土壤微生物的分離與鑒定

1、土壤微生物的分離與鑒定土壤微生物的分離與鑒定組員：鞏鵬鵬、高艷雙、顧斐、曹凌雪、白相林、楊金玉組員：鞏鵬鵬、高艷雙、顧斐、曹凌雪、白相林、楊金玉實驗時間：實驗時間：2006年12月11號——2007年1月15號關(guān)鍵詞：土壤微生物，分離鑒定，生理生化，關(guān)鍵詞：土壤微生物，分離鑒定，生理生化，實驗摘要：實驗摘要：土壤是微生物的良好生境，土壤中有多種類群的微生物，它們對自然界物質(zhì)的轉(zhuǎn)化和循環(huán)起著極為重要的作用，對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和環(huán)境保護(hù)有著不可忽視

2、的影響。根際微生物與植物的關(guān)系特別密切，不同的土壤和植物對根際微生物產(chǎn)生顯著影響，而不同的根際微生物由于其生理活性和代謝產(chǎn)物的不同，也將對土壤肥力和植物營養(yǎng)產(chǎn)生積極或消極的作用。土壤微生物不僅對土壤的肥力和土壤營養(yǎng)元素的轉(zhuǎn)化起著重要作用，而且對于進(jìn)入土壤中的農(nóng)藥及其他有機(jī)污染物的自凈、有毒金屬及其化合物在土壤環(huán)境中的遷移轉(zhuǎn)化等都起著極為重要的作用。土壤中微生物的數(shù)量因土壤類型、季節(jié)、土層深度與層次等不同而異。一般地說，在土壤表面，由于日

3、光照射及干燥等因素的影響，微生物不易生存，離地表10cm～30cm的土層中菌數(shù)最多，隨土層加深，菌數(shù)減少。土壤中微生物以細(xì)菌數(shù)量最多，為幾百萬個克土至幾億個克土，有各種生理類群，營養(yǎng)類型多屬異養(yǎng)型，鑒別染色多為革蘭氏陽性。放線菌含量為幾萬個克土至幾百萬個克土，但其生物量不比細(xì)菌低，因為菌絲體積較大。土壤中真菌含量為幾千個克土至幾十萬個克土，而其生物量常比細(xì)菌的大。酸性土壤中真菌較多。藻類在土壤中的含量不及微生物總數(shù)的1％，生長在潮濕土壤

4、的表層。原生動物在富含有機(jī)質(zhì)的土壤中較多。通過土壤微生物的分離與計數(shù)及劃線純化，涂布分離長出的單菌落，須經(jīng)劃線純化，再轉(zhuǎn)斜面培養(yǎng)后保藏備用。涂布分離細(xì)菌的平板，溫箱培養(yǎng)2d～3d后，于室溫下放置3d或2d，使菌落性狀表現(xiàn)較充分，然后挑取各單菌落的部分培養(yǎng)物，在預(yù)先制備好的平板上劃線純化。達(dá)到分離純化認(rèn)識土壤中微生物的目的，并掌握各種相關(guān)實驗操作技術(shù)。實驗原理：實驗原理：(一)對土壤中微生物的分離篩選及鑒定從混雜的微生物群體中獲得只含有某

5、一種或某一株微生物的過程成為微生物的分離與純化，常用的方法有簡易的細(xì)胞挑取法和平板分離法。其中平板分離法操作簡單，普遍用于微生物的分離與純化，奇跡般原理包括兩個方面：（1）遜則適合于待分離微生物的生長條件如營養(yǎng)，酸堿度，溫度或氧等要求或加入某種抑制劑造成只有利于該種微生物生長，而抑制其它微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物。（2）微生物在固體培養(yǎng)基上生長形成單個的菌落可以是由一個細(xì)胞生長繁殖形成的集合體。因而可以通過挑取單個菌落

6、而獲得一種純培養(yǎng)，或去掉那個菌落的方法可由稀釋涂布和平板劃線等技術(shù)完成。土壤是微生物生活的大本營，它所含有的微生物無論是數(shù)量還是種類都是極其豐富的。土壤是微生物多樣性的重要場所，是發(fā)掘微生物資源的重要基地，可以從中分離純化得到許多有價值的微生物菌株。菌株的鑒定的生理生化實驗糖發(fā)酵與氧化試驗在細(xì)菌的分類鑒定中，糖類發(fā)酵與氧化測定是一項重要依據(jù)。特別是對細(xì)菌的鑒定尤為重要。常用的發(fā)酵與氧化的糖類包括單糖，雙糖，多糖三類：如葡萄糖，蔗糖，淀粉

7、一、分離與純化1.準(zhǔn)備將內(nèi)裝90ml的蒸餾水和玻璃珠若干的三角瓶、已配好的培養(yǎng)基、涂布棒、試管（內(nèi)裝9ml蒸餾水）若干、平皿若干放入高壓鍋高溫滅菌。2.稀釋將土壤樣品10g加入90ml滅菌水中振蕩20分鐘，形成土壤懸濁液，取1ml加入裝有9ml滅菌水試管中振蕩形成102稀釋，依次將土壤樣品稀釋103、104、105、106、1073.涂布平板將105、106、107的稀釋樣品分別涂布到已制好的固體培養(yǎng)基平板上，每種涂3個平板。4.培養(yǎng)將

8、平板置于37。C恒溫培養(yǎng)三天。5.分離從平板中挑取單個菌落進(jìn)行平板劃線分離培養(yǎng)，培養(yǎng)2天，共選了4種菌。6.純化將劃線長出的菌接種于已準(zhǔn)備好的固體斜面培養(yǎng)基中。培養(yǎng)2天。7.鏡檢對平板中的4種菌分別進(jìn)行美藍(lán)染色、革蘭氏染色、芽孢染色，放在顯微鏡下觀察，并記錄結(jié)果。8.保種將長出菌的斜面放入冰箱中保存。二、生理生化實驗（一）糖類發(fā)酵與氧化實驗一、器具或材料試管、接種針、恒溫箱等糖類發(fā)酵與氧化實驗培養(yǎng)基（半固體）二、操作步驟1、接種：以移接

9、18—24小時待鑒定的菌用接種針穿刺接種。接4支，其中2支用滅菌的凡士林或石蠟洋菜上封蓋，以隔絕空氣為閉管，另2支不封為開管，同時要有不接種的閉管作對照。2、培養(yǎng)：置于37度恒溫箱中，培養(yǎng)8—16個小時，1天、3天和7天3、觀察：在上述培養(yǎng)時間內(nèi)觀察試管中指示劑的變化情況三、結(jié)果在8小時、16小時檢查，若培養(yǎng)基柱上部變黃，下部仍為綠色，則證明為氧化型，全部變黃或下部變黃上部為綠，則為發(fā)酵型。（二）過氧化酶測定一、器具與材料試管、培養(yǎng)皿、