由目的、方法、結(jié)果和結(jié)論4部分構(gòu)成

1、稀有鮈鯽稀有鮈鯽(Gobiocyprisrarus)血清中卵黃蛋白原的檢測血清中卵黃蛋白原的檢測——基于多基于多單克隆抗體的酶聯(lián)免疫吸附方法的建立單克隆抗體的酶聯(lián)免疫吸附方法的建立駱文茹周群芳江桂斌中國科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心，環(huán)境化學(xué)與生態(tài)毒理學(xué)國家重點實驗室，北京，100085聯(lián)系人，Email：gbjiang@rcees.目的：目的：卵黃蛋白原是一種理想的環(huán)境雌激素生物標(biāo)志物，目前已被廣泛應(yīng)用于環(huán)境內(nèi)分泌干擾物研究領(lǐng)域中。本研究分別

2、應(yīng)用單克隆抗體和多克隆抗體建立間接競爭酶聯(lián)免疫吸附方法，特異性檢測稀有鮈鯽血清中的卵黃蛋白原，為進(jìn)一步研究環(huán)境雌激素的生物效應(yīng)打下基礎(chǔ)。方法：方法：將稀有鮈鯽暴露于添加了雌二醇（1?gmL）的脫氯水中，五周后采集血液，離心分離血清。應(yīng)用高效陰離子交換膜色譜純化血清中的卵黃蛋白原，并通過凝膠電泳和免疫印跡方法對該蛋白進(jìn)行鑒定。采用常規(guī)免疫方法分別免疫新西蘭兔和Blabc小鼠，制備稀有鮈鯽卵黃蛋白原兔源多克隆抗體和鼠源單克隆抗體。然后，分別

3、基于稀有鮈鯽卵黃蛋白原的多克隆抗體和單克隆抗體建立間接競爭酶聯(lián)免疫吸附方法，并將其應(yīng)用于實際血樣的檢測。結(jié)果：結(jié)果：從雌二醇誘導(dǎo)的稀有鮈鯽血清中成功的純化了卵黃蛋白原，并制備了相應(yīng)的多單克隆抗體。免疫印跡分析結(jié)果表明，制備的多單克隆抗體具有很高的特異性，其不與稀有鮈鯽血清中的其他蛋白結(jié)合。優(yōu)化多個實驗參數(shù)后，分別建立了基于稀有鮈鯽卵黃蛋白原多單克隆抗體的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附方法：方法的檢測限分別為2.2和2.6ngmL，線性范圍分別為3

4、.98000和3.92000ngmL(R20.99)，回收率分別為104.2?10.0%和102.6?22.8%。分別應(yīng)用這兩種方法對同一批稀有鮈鯽血清樣品進(jìn)行卵黃蛋白原的分析檢測，兩種方法的檢測結(jié)果一致。結(jié)論：結(jié)論：本研究中建立的基于多單克隆抗體的稀有鮈鯽卵黃蛋白原檢測方法能夠有效的檢測稀有鮈鯽血清中的卵黃蛋白原，具有良好的應(yīng)用前景。關(guān)鍵詞：關(guān)鍵詞：稀有鮈鯽卵黃蛋白原多單克隆抗體酶聯(lián)免疫吸附稀有鮈鯽稀有鮈鯽(Gobiocyprisra

5、rus)血清中卵黃蛋白原的檢測血清中卵黃蛋白原的檢測——基于多基于多單克隆抗體的酶聯(lián)免疫吸附方法的建立單克隆抗體的酶聯(lián)免疫吸附方法的建立駱文茹周群芳江桂斌中國科學(xué)院生態(tài)環(huán)境研究中心，環(huán)境化學(xué)與生態(tài)毒理學(xué)國家重點實驗室，北京，100085聯(lián)系人，Email：gbjiang@rcees.目的：目的：卵黃蛋白原是一種理想的環(huán)境雌激素生物標(biāo)志物，目前已被廣泛應(yīng)用于環(huán)境內(nèi)分泌干擾物研究領(lǐng)域中。本研究分別應(yīng)用單克隆抗體和多克隆抗體建立間接競爭酶聯(lián)免

6、疫吸附方法，特異性檢測稀有鮈鯽血清中的卵黃蛋白原，為進(jìn)一步研究環(huán)境雌激素的生物效應(yīng)打下基礎(chǔ)。方法：方法：將稀有鮈鯽暴露于添加了雌二醇（1?gmL）的脫氯水中，五周后采集血液，離心分離血清。應(yīng)用高效陰離子交換膜色譜純化血清中的卵黃蛋白原，并通過凝膠電泳和免疫印跡方法對該蛋白進(jìn)行鑒定。采用常規(guī)免疫方法分別免疫新西蘭兔和Blabc小鼠，制備稀有鮈鯽卵黃蛋白原兔源多克隆抗體和鼠源單克隆抗體。然后，分別基于稀有鮈鯽卵黃蛋白原的多克隆抗體和單克隆抗

7、體建立間接競爭酶聯(lián)免疫吸附方法，并將其應(yīng)用于實際血樣的檢測。結(jié)果：結(jié)果：從雌二醇誘導(dǎo)的稀有鮈鯽血清中成功的純化了卵黃蛋白原，并制備了相應(yīng)的多單克隆抗體。免疫印跡分析結(jié)果表明，制備的多單克隆抗體具有很高的特異性，其不與稀有鮈鯽血清中的其他蛋白結(jié)合。優(yōu)化多個實驗參數(shù)后，分別建立了基于稀有鮈鯽卵黃蛋白原多單克隆抗體的間接競爭酶聯(lián)免疫吸附方法：方法的檢測限分別為2.2和2.6ngmL，線性范圍分別為3.98000和3.92000ngmL(R20