實(shí)驗(yàn)三血型測(cè)定

1、實(shí)驗(yàn)三,人類(lèi)ABO血型檢測(cè)及人血涂片的制備和觀(guān)察,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解人類(lèi)血型的遺傳特性及其遺傳方式；掌握人體血型（ABO型）的檢驗(yàn)方法。同時(shí)了解自己的血型。 觀(guān)察紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，掌握ABO血型鑒定的原理。掌握血涂片的制備方法；認(rèn)識(shí)紅細(xì)胞及各種白細(xì)胞的典型形態(tài)；,實(shí)驗(yàn)原理,血型是指紅細(xì)胞的血型，是根據(jù)紅細(xì)胞膜外表面存在的特異性抗原（鑲嵌于紅細(xì)胞膜上的糖蛋白和糖脂）來(lái)確定的，這種抗原或凝集原是由遺傳決定的?？贵w或凝集素存在于血清中，它與紅

2、細(xì)胞的不同抗原起反應(yīng)，產(chǎn)生凝集，最后溶解，由于這種現(xiàn)象，臨床上在輸血前必須注意鑒定血型，以確保安全輸血。通常輸血反應(yīng)中大多數(shù)注意ABO血型系統(tǒng)。,最早的輸血試驗(yàn)是英國(guó)人羅維爾在1665年進(jìn)行的。他把一條失血過(guò)多瀕于死亡的狗的靜脈與另一條健康狗的靜脈用鵝毛管連接起來(lái)。失血的狗逐漸從瀕死狀態(tài)恢復(fù)過(guò)來(lái)。 1667年，法國(guó)國(guó)王的御醫(yī)丹尼斯首先進(jìn)行了動(dòng)物血液輸人人體的試驗(yàn)。他將400毫升羊血注入一個(gè)失血多病的青年人的靜脈，這個(gè)青年人竟奇跡

3、般地活了下來(lái)。此后他又進(jìn)行了多次輸血試驗(yàn)，也安然無(wú)恙。但他在1668年的一次試驗(yàn)中，卻以失敗而告終。他給一名患者輸動(dòng)物血，第一次輸血后病人病情有所好轉(zhuǎn)；第二次輸血后，病人出現(xiàn)發(fā)熱、腹痛、大汗、血尿等癥狀，第三次輸血后病人死亡。死者妻子告丹尼斯犯有殺人罪，為此，法國(guó)議會(huì)特別制定法律：不許再進(jìn)行輸血。 1825年，英國(guó)的布倫德?tīng)栣t(yī)生從一個(gè)人直接輸血給另一個(gè)人首次成功，但是這一成功具有很大的偶然性。據(jù)醫(yī)書(shū)記載：19世紀(jì)末葉有346人接

4、受過(guò)輸血治療，另有129人被試圖輸人動(dòng)物的血液。當(dāng)時(shí)人們還沒(méi)有認(rèn)識(shí)到血型的不同，因輸血發(fā)生的事故時(shí)有發(fā)生，因此，輸血是要冒極大風(fēng)險(xiǎn)的。,輸血的變遷,蘭德斯坦納 （K.Landsteiner),1868年生于奧地利首都維也納。維也納大學(xué)醫(yī)學(xué)院畢業(yè)后，繼續(xù)留校，學(xué)習(xí)化學(xué)。1900年發(fā)現(xiàn)A、B、O3種血型。1919年在荷蘭巴庫(kù)的一所醫(yī)院工作。1922年赴美，受聘于洛克菲勒研究所。1930年獲諾貝爾生理學(xué)醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。1943年逝世。,蘭德斯

5、坦納的貢獻(xiàn),卡爾·蘭德斯坦納是奧地利著名醫(yī)學(xué)家，他因發(fā)現(xiàn)了Ａ、Ｂ、Ｏ血型而于１９３０年獲得諾貝爾醫(yī)學(xué)及生理學(xué)獎(jiǎng)。    １９００年，蘭德斯坦納在維也納病理研究所工作時(shí)，發(fā)現(xiàn)一個(gè)人的血清有時(shí)會(huì)與另一個(gè)人的紅細(xì)胞發(fā)生凝集。隨后，蘭德斯坦納進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)人的血液按紅細(xì)胞與血清中的不同抗原和抗體，可分為不同類(lèi)型，他以Ａ、Ｂ、Ｏ三個(gè)字母來(lái)代表他發(fā)現(xiàn)的三種不同類(lèi)型的血液。不同血型的血液混合在一起，就會(huì)發(fā)生凝

6、血、溶血現(xiàn)象。    １９０２年，蘭德斯坦納的兩名學(xué)生把實(shí)驗(yàn)范圍擴(kuò)大到１５５人，又發(fā)現(xiàn)了較為稀少的ＡＢ型血。１９２７年，國(guó)際上正式采納了蘭德斯坦納原定的字母命名，確定血型有Ａ、Ｂ、Ｏ、ＡＢ四種類(lèi)型。至此，現(xiàn)代血型系統(tǒng)正式確立。    蘭德斯坦納在認(rèn)識(shí)人類(lèi)血型方面的杰出研究成果，不僅為安全輸血和治療新生兒溶血癥提供了科學(xué)的理論基礎(chǔ)，而且對(duì)免疫學(xué)、遺傳學(xué)、法醫(yī)學(xué)的發(fā)展都

7、帶來(lái)了深遠(yuǎn)影響。,紅細(xì)胞血型血型（blood group）：人類(lèi)血液由遺傳控制的個(gè)體性狀之一，是血液的遺傳標(biāo)記(genetic marker) 紅細(xì)胞血型：指紅細(xì)胞表面抗原由遺傳所決定的個(gè)體差異廣義的血型概念：指包括血液、體液、分泌液、排泄物及組織細(xì)胞上，由遺傳所控制的個(gè)體性狀,,血型鑒定,紅細(xì)胞上不含有Ａ、Ｂ抗原，而血清中含有抗Ａ和抗Ｂ抗體稱(chēng)為Ｏ型。,紅細(xì)胞上含有Ａ抗原，而血清中含有抗Ｂ抗體的稱(chēng)為Ａ型,紅細(xì)胞上含有Ｂ抗原

8、，而血清中含有抗Ａ抗體的稱(chēng)為Ｂ型,紅細(xì)胞上含有Ａ和Ｂ抗原，而血清中無(wú)抗Ａ、抗Ｂ抗體的稱(chēng)為ＡＢ型,父母的血型與子女的血型關(guān)系,人類(lèi)血型有數(shù)十億種之多。人類(lèi)除同卵雙生子女外，再也找不到兩個(gè)血型完全相同的人。,Rh血型,Rh是恒河猴（Rhesus Macacus）外文名稱(chēng)的頭兩個(gè)字母。蘭德斯坦納等科學(xué)家在1940年做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)時(shí)，發(fā)現(xiàn)恒河猴和多數(shù)人體內(nèi)的紅細(xì)胞上存在Rh血型的抗原物質(zhì)，故而命名的。凡是人體血液紅細(xì)胞上有Rh抗原（又稱(chēng)D抗

9、原）的，稱(chēng)為Rh陰性。這樣就使已發(fā)現(xiàn)的紅細(xì)胞A、B、O及AB四種主要血型的人，又都分別一分為二地被劃分為Rh陽(yáng)性和陰性?xún)煞N。,隨著對(duì)Rh血型的不斷研究，認(rèn)為Rh血型系統(tǒng)可能是紅細(xì)胞血型中最為復(fù)雜的一個(gè)血型系。Rh血型的發(fā)現(xiàn)，對(duì)更加科學(xué)地指導(dǎo)輸血工作和進(jìn)一步提高新生兒溶血病的實(shí)驗(yàn)診斷和維護(hù)母嬰健康，都有非常重要的作用。根據(jù)有關(guān)資料介紹，Rh陽(yáng)性血型在我國(guó)漢族及大多數(shù)民族人中約占99.7%，個(gè)別少數(shù)民族約為90%。在國(guó)外的一些民族中，Rh陽(yáng)

10、性血型的人約為85%，其中在歐美白種人鐘，Rh陰性血型人約占15%。,實(shí)驗(yàn)材料及試劑,顯微鏡、載玻片、刺血針、消毒牙簽、A型和B型標(biāo)準(zhǔn)血清、生理鹽水、酒精棉球。 受檢者血液75%乙醇、瑞氏染液、磷酸鹽緩沖液,1．取一塊清潔玻片，用蠟筆劃上記號(hào)，左上角寫(xiě)A字，右上角寫(xiě)B(tài)字。2．用小滴管吸A型標(biāo)準(zhǔn)血清（抗B）一滴加入左側(cè)，用另一小滴管吸B型標(biāo)準(zhǔn)血清（抗A）一滴加入右側(cè)。3．穿刺手指取血，玻片的每側(cè)各放入一小滴血，用牙簽攪拌，使每側(cè)

11、抗血清和血液混和。每邊用一支牙簽，切勿混用。,【方法與步驟】,組長(zhǎng)領(lǐng)取實(shí)驗(yàn)用品：每?jī)山M一盒血型檢測(cè)試劑每?jī)扇艘恢徊裳P每人三片載玻片、一個(gè)采血針,①,②,抗A,抗B,采血前用75％酒精棉球消毒受試者的無(wú)名指指腹,采血,第一、第二滴血滴加于A(yíng)BO血型檢測(cè)試劑液滴中，用牙簽將血液和試劑混合第三滴血滴加于一干凈的載玻片一端,抗A,抗B,血液與試劑混合后，靜置5-15分鐘后觀(guān)察結(jié)果,推片：擠出第三滴血置于載玻片的右側(cè),再取另一張邊緣光滑

12、的載玻片，斜置于血滴的前緣，先向后稍移動(dòng)輕輕觸及血滴，使血液沿玻片端展開(kāi)成線(xiàn)狀。,,,,30~45°,兩玻片的角度以30-45°為宜，輕輕將推片向前快速而均勻地推進(jìn)，形成頭尾明顯的舌形血膜。靜置使其干燥。,染色,待涂片在空氣中完全干燥后，滴加3-4滴瑞氏染液蓋滿(mǎn)血膜為止，染色30秒。然后滴加等量磷酸鹽緩沖液，使其與染液均勻混合靜置10～15 min用蒸餾水沖去染液，吸水紙吸干，室溫下干燥后顯微鏡觀(guān)察。,觀(guān)察有無(wú)凝

13、集，并按下表判定結(jié)果,呈現(xiàn)均勻的淡紅色時(shí)，表明不凝集，用“一”號(hào)表示。 在試劑里凝結(jié)成絮團(tuán)狀，形成鮮明的對(duì)比，表明凝集，用“十”號(hào)表示。,血涂片鏡檢結(jié)果-紅細(xì)胞,中性粒細(xì)胞,細(xì)胞核形態(tài)多樣，呈臘腸、分葉、桿狀等胞質(zhì)呈粉紅色，含淡紫色或淡紅色顆粒,淋巴細(xì)胞,小、中、大淋巴細(xì)胞細(xì)胞核圓形，著色深，占細(xì)胞大部分胞質(zhì)少，嗜堿性，被染成蔚藍(lán)色，含少量嗜天青顆粒,單核細(xì)胞,白細(xì)胞中體積最大的細(xì)胞細(xì)胞呈圓形或橢圓形細(xì)胞核形態(tài)多樣，呈卵圓形