腦心同治理論與丹紅注射液研究

1、腦心同治理論與丹紅注射液對(duì)腦缺血性損傷保護(hù)機(jī)制研究,浙江中醫(yī)藥大學(xué) 萬(wàn)海同 教授2015.4.25,,,萬(wàn)海同 二級(jí)教授 首席教授 博導(dǎo) 所長(zhǎng) 院長(zhǎng),國(guó)家百千萬(wàn)人才工程專家享受國(guó)務(wù)院政府津貼人員國(guó)家中醫(yī)藥管理局“十二五”重點(diǎn)學(xué)科（中醫(yī)工程學(xué)） 帶頭人國(guó)家中醫(yī)藥管理局中醫(yī)臨床基礎(chǔ)重點(diǎn)學(xué)科 帶頭人浙江省高校腦血管病創(chuàng)新團(tuán)隊(duì) 負(fù)責(zé)人浙江省中西

2、醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腦心同治專業(yè)委員會(huì) 主任委員浙江省中西醫(yī)結(jié)合腦病重點(diǎn)學(xué)科 負(fù)責(zé)人浙江中醫(yī)藥大學(xué)心腦血管疾病研究所 所長(zhǎng)浙江中醫(yī)藥大學(xué)生物工程學(xué)院 院長(zhǎng)浙江省中醫(yī)藥重點(diǎn)學(xué)科（中藥藥物代謝動(dòng)力學(xué)） 帶頭人中華中醫(yī)藥學(xué)會(huì)中藥制劑分會(huì) 副主

3、任,,主要內(nèi)容,,一、心腦血管病是一復(fù)雜、難治性疾病，對(duì)人類危害嚴(yán)重,防治腦病已成為社會(huì)和醫(yī)學(xué)界廣泛關(guān)注的重要課題,死亡率居高不下,世界范圍： 死于心腦血管病1500萬(wàn)人/年； 占全球死亡人數(shù)的三分之一至二分之一； 是危害人類最大疾病。,中國(guó)：死于心腦血管病每天有7000人，每12秒鐘就有1人；首次發(fā)年齡，30%以上在60歲之前。,我國(guó)心腦血管疾病患者已經(jīng)超過(guò)2.7億人！我國(guó)每年死于心腦血管疾病300萬(wàn)人

4、！,幸存下來(lái)的患者：75%不同程度喪失勞動(dòng)能力；50%以上的腦血管意外幸存者生活不能完全自理；40%重殘。,我國(guó)腦中風(fēng)病人出院后第一年的復(fù)發(fā)率是30%，第五年的復(fù)發(fā)率高達(dá)59%；而二級(jí)預(yù)防做得較好的美國(guó)僅為10%。,各種危險(xiǎn)因素居高不下,中國(guó)目前總共有：1.6億高血壓患者；6000萬(wàn)糖尿病患者；1.6億人群血脂異常；2億人體重超標(biāo)；6000萬(wàn)人肥胖；還有大量煙民、酒客,更令人憂慮：城鄉(xiāng)差別不大；中年人與老年人患

5、病率接近；中風(fēng)與心肌梗塞、心力衰竭常伴隨發(fā)生。,二、抗血栓治療成為西醫(yī)學(xué)治療動(dòng)脈粥樣硬化、冠心病、腦梗死治療的重要基石,隨著心腦缺血性血管疾病發(fā)生率增加，越來(lái)越多患者需要長(zhǎng)期應(yīng)用抗血栓藥物，臨床常用抗凝藥物為華法林，抗血栓藥物多為氯吡格雷及阿司匹林等。尤其是抗血小板聚集藥已成為心腦血管疾病常規(guī)治療。,三、西醫(yī)學(xué)對(duì)腦梗死內(nèi)科治療仍是抗栓、溶栓等，有一定療效，但也有并發(fā)癥等,溶栓,降纖,血栓、栓子,血管堵塞,缺血損傷,,,抗血栓,迅

6、速?gòu)?fù)流,腦保護(hù),減慢缺血級(jí)聯(lián)反應(yīng),限制再損傷,,,,,,,,,,,易致出血性梗死,并發(fā)癥,再閉塞,,不足之處,,,不能改善 半暗區(qū)血供,,抗血小板藥物作用機(jī)制圖,偱證醫(yī)學(xué)新證據(jù)表明： 抗血栓西藥療效欠佳，并認(rèn)為抗血小板西藥是一把雙刃劍：在降低心腦血管不良事件的同時(shí)，許多抗血小板聚集西藥也帶來(lái)了出血并發(fā)癥。,抗血栓藥物主要分：抗血小板聚集藥、抗凝血藥、溶血栓藥,主要副作用：口服抗血栓藥物引起顱內(nèi)出血的發(fā)生率

7、在9-13％，死亡率超過(guò)50％抗凝溶栓對(duì)已形成血栓無(wú)直接溶栓作用，且溶栓易致出血性梗死(腦出血6.4%-19.8%，腦死亡率50%）和再閉塞等危險(xiǎn)阿司匹林藥物抵抗率達(dá)5.5%-61%,,,目前臨床上還缺少療效滿意的西藥, 通常采用中西醫(yī)結(jié)合的方法,三、步長(zhǎng)腦心通膠囊、丹紅注射液等活血化瘀、或益氣活血中藥已廣泛用于心腦血管疾病，如缺血性心臟病、缺血性中風(fēng)等）及血栓性疾病等，具有較好療效。,一、腦心同治理論繼承和發(fā)展了中醫(yī)的整體觀、辨證

8、施治理論,“天人合一”的整體觀“因時(shí)因地因人”辨證施治激發(fā)人體自身抗御疾病的特點(diǎn),中醫(yī)藥優(yōu)勢(shì),,二、腦心同治理論的依據(jù),中風(fēng)（腦卒中）胸痹（冠心?。?氣虛血瘀證,證屬,益氣活血 化瘀通絡(luò),治則,證同治則同,異病同治,趙步長(zhǎng)教授認(rèn)為,腦心同治理論對(duì)中風(fēng)、胸痹的認(rèn)識(shí),腦心同治理論的機(jī)制研究,,,,氣虛、血瘀、痰濁、絡(luò)阻 病機(jī),益氣、活血、化痰、通絡(luò) 治則,探討氣、血、痰（及瘀）、絡(luò)的相互

9、關(guān)系,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)證據(jù),,,,,,,,,,,,,《腦心同治》理論核心： 從整體觀角度來(lái)詮釋心腦血管?。ㄖ酗L(fēng)、胸痹）的證屬與病機(jī)、治則,（一）中醫(yī)角度,（二）中醫(yī)腦心同治理論與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)識(shí)的相關(guān)性,,,宏觀準(zhǔn)確性,微觀精確性,腦心同治理論對(duì)中風(fēng)胸痹認(rèn)識(shí)：,現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)心、腦血管病認(rèn)識(shí)：,,,,動(dòng)脈粥樣瘢塊形成及其后果,瘢塊開始形成,穩(wěn)定瘢塊,不穩(wěn)定瘢塊,瘢塊破裂,,,,,,,,,危險(xiǎn)因素: 高血壓、血脂異常

10、 糖尿病、吸煙、 肥胖（中心型）,動(dòng)脈粥樣硬化左室肥厚,,冠脈病變,,心肌缺血,,冠脈栓塞,,心肌、腦梗死,,心腦血管病事件鏈(continuum),神經(jīng)體液激活,,,,,心律失常心肌損失,,心性猝死,心臟重構(gòu),,,心室擴(kuò)大,,,心衰,心臟病終末期,,,,無(wú)癥狀,自然消退或增大,復(fù)原功能不良,短期死亡（≤28天）,晚期復(fù)發(fā)（﹥28天）,晚期死亡（﹥28天）,疾病狀態(tài),血管內(nèi)粥樣瘢塊

11、不斷發(fā)展,瘢塊或血栓的表面破裂,癥狀性缺血,猝死,動(dòng)脈硬化性心腦血管病自然進(jìn)程,,,,,,,,,,基礎(chǔ)病變 促發(fā)因素 急性事件 中期和晚期發(fā)展 （幾年至幾十年） （幾秒鐘或幾小時(shí)） （幾秒鐘或幾小時(shí)） （幾天至幾年）,時(shí)間順序,,,,,,,,,三、中醫(yī)藥防治心腦血管病常用藥,益 氣 藥：黃芪、太子參等活血化瘀

12、藥：水蛭、蜈蚣、地龍、全蝎 當(dāng)歸、川芎、丹參、紅花、 赤芍、桃仁、雞血藤、牛膝等理氣、通陽(yáng)藥：乳香、 沒(méi)藥、桂枝,配伍用藥 是中藥復(fù)方（或方劑）發(fā)揮藥效的關(guān)鍵，是中醫(yī)處 方用藥的核心方劑配伍基本內(nèi)容：“七情合和”與“君臣佐使”理論“君臣佐使”則表明中藥配伍中藥組分有主有次。主藥在治病中發(fā)揮主導(dǎo)作用，輔藥在

13、治療中促使主藥藥力得以充分發(fā)揮，同時(shí)抑制主藥的毒副作用。,中醫(yī)重視復(fù)方用藥及其中藥配伍理論,丹紅注射液、腦心通膠囊等中藥制劑相對(duì)于西藥抗血小板作用機(jī)制單一，具有多組分、多靶點(diǎn)作用特點(diǎn)。 意味著本品可能有更少耐藥性和更少副作用。,中藥具有多組分、多靶點(diǎn)的作用特征,四、中藥目前面臨的困惑“？”,中藥在醫(yī)學(xué)科學(xué)領(lǐng)域的作用逐漸被國(guó)內(nèi)外同行認(rèn)可和關(guān)注。困惑：中藥如何發(fā)揮作用？這些作用如何科學(xué)表達(dá)？中醫(yī)藥如何合理使用？如何達(dá)到中藥清楚定位

14、并做到“精準(zhǔn)用藥”？目前這些問(wèn)題尚不十分清楚國(guó)內(nèi)外同行基本一致認(rèn)同是：中藥作用物質(zhì)基礎(chǔ)說(shuō)不清中藥作用機(jī)理說(shuō)不清中藥（組分）相互作用說(shuō)不清質(zhì)量控制、安全問(wèn)題說(shuō)不清,中醫(yī)藥應(yīng)該在臨床有效的基礎(chǔ)上，更須多關(guān)注這些尚未能解決的中醫(yī)藥臨床應(yīng)用的疑難問(wèn)題，以便更好地為中醫(yī)臨床應(yīng)用服務(wù)。換言之: 中醫(yī)藥在這些方面的問(wèn)題得到解決，將會(huì)有力推動(dòng)中醫(yī)藥學(xué)科的快速發(fā)展，也會(huì)得到國(guó)際國(guó)內(nèi)同行和社會(huì)對(duì)中醫(yī)藥更為廣泛認(rèn)同的效果。,開展了丹紅注射

15、液、腦心通膠囊發(fā)揮治療冠心病、缺血性中風(fēng)等血瘀病證的系統(tǒng)研究,如：丹紅注射液如何發(fā)揮組分相互作用，組分體內(nèi)過(guò)程如何，哪些是具有生物活性的代謝產(chǎn)物，最終通過(guò)哪些環(huán)節(jié)、途徑發(fā)揮活血化瘀效應(yīng)最終實(shí)現(xiàn)整合調(diào)節(jié)治療冠心病、缺血性中風(fēng)等問(wèn)題。,,3,丹紅配伍的理論依據(jù),一、丹紅注射液的主要主要適用病證,丹紅注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20026866），是臨床上常用的、有效的中藥制劑。是銷售額最高的中藥制劑之一，近年，年銷售超過(guò)10億元。,具有活血化瘀、通脈

16、舒絡(luò)功效。用于瘀血閉阻所致的胸痹及中風(fēng)，證見：胸痛，胸悶，心悸，口眼歪斜，言語(yǔ)蹇澀，肢體麻木，活動(dòng)不利等癥。治療冠心病、心絞痛、心肌梗塞，缺血性腦病、腦血栓及肺心病所瘀諸癥。,運(yùn)動(dòng)是一箭多雕的成本效價(jià)比最高的預(yù)防心血管病的措施,,,,,,,,,,,,,高血壓,高血脂,糖尿病,肥胖,丹紅注射液一箭多雕預(yù)防心腦血管病機(jī)理？,腦梗死,冠心病,,,,丹紅注射液（國(guó)藥準(zhǔn)字Z20026866），為臨床上常用的、有效的中藥制劑。是銷售額最高

17、的中藥制劑之一。,丹紅注射液處方用量配比 : 丹參750g，紅花250g。,,二、丹紅配伍的理論依據(jù),丹參： 味苦，性微寒，歸心、肝經(jīng)，功效活血化瘀、涼血消腫、寧心安神。 紅花： 味辛，性溫，歸心、肝經(jīng)，辛散溫通，入血分，能活血祛瘀化滯、通調(diào)經(jīng)脈。二藥共奏活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)之功,,,,（一）HPLC-DAD測(cè)定丹紅注射液中的有效成分,6種有效成分紫外檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇,6種對(duì)照品混合溶液的濃度,A.丹參素鈉；B.原兒茶醛；

18、C.咖啡酸；D.迷迭香酸；E.丹酚酸B；F.丹酚酸A,結(jié)果表明： 丹參素、原兒茶醛、丹酚酸B、丹酚酸A 檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm； 咖啡酸、迷迭香酸檢測(cè)波長(zhǎng)為330 nm。,,三、丹紅注射液中化學(xué)成分及代謝產(chǎn)物研究,混合對(duì)照品溶液HPLC色譜圖,,,0,,,,,,5,,,,,,10,,,,,,15,,,,,,20,,,,,,25,,,,,,30,,,,,,35,,,,,,40,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,

19、,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,1,2,5,6,,t/min,A,,,0,,,,,,5,,,,,,10,,,,,,15,,,,,,20,,,,,,25,,,,,,30,,,,,,35,,,,,,40,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,3,4,B,t/min,C,,,0,,,,,,5,,,,,,10,,,,,,15,,,,

20、,,20,,,,,,25,,,,,,30,,,,,,35,,,,,,40,,,0,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,3,,t/min,D,1.丹參素；2.原兒茶醛；3.咖啡酸；4.迷迭香酸；5.丹酚酸B；6.丹酚酸AA.對(duì)照品溶液(280 nm)；B.對(duì)照品溶液(330 nm)；C.供試品溶液(NO. 110934 280 nm)；D.供試品溶液(NO. 110934

21、330nm),色譜條件：色譜柱：Eclipse XDB-C18 (4.6×150 mm，5μm) ；流動(dòng)相：A為乙腈，B為0.1%磷酸水溶液；柱溫為30℃；流速為1.0 mL?min-1.,流動(dòng)相梯度洗脫程序,結(jié)果表明：該色譜條件下，樣品液中6種成分與其他共存峰得到很好的分離。,10批丹紅注射液中6種成分及總黃酮含量(n=3),丹紅注射液樣品中有效成分含量的HPLC-DAD測(cè)定,丹紅注射液中6種成分的含量,結(jié)果表明：

22、色譜條件下，樣品液6種成分中丹酚酸A含量最高，咖啡酸含量最低，含量高低依次是丹酚酸A、丹參素、丹酚酸B、原兒茶醛、迷迭香酸、咖啡酸。,（二）對(duì)7批丹紅注射液進(jìn)行指紋圖譜檢測(cè) 1. 標(biāo)定了28個(gè)共有峰，7批丹紅注射液指紋圖譜相似度均大于0.980，表明工藝較穩(wěn)定、質(zhì)量可控。,,7批丹紅注射液指紋圖譜與對(duì)照指紋圖譜,2. 7批血漿、腦、肝臟組織樣品特征圖譜相似度均在0.92以上，說(shuō)明特征指紋圖譜相對(duì)穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可用于體內(nèi)成分定性分析

23、,,7批丹紅注射液15min血液中指紋圖譜 對(duì)照指紋圖譜,,7批丹紅注射液60 min腦中指紋圖譜 對(duì)照指紋圖譜,,,7批丹紅注射液60 min肝中指紋圖譜 對(duì)照指紋圖譜,3. LC-MS（QTrap 4500）質(zhì)譜分析丹紅注射液成分及其體內(nèi)代謝物,4.EMS-IDA-EP

24、I掃描模式：所有色譜峰可掃描到EPI譜圖， EMS展示107個(gè)掃描到最高峰化合物,丹紅注射液主要有效成分列表,丹參素提取離子流圖(XIC, m/z 197)及MS2,通過(guò)丹參素特征碎片離子m/z179掃描可以找到結(jié)構(gòu)類似物,原兒茶醛提取離子流圖(XIC , m/z 137)及MS2,羥基紅花黃色素A提取離子流圖(XIC , m/z 611→491)及MS2,丹酚酸B提取離子流圖(XIC , m/z 717)及MS2,MS3掃描

25、：丹酚酸A：RT10.4min，判斷二級(jí)碎片來(lái)源，比如二級(jí)碎片m/z159及m/z185來(lái)源,小結(jié)：丹紅注射液中有效成分主要是水溶性的酚酸類組分，極性較大。,5. 丹紅注射液代謝產(chǎn)物分析 丹紅注射液中水溶性酚酸類有效成分較多，極性較大；體內(nèi)I相代謝反應(yīng)，通過(guò)氧化、 還原、水解等途徑引入極性，使原藥極性增大，利于排泄。 主要以丹參素，迷迭香酸，原兒茶醛，原兒茶酸為目標(biāo)組分，尋找相應(yīng)代謝物.，丹紅注射液代謝產(chǎn)物

26、列表,丹參素(Danshensu, DSS)代謝物提取離子流圖及二級(jí)質(zhì)譜,原兒茶酸(Protocatechuic acid, DBA)代謝物提取離子流圖及二級(jí)質(zhì)譜,原兒茶醛(Protocaterchuic aldehyde, PA)代謝物提取離子流圖及二級(jí)質(zhì)譜,迷迭香酸(Rosmarinic acid, RA)代謝物提取離子流圖及二級(jí)質(zhì)譜,特征II相代謝物含量隨給藥時(shí)間變化的趨勢(shì)(Area：MRM),小結(jié)：EMS-IDA-EPI， MR

27、M-IDA-EPI, Pre/NL-IDA-EPI等多種掃描模式結(jié)合，發(fā)現(xiàn)注射液中含量較高的有效成分丹參素，原兒茶酸，原兒茶醛，迷迭香酸的II相代謝物，主要是甲基化，硫酸化，甲基化后硫酸化，葡萄糖醛酸化等一系列代謝物。各時(shí)間點(diǎn)代謝樣品中丹參素與迷迭香酸原形在代謝樣品未檢測(cè)到，僅檢測(cè)到代謝物。初步鑒定丹紅注射液中有效成分32個(gè)，同時(shí)鑒定了主要有效成分的代謝產(chǎn)物。,6. 羥基紅花黃色素A與MDA相關(guān)的藥效動(dòng)力學(xué)參數(shù),,9個(gè)組方時(shí)間-羥A

28、藥物濃度-MDA三維動(dòng)態(tài)模型,（1）丹紅注射液對(duì)神經(jīng)功能缺損癥狀的影響,,Day0 Day3 Day7 Day10 Day14,Neurological assessment,Neurological assessment,Neurological assessment,Neurological assessment,,,,M

29、CAO,大腦中動(dòng)脈栓塞模型（MCAO）示意圖,在MCAO模型再灌之后的1d、3d、7d、10d和14d進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分: 1.自主活動(dòng)(0-3) 2. 四肢運(yùn)動(dòng)的對(duì)稱性(0-3) 3. 前肢外伸(0-3) 4. 爬動(dòng)(1-3) 5.身體觸覺(1-3) 6.震動(dòng)覺(1-3) 其中

30、3分最差，18分正常 Garcia et al. Stroke, 1995. 26(4): 627-634,Day1 Day3 Day7 Day10 Day14,Neurological assessment,Neurological assessment,Neurological assessment,Neurolog

31、ical assessment,Neurological assessment,,,,,,,注：*P< 0.01 vs Sham，ΔP< 0.05 vs IRU，#P < 0.01 vs DHI-1,各組在大鼠腦缺血后不同時(shí)間點(diǎn)的神經(jīng)功能缺損評(píng)分,變化曲線,1,1,（2）丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血后腦梗死體積的影響,A 假手術(shù)組 B 模型組 C 丹紅注射液 0.5 ml/kg D 丹紅注射液 1.0 m

32、l/kg E丹紅注射液 2.0 ml/kg,MCAO法制作大腦中動(dòng)脈局灶性栓死模型,丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血后腦梗死體積的影響,注：* P<0.05，** P<0.01, 與對(duì)照組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)；# P<0.05,##P<0.01，與模型組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)?！鳳<0.05，與低劑量組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)。,丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血后腦梗死的影響,結(jié)果可見：丹紅注射液可使梗死總體積減少,與模型組相比具有顯著性差異 。,

33、,自由基過(guò)度形成,炎癥反應(yīng),,,纖溶系統(tǒng)受損,,興奮性氨基酸毒性,細(xì)胞凋亡,,,神經(jīng)系統(tǒng)損傷,（1）丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦皮質(zhì)SOD活力和MDA含量影響,丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦皮質(zhì)SOD活力和MDA含量的影響(?X±SD),注：* P<0.05，** P<0.01, 與對(duì)照組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)；# P<0.05，##P<0.01，與模型組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)；▲P<0.05，與低劑量組組比

34、較，F(xiàn)檢驗(yàn)。,丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦皮質(zhì)SOD活力的影響,丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦皮質(zhì)MDA含量的影響,結(jié)果表明：（1）腦缺血再灌注組與假手術(shù)組相比，SOD活力、MDA含量均具有顯著差異。（2）丹紅注射液可顯著提高腦缺血再灌注損傷大鼠腦皮質(zhì)SOD活力，高劑量組顯著降低腦缺血再灌注大鼠腦皮質(zhì)MDA含量。,（2）丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注大鼠腦皮質(zhì)6-Keto-PGFlα含量的影響,丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦

35、6-Keto-PGFlα含量的影響(?X±SD),注：* P<0.05，** P<0.01, 與對(duì)照組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)；# P<0.05，##P<0.01，與模型組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)；▲P<0.05，與低劑量組組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)。,結(jié)果表明：（1）腦缺血再灌注組與假手術(shù)組相比具有顯著差異；（2）丹紅注射液各組能顯著提高腦缺血再灌注損傷大鼠腦皮質(zhì)6-Keto-PGF1α的含量；（3）丹紅注射液中、高劑量與

36、低劑量相比具有顯著差異。,丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠腦6-Keto-PGFlα含量的影響,（3）丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大鼠血漿t-PA活性和PAI活性的影響,丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注大鼠血漿t-PA活性和PAI活性的影響 (X±SD),注：* P<0.05，** P<0.01, 與對(duì)照組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)；# P<0.05，與模型組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)。,t-PA：組織型纖溶酶原激活物；PAI：纖溶酶原激活物抑

37、制因子,結(jié)果表明：（1）腦缺血再灌注組與假手術(shù)組相比均具有顯著差異；（2）丹紅注射液各組與腦缺血再灌注組相比，可顯著提高t-PA活性，降低PAI活性，具有增強(qiáng)機(jī)體的纖溶功能、促進(jìn)血栓溶解的作用。,（4）丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注后 Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)的作用,各組缺血側(cè)大腦皮層Bcl-2 、Bax免疫組化陽(yáng)性細(xì)胞數(shù),注：* P<0.05，** P<0.01與假手術(shù)組比較；# P<0.05，##P

38、<0.01，與模型組比較，F(xiàn)檢驗(yàn)。,,,,,A Bcl-2假手術(shù)組，B Bcl-2 模型組，C Bcl-2丹紅注射液組， D Bax組， E Bax-假手術(shù)組，F(xiàn) Bax-丹紅注射液組,結(jié)果表明：（1）假手術(shù)與模型組相比，模型組缺血側(cè)大腦皮層Bcl-2免疫組化陽(yáng)性反映細(xì)胞數(shù)顯著增多。（2）丹紅注射液組與腦缺血再灌注模型組相比Bcl-2陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)顯著增多。（3）丹紅注射液與模型組相比，可使Bax蛋白的表達(dá)降低。（4）丹紅注射

39、液具有顯著調(diào)節(jié)Bcl-2/Bax蛋白的表達(dá)，抑制神經(jīng)元凋亡，保護(hù)腦組織的作用。,圖 2 微透析套管埋植,圖 1大腦中動(dòng)脈阻塞模型（MCAO）,（5）丹紅注射液對(duì)腦部微透析液氨基酸遞質(zhì)釋放的影響,丹紅注射液通過(guò)調(diào)節(jié)腦內(nèi)氨基酸遞質(zhì)的含量，對(duì)腦缺血起到一定的保護(hù)作用。,,丹紅注射液抑制炎癥因子TNF-α、IL-1β的表達(dá)，丹紅注射液對(duì)炎癥的抑制在腦缺血后恢復(fù)的過(guò)程中起著重要的作用。,開展的部分相關(guān)研究?jī)?nèi)容,（6）丹紅注射液對(duì)腦缺血再灌注損傷大

40、鼠腦組織TNF-α和IL-1β炎癥因子的影響,丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血后腦組織中TNF-α和IL-1β含量的影響,（7）丹紅注射液對(duì)大鼠大腦缺血后葡萄糖代謝的影響,分子影像技術(shù)能夠無(wú)創(chuàng)監(jiān)測(cè)生物體內(nèi)細(xì)胞和分子水平的生化過(guò)程，尤其是18F-FDG-PET（正電子發(fā)射斷層掃描技術(shù)）能夠定量地?zé)o創(chuàng)監(jiān)測(cè)葡萄糖代謝的變化，被廣泛應(yīng)用于腦血管病療效的評(píng)價(jià)。,利用18F-FDG-PET 來(lái)研究丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的作用，丹紅注射液組的R/N變

41、化值在給藥后7d、14d較模型組顯著增加，較好地促進(jìn)了梗死區(qū)葡萄糖代謝的恢復(fù)。,大鼠腦部FDG-PET橫斷切面的圖像,R/N變化值,梗死區(qū)周邊的GFAP（膠質(zhì)纖維酸性蛋白）免疫組化染色分析圖 ( #P < 0.01 vs Sham, **P < 0.01 vs IRU, ΔP < 0.05 vs DHI-1),（8）丹紅注射液對(duì)大鼠腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響,丹紅注射液促使腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞進(jìn)一步活

42、化，大量表達(dá)GFAP，從而促進(jìn)腦缺血后神經(jīng)功能的恢復(fù)。,丹紅注射液能夠明顯抑制缺氧誘導(dǎo)的腦內(nèi)皮細(xì)胞早期凋亡進(jìn)程和和G1/S期阻滯，且呈劑量依賴性。,采用原代培養(yǎng)的乳鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，建立缺氧損傷模型。,（9）丹紅注射液對(duì)乳鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用,正常組,模型組,尼莫地平組,100uL/mL組,50uL/mL組,25uL/mL組,,,A 正常組,B 模型組,C 丹紅注射液100uL/mL組,丹紅注射液對(duì)缺氧細(xì)胞超顯微結(jié)

43、構(gòu)的影響（6K×）,與正常組比較：▲▲P＜0.01；與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01,丹紅注射液對(duì)缺氧損傷的rBMECs SOD活性和MDA水平的影響（x±s，n=6）,A 正常組,B 模型組,C 丹紅注射液100uL/mL組,RT-PCR法檢測(cè)P53、MMP-9、ICAM-1 mRNA的表達(dá),擴(kuò)增曲線圖,溶解曲線圖,擴(kuò)增曲線拐點(diǎn)清楚，整體平行性好，基線平而無(wú)上揚(yáng)現(xiàn)象，曲線指數(shù)期斜率與擴(kuò)增效率成正比，

44、各反應(yīng)管的擴(kuò)增曲線平行性好，表明擴(kuò)增效率良好且相近。 溶解曲線直接表示了引物的特異性，TM值基本都在80-90度之間，三個(gè)引物都出現(xiàn)單一峰，說(shuō)明特異性擴(kuò)增良好。,,下調(diào)P53 mRNA表達(dá)來(lái)抑制rBMEC早期凋亡和G1/S期阻滯； 下調(diào)ICAM-1 mRNA表達(dá)介導(dǎo)黏附反應(yīng)、促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞遷移、降低內(nèi)皮細(xì)胞活性； 下調(diào)MMP-9 mRNA表達(dá)促進(jìn)血管生成。,以正常組為對(duì)照進(jìn)行相對(duì)定量分析，丹紅注射液100、50

45、uL/mL均能明顯降低MMP-9、ICAM-1、P53 mRNA的表達(dá)水平。,藥物通過(guò)小腸上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)途徑示意圖,體外Caco-2細(xì)胞模擬體內(nèi)吸收，考察丹紅注射液的主要有效成分配伍在口服給藥后的吸收效果。,,轉(zhuǎn)運(yùn)樣品HPLC檢測(cè),（10）丹紅注射液主要有效成分配伍體外吸收特性,,R2X(cum)=0.646,,(11）丹紅注射液調(diào)節(jié)血脂代謝的作用,以高脂血癥大鼠為模型，通過(guò)生化、分子生物學(xué)及代謝組學(xué)技術(shù)與方法，探討丹紅注射液在調(diào)節(jié)血脂代

46、謝方面的作用機(jī)理，為其治療脂代謝相關(guān)疾病提供科學(xué)理論依據(jù)。,,,He Y, Wan H, Du Y. et al. Protective effect of Danhong injection on cerebral ischemia-reperfusion injury in rats. Journal of Ethnopharmacology, 2012, 144(2): 387-394.（SCI收錄，影響因子3.014）黃翔,何

47、昱,楊潔紅,等. HPLC-DAD法與UV-VIS法對(duì)丹紅注射液有效成分和有效部位的質(zhì)量控制研究.中華中醫(yī)藥雜志, 2013,04(28）（國(guó)家一級(jí)）周鵬,周惠芬,何昱,等.丹紅注射液對(duì)乳鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞缺氧損傷的保護(hù)作用.中草藥, 2013,44(19):2727-2731. （國(guó)家一級(jí)）Zefeng Wang, Fahuan Song, Jinhui Li, et al. PET Demonstrates Functional

48、 Recovery after Treatment by Danhong Injection in a Rat Model of Cerebral Ischemic-Reperfusion Injury，Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine,2014 (2014), Article ID 430757, 9 （SCI收錄,影響因子4.774）Ju

49、an Chen, Jun Deng，Yuyan Zhang, et al. Lipid-lowering effects of Danhong injection on hyperlipidemia rats.Journal of Ethnopharmacology，2014，154 (2)：437-442. （SCI收錄，影響因子3.014）汪興宇,張宇燕,萬(wàn)海同,等.參芎注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.中國(guó)中藥雜志，201

50、4，39（3）：503-506. （國(guó)家一級(jí)）周鵬,周惠芬,何昱,等.羥基紅花黃色素A在Caco-2 細(xì)胞單層模型的轉(zhuǎn)運(yùn)研究.中草藥，2014，45（14）：2030-2035. （國(guó)家一級(jí)）舒明春,萬(wàn)海同,周惠芬,等.谷紅注射液抗腦缺血性再灌注損傷的作用及其機(jī)制.中國(guó)中藥雜志，2014，39（23）：44-48. （國(guó)家一級(jí)）艾進(jìn)超,周惠芬,舒明春,等.丹參素在局灶性腦缺血大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)-藥效學(xué)相關(guān)性研究.中國(guó)中藥雜志，2014

51、，39（14）（國(guó)家一級(jí)）戴柳玲,萬(wàn)海同,周惠芬,等.谷紅注射液對(duì)缺糖缺氧致乳鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.中國(guó)藥學(xué)雜志，2014,49(21)（國(guó)家一級(jí)）管敏國(guó),張宇燕,萬(wàn)海同,等.丹參川芎有效成分配伍對(duì)缺氧損傷大鼠腦內(nèi)皮細(xì)胞的影響.安徽中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2014,12(21）（國(guó)家二級(jí)）周鵬,何昱,楊潔紅，等.丹紅注射液對(duì)缺氧損傷腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制.中國(guó)中藥雜志，2014,39(23)：59-63. （國(guó)家一級(jí)）王

52、玉,溫偉為,張宇燕,等.基于析因設(shè)計(jì)的丹紅注射液活性物質(zhì)配伍抗神經(jīng)元損傷的交互作用.中國(guó)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2014,20(17):（國(guó)家二級(jí)）Effects of Danhong injection and its main components on anticoagulation and fibrinolysis in cultured HUVECs, Chinese Journal of Integrative Medicine,已

53、修回（SCI收錄,影響因子1.401）周惠芬,艾進(jìn)超,舒明春,等.丹紅注射液體內(nèi)外指紋圖譜分析研究.中華中醫(yī)藥學(xué)刊,已錄用（國(guó)家一級(jí)）周惠芬,周鵬,何昱,等.丹紅有效成分配伍對(duì)缺氧損傷腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用.中國(guó)中藥雜志,已錄用（國(guó)家一級(jí)）申杰,何昱,楊潔紅,等.腦心同治理論與實(shí)踐探討.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),已錄用（國(guó)家二級(jí)）周惠芬,何昱,張宇燕,等.參芎注射液對(duì)缺血再灌注損傷大鼠炎癥損傷的影響.中國(guó)中藥雜志,已修回（國(guó)家一級(jí)）

54、丹紅注射液及有效成分對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用機(jī)制研究The protective effect of Danhong injection on the brain dopamine in the rat model of cerebral ischemia/reperfusion injuryEffects of GuHong injection on cerebral TNF-α, IL-1β and MMP-9 in

55、rats experienced focal cerebral ischemia/reperfusionDetermination of three kinds of amino acids neurotransmitters in the tissue of the rats by HPLC electrochemical methodEffects of Shenxiong Injection on cerebral ische

56、mia-reperfusion inflammatory injury of rats基于K+/Glu激活鈣信號(hào)通路探討丹紅注射液對(duì)神經(jīng)保護(hù)機(jī)制研究杜成昊,張宇燕,萬(wàn)海同,等.從中西醫(yī)角度探討“腦心同治論”理論內(nèi)涵.浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腦心同治第二次學(xué)術(shù)年會(huì)，2014年6月.申杰,何昱,楊潔紅,等.腦心同治理論與實(shí)踐探討.浙江省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)腦心同治第二次學(xué)術(shù)年會(huì)，2014年6月.韓進(jìn),張宇燕.從氣虛血瘀之代表方補(bǔ)陽(yáng)還五湯論證腦