龍病在國外的分布狀況、癥狀表現(xiàn)特點(diǎn)、病原分類地位、檢驗(yàn)方法和防治措施。4.細(xì)菌病害的傳播特點(diǎn)是什么？6．試述細(xì)菌病害的檢驗(yàn)與診斷要點(diǎn)。7．植原體的病害為何檢驗(yàn)？

48、,第七章檢疫性植物病毒,2006.10.2,檢疫性植物病毒的檢驗(yàn)方法番茄環(huán)斑病毒馬鈴薯帚頂病毒*其他檢疫性植物病毒 南方菜豆花葉病毒、可可枝腫病毒、香石竹環(huán) 斑病毒,了解檢疫性植物病毒的種類、分布及重要性，掌握植物檢疫性病毒的檢驗(yàn)方法，掌握番茄環(huán)斑病毒、馬鈴薯帚頂病毒引起病害的癥狀、病原特性、寄主范圍、病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律以及檢驗(yàn)措施。,檢疫性植物病毒的檢驗(yàn)方法,生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)電子顯微鏡技術(shù) 分子生物學(xué)檢

49、測(cè)技術(shù),1.生物學(xué)檢測(cè)技術(shù),原理： 植物病毒對(duì)鑒別寄主或指示植物的特異反應(yīng)。鑒別寄主譜： 對(duì)一種病毒有特殊反應(yīng)的一組寄主，一般包括3～5種不同反應(yīng)類型的寄主植物。一般包括：系統(tǒng)侵染的寄主局部侵染的寄主不受侵染的寄主,例1，TMV和CMV在田間煙草植株上都呈花葉癥，為了確定是否有TMV，或是將兩者區(qū)分開，便可通過下列三種植物的接種來確定。,,2.血清學(xué)檢測(cè)技術(shù),原理：

50、抗原與抗體的特異結(jié)合 方法： 免疫電泳和免疫電鏡、瓊脂雙擴(kuò)散、ELISA等。,兩種抗原相同，都與已知的抗血清反應(yīng),瓊脂雙擴(kuò)散反應(yīng)沉淀線判斷圖,,,,,,抗原1,抗血清,抗原2,,,,,,,,,,,,抗血清不?；袃煞N以上的抗體,抗原2,抗原1,抗原2,抗原1,抗血清,抗血清,兩種抗原有一定的親緣關(guān)系但不完全相同,3.電子顯微鏡技術(shù),原理： 以電磁波為光源，利用短波電子流，分辨率達(dá)到0.9

51、9Å，比光學(xué)鏡要高1000倍以上,主要方法： 超薄切片、負(fù)染技術(shù)、免疫電鏡技術(shù),4.分子生物學(xué)檢測(cè)方法,分子雜交檢測(cè)PCR技術(shù)檢測(cè),分子雜交在DNA和RNA之間進(jìn)行，依據(jù)是RNA與互補(bǔ)的DNA之間存在著堿基的互補(bǔ)關(guān)系。在一定的條件下，RNA--DNA形成異質(zhì)雙鏈的過程稱為雜交。其中預(yù)先分離純化或合成的已知核酸序列片段叫做雜交探針(probe)，由于大多數(shù)植物病毒的核酸是RNA，其探針為互補(bǔ)cDNA也稱為

52、cDNA探針。,植物病毒分子探針具專一性強(qiáng)、靈敏度高、準(zhǔn)確快速等優(yōu)點(diǎn) 分子探針的長(zhǎng)度一般在500～1500核苷酸堿基對(duì)（bp） 常用廣譜分子探針，即包括多個(gè)不同專化性基因的核苷酸片斷。,PCR技術(shù)檢測(cè),PCR （Polymerase chain reaction）聚合酶聯(lián)反應(yīng)：將極微量的靶DNA片斷，在4h左右特異性擴(kuò)增上百萬倍。 植物病毒主要是RNA病毒，進(jìn)行PCR檢測(cè)時(shí)，需要將RNA逆轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)DNA（cDNA)

53、，再進(jìn)行PCR，即RT－PCR技術(shù)。,檢疫性植物病毒的檢驗(yàn)方法番茄環(huán)斑病毒馬鈴薯帚頂病毒*其他檢疫性植物病毒 南方菜豆花葉病毒、可可枝腫病毒、香石竹環(huán)斑病毒,了解檢疫性植物病毒病害的種類、分布及重要性，掌握植物檢疫性病原病毒的檢驗(yàn)方法，掌握番茄環(huán)斑病、馬鈴薯帚頂病的癥狀、病原特性、寄主范圍、病害的發(fā)生發(fā)展規(guī)律以及這兩種病害的檢驗(yàn)措施。,番茄環(huán)斑病毒Tomato ring spot virus,分布：

54、1936年，美國東部新澤西發(fā)生ToRSV至今已有30多個(gè)國家和地區(qū)發(fā)現(xiàn)有該病毒，主要集中在北美溫帶地區(qū)，即美國和加拿大。,寄主： ToRSV寄主范圍廣，包括雙子葉和單子葉植物的35個(gè)科，自然界，ToRSV主要侵染木本植物，草本及觀賞植物。,危害情況： 1975年，ToRSV侵染加拿大安大略的地區(qū)葡萄，產(chǎn)量損失76％～95％，甚至造成絕產(chǎn)。同年，ToRSV 侵染后，紐約葡萄嚴(yán)重減產(chǎn)，奧爾良懸鉤子

55、果實(shí)減產(chǎn)21％～50％。,癥狀：番茄癥狀（番茄環(huán)斑?。?枝條卷曲和壞死，嫩葉、葉柄生褐色壞死環(huán)和波紋，果實(shí)受侵染，外表產(chǎn)生環(huán)斑，灰色到褐色栓皮,葡萄上的癥狀（葡萄黃脈?。?葉黃脈、斑駁、環(huán)斑，節(jié)間縮短呈蓮蓙狀叢生，植株嚴(yán)重矮化，果實(shí)敗育變小，至絕產(chǎn)，幾年內(nèi)植株漸漸壞死。植株剝皮后，可見增厚的海綿狀韌皮組織及壞死凹陷,蘋果上的癥狀（apple union necrosis and decline

56、） 砧木和接穗接合部腫脹，裂開，剝開樹皮，樹皮內(nèi)側(cè)變厚，多孔，愈合斑連接處有不明顯的線，在這條線相對(duì)方向的形成層表面也有一類似的線，沿著這條線有一小的深溝或一條光滑的細(xì)縫，壞死的樹皮覆蓋在溝或縫上。 葉變少，變小，黃化，嫩枝呈束狀叢生，果實(shí)較小，果皮顏色加深。樹皮顏色淡紅,桃樹和李屬其它樹種上的癥狀（桃樹黃芽花葉）：沿中脈產(chǎn)生扁橢圓形羽緣狀病斑，由灰綠色變?yōu)闇\綠色，芽發(fā)育成為小而變形的叢生葉，

57、成淺黃色而死亡。（桃樹莖痘?。簶淦ぷ兒?，發(fā)軟，海綿狀，剝開樹皮，樹干上出現(xiàn)凹陷的痘斑和溝槽。葉片褪綠，葉芽發(fā)育推遲，落葉提前，果實(shí)畸形，果味變異，提前成熟和脫落。,復(fù)盆子上的癥狀：侵染當(dāng)季不表現(xiàn)癥狀，第二年葉片表現(xiàn)黃色斑駁，條紋或脈褪綠，葉片生長(zhǎng)推遲，病株表現(xiàn)不結(jié)果或形成易碎果懸鉤子上的癥狀：植株矮化，小果并減產(chǎn)，幼齡植株葉片出現(xiàn)褪綠環(huán)斑。第二年，葉片癥狀不明顯，但新葉出現(xiàn)偏上性，早落。第三年有10％～80％的果枝死亡。,病原

58、： 番茄環(huán)斑病毒 學(xué)名  Tomato ring sopt virus （ToRSV） 異名  煙草環(huán)斑病毒2號(hào) Tomato ring spot virus No.2 煙病毒13號(hào) Nicotiana virus 13 桃黃芽花葉病毒 Peach yellow bud mosaic virus 葡萄黃

59、脈病毒 Grape yellow vein virus 分類地位  線蟲傳多面體病毒組 R/1:2.8/44+2.4/41:S/S:S/C,Ve/Ne Nepovirus,病毒特性： 等軸對(duì)稱球形，直徑28nm，在煙草汁液中，58 ℃下10min、20 ℃下2d、4 ℃下21d、－20 ℃下幾個(gè)月以后失去侵染力。接種的煙葉和黃瓜子葉汁液，稀釋限點(diǎn)為10－3，而系統(tǒng)侵染的煙草汁液，稀釋限點(diǎn)低于10

60、－1。,生物學(xué)特性： 穩(wěn)定性差，難純化，純化的病毒制劑中有兩類粒體：無RNA的蛋白外殼的T粒體和侵染性核蛋白的B粒體，B粒體具侵染性，二者血清學(xué)性質(zhì)有差異。T粒體分子量3.2×106，沉降系數(shù)53S，B粒體分子量5.5×106，沉降系數(shù)126～128S。B粒體RNA分子量2.3×106 ，占粒體重量的40％,生理分化：煙草株系：以煙草環(huán)斑病毒2號(hào)為代表，是典型株系。自然發(fā)生在溫室的煙草

61、幼苗，主要分布在美國東部。 桃黃芽花葉株系：自然發(fā)生在杏、扁桃、桃上，分布在美國西部。此株系與Price 的煙草株系較難區(qū)分。因?yàn)閮芍晗翟诓荼炯闹魃系陌Y狀相似，血清學(xué)上無區(qū)別，而且大多數(shù)分離物在桃樹上都產(chǎn)生黃芽花葉癥狀 葡萄黃脈株系：自然發(fā)生在葡萄上，在草本寄主上引起的癥狀與上述兩個(gè)株系類似，但可在豇豆上引起頂枯，血清學(xué)上也與上述兩個(gè)株系不同，主要分布在美國西部 其他株系：李屬植物上不同分離物 （李褐線分離物 Prune brow

62、n line，李莖環(huán)孔分離物Prunus stem pitting和櫻桃葉斑駁分離物Cherry leaf mottle）存在血清學(xué)差異，但差異不明顯。櫻桃葉斑駁分離物不能由Xiphinema californicum傳播,傳播： 田間傳播介體是劍線蟲屬，其中Xiphinema americanum優(yōu)勢(shì)種群。成蟲和三齡幼蟲都能傳毒，在病根部飼毒1h可獲得病毒，而后在1h內(nèi)又能將病毒傳給接種植物。

63、 由繁縷、千日紅、懸鉤子、大豆、弗吉尼亞草莓、煙草、番茄和紅三葉草等植物的種子傳播。 雜草是重要的田間毒源。 遠(yuǎn)距離傳播依靠植物的種子和苗木調(diào)運(yùn)進(jìn)行,檢驗(yàn)方法：生物學(xué)檢測(cè)：黃瓜：局部褪綠斑，而后產(chǎn)生系統(tǒng)褪綠和斑駁莧色藜和昆諾阿藜：小局部褪綠斑，后系統(tǒng)侵染頂端枯死菜豆：局部褪綠斑或壞死斑，系統(tǒng)癥狀為皺縮和頂葉壞死煙草：局部壞死或環(huán)斑，幼葉系統(tǒng)褪綠環(huán)紋和斑紋，后隱癥矮天牛：局部壞死斑

64、，幼葉壞死和枯萎番茄：局部壞死斑，幼葉產(chǎn)生系統(tǒng)斑駁和壞死豇豆：局部褪綠斑或壞死斑，引起系統(tǒng)侵染，植株頂端壞死,形態(tài)學(xué)檢測(cè)：浸漬法制樣，電鏡觀察病毒粒體形態(tài)，測(cè)量粒體大小。 血清學(xué)和PCR檢測(cè)：瓊脂雙擴(kuò)散、免疫電鏡、酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)等。,檢疫和防治：禁止從病區(qū)引進(jìn)大豆種子、煙草種子、唐菖蒲球莖及桃、杏、櫻桃、葡萄和草莓等植物的無性材料。病區(qū)應(yīng)采用無毒種子和苗木，施用藥劑消滅介體線蟲，清除雜草減少毒源。,馬鈴薯帚頂病毒Pota

65、to mop－top virus,分布： 1965年首先在英國發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)已傳入歐美多個(gè)國家。日本（1981）、美國（2002）報(bào)道。中國未見報(bào)道。寄主：馬鈴薯是唯一的自然寄主。人工接種可侵染多種寄主植物。,危害性： 在英格蘭，北愛爾蘭和蘇格蘭受侵薯塊的產(chǎn)量損失可達(dá)26％。此外該病為害后，病斑常影響到薯塊的外表，是商品價(jià)值降低。馬鈴薯在儲(chǔ)藏期間，若儲(chǔ)藏不當(dāng)，病斑在薯塊上擴(kuò)展，進(jìn)一步影響馬鈴薯的經(jīng)

66、濟(jì)價(jià)值。1966年和1967年P(guān)MTV在秘魯曾引起產(chǎn)量損失30－40％和75％。,癥狀： 植株：-------帚頂、奧古巴花葉和褪綠V型紋 帚頂癥狀：節(jié)間縮短，葉片簇生，植株矮化，束生奧古巴花葉：不規(guī)則黃色斑，環(huán)紋和線狀紋褪綠V型紋：褪綠V型紋癥狀,薯塊上的癥狀 初生癥狀（Primary Symptom）當(dāng)年受侵薯塊所表現(xiàn)出的癥狀。薯表輕微隆起，產(chǎn)生壞死或部分壞死，直徑為1－5厘米的同心環(huán)紋，這種環(huán)紋并不局限于某一部

67、分，?；ゾ墼谝黄鸹蚍珠_。將薯塊切開，內(nèi)部表現(xiàn)為壞死弧紋或條紋，它們向薯塊內(nèi)部延伸，但這種延伸并不一定來自薯表的環(huán)紋，其延伸程度似乎與薯表的癥狀嚴(yán)重程度有關(guān)。,次生癥狀：由病的母薯長(zhǎng)成的植株所結(jié)的薯塊的癥狀。畸形、大的龜裂，網(wǎng)絡(luò)狀小龜裂，橫切面上，表面的壞死環(huán)紋環(huán)繞薯塊，內(nèi)部的壞死和這些效相連接，髓部的壞死斑常延伸至薯塊端部的生殖根上。,病原：馬鈴薯帚頂病毒 學(xué)名  Potato mop-top virus異名

68、0; Chlorogenus solani, Potato virus 11, Solanum virus 15 potato witches’ broom agent分類地位  小麥土傳花葉病毒組(Furovirus)成員,病毒特性：直桿狀，100～300nm×16～20nm，沉降系數(shù)為126S、171S和236S。外殼

69、蛋白亞基呈螺旋狀排列，螺距2.4～2.5nm，單鏈RNA，病毒的致死溫度為75～80℃，稀釋限點(diǎn)為10－3～10－4，體外存活期10周以上（20℃）。 核酸：可能為單鏈RNA,發(fā)病規(guī)律：可汁液傳染，50％的病塊莖可將病毒傳給下一代。田間主要通過馬鈴薯粉痂病菌（Spongospora subterrance）傳播，病毒在休眠孢子囊中，至少存活1年，孢子囊萌發(fā)產(chǎn)生的游動(dòng)孢子侵入寄主時(shí)，將病毒粒體帶入馬鈴薯根部。病害在多雨年份發(fā)生較重