土壤微生物研究土壤采集方法

1、土壤微生物研究規(guī)范土壤微生物研究規(guī)范——II.土壤樣品的運(yùn)輸和貯存土壤樣品的運(yùn)輸和貯存1.土壤微生物樣品的運(yùn)輸土樣從采集點(diǎn)到實(shí)驗(yàn)室往往需要經(jīng)歷一定時(shí)間的運(yùn)輸，土樣運(yùn)輸過(guò)程中難免影響土壤的溫度、水分、氧氣等環(huán)境條件，所以要盡快置于黑暗、低溫（4℃）的密閉環(huán)境，盡量維持土壤含水量穩(wěn)定不變，黑暗環(huán)境是為了避免光照下藻類在土壤表明的生長(zhǎng)，低溫是為了減少細(xì)菌繁殖，維持微生物區(qū)系穩(wěn)定。一般裝于聚乙烯袋子，并松扎。另外，儲(chǔ)存時(shí)盡可能避免物理壓實(shí)，樣品

2、袋不要堆疊過(guò)多，以免破壞土壤原有的團(tuán)粒結(jié)構(gòu)，并導(dǎo)致底層樣品處于厭氧環(huán)境。微生物取樣的土壤樣品需要在04℃的條件下保存，所以土壤樣品應(yīng)及時(shí)保存在保溫箱或冰箱中（設(shè)置04℃），并最好在一周內(nèi)完成前期處理。如果采集地有冰箱、熏蒸所需的真空干燥器和通風(fēng)櫥等設(shè)施，建議將微生物土壤樣品熏蒸浸提后，以冷凍的浸提液保存在塑料小瓶中，以方便運(yùn)送。如果采集地沒有通風(fēng)櫥等設(shè)施，建議將所取的土壤樣品過(guò)篩后冷藏在保溫箱中，以方便運(yùn)送。具體的流程如下：（1）提前準(zhǔn)

3、備好保溫箱及冷凍好的冰板。冰板需要提前12d冷凍，可以再用自封袋裝一定量水分放平冷凍為規(guī)則的冰塊備用。（2）按照微生物取樣規(guī)范進(jìn)行取樣，及時(shí)過(guò)篩去除根系、土壤動(dòng)物等雜質(zhì)，放置在04℃保鮮冰箱中保存。用于DNA或RNA分析的土壤樣品應(yīng)用干冰速凍。用于RNA分析的土壤樣品在運(yùn)輸過(guò)程中應(yīng)用干冰保持低溫。用于DNA分析的土壤樣品應(yīng)用冰盒運(yùn)輸，也可用干冰。（3）運(yùn)輸當(dāng)天將土壤樣品密封好，放入保溫箱中，保溫箱底部、四周及頂部均放置冰板和用自封袋密封

4、的冰塊，保證樣品四周均可接觸冰板或冰塊。注意保證土壤樣品和冰塊分別密封，以防路途中融化的水分進(jìn)入土壤樣品造成污染。（4）到達(dá)目的地后，迅速將樣品放入保鮮冰箱（04℃）保存待測(cè)。如果采樣地條件允許，可以根據(jù)規(guī)范上的實(shí)驗(yàn)方法，將樣品熏蒸、浸提后保存在塑料小方瓶中，20℃冷凍，然后再按照上述流程放置保溫箱中運(yùn)送到目的地，迅速放置在冷凍冰箱中（20℃）保存待測(cè)。如果購(gòu)買不到保溫箱，可以選用運(yùn)輸水果、蔬菜等的白色泡沫箱，密封嚴(yán)實(shí)后亦可。由于泡沫箱

5、保溫效果可能不及保溫箱，路途較遠(yuǎn)時(shí)應(yīng)多放置冰板及5）特別要注意微生物樣品在實(shí)驗(yàn)室保存和分析過(guò)程中的密封，以免凝結(jié)的水汽或其他污染源對(duì)樣品造成污染。6）每份樣品保存量不能過(guò)多，不同樣品之間避免堆疊，以免下部樣品由于擠壓形成厭氧環(huán)境。2.2微生物樣品的儲(chǔ)存時(shí)間1）待測(cè)樣品的短期保存對(duì)于不同微生物種類的最適宜保存溫度并不相同，低溫也可以造成某些微生物的死亡，到目前為止尚不能確定低溫確實(shí)可以保持原有微生物區(qū)系不變，因此土壤微生物樣品要求在最短的

6、時(shí)間內(nèi)分析。一般認(rèn)為土壤鮮樣4℃下可保存一周，土壤浸提液20℃下可保存一個(gè)月。ISO10381認(rèn)為一般土壤微生物樣品在進(jìn)行分析前最長(zhǎng)可以保存3個(gè)月，如果用于DNA分析應(yīng)保存在20℃條件下，用于RNA分析則保存在80℃條件下。2）土壤微生物樣品的長(zhǎng)期保存（大于3個(gè)月）根據(jù)保存年限和針對(duì)的指標(biāo)的不同，樣品應(yīng)保存在20℃、80℃或180℃條件下（表IV1）。已證實(shí)溫帶土壤樣品在20℃保存12月不會(huì)抑制微生物活性（如氨氧化活性）。而且用于磷酸脂

7、肪酸（PLFA）和DNA分析的樣品可以在20℃保存1到2年。用于RNA分析土壤樣品也可在80℃保存1到2年。用于DNA、RNA和PLFA分析用的土壤樣品推薦使用液氮速凍法。表IV1IV1好氣條件下土壤樣品的儲(chǔ)存條件和年限好氣條件下土壤樣品的儲(chǔ)存條件和年限鮮樣（4℃）鮮樣（20℃）a鮮樣（80℃）或液氮（180℃）a指標(biāo)引用標(biāo)準(zhǔn)月年年P(guān)LFA，PLEL——b210DNA——210RNA————10生物量基質(zhì)誘導(dǎo)呼吸法氯仿熏蒸浸提法ISO1